【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于植物基因工程，具體涉及耐高溫棉花種質ghcki-pro5和ghcki-pro6的創制方法及應用。
技術介紹
1、棉花是我國重要的經濟作物，然而目前夏季高溫發生頻率較高，高溫持續時間也會更長。棉花是喜溫作物，但劇烈的高溫脅迫會造成棉花生育期生理活動紊亂，影響棉花的品質及產量，甚至造成植株死亡。高溫既影響營養生長也影響生殖生長，但相較于葉片等營養器官，高溫對生殖器官的影響更為嚴重(ahmad?et?al.,2021)。植物的生殖器官包括雌蕊和雄蕊，當遭受高溫脅迫時，雄蕊相比于雌蕊對高溫更加敏感(zhang?et?al.,2021)。高溫會導致花粉活力下降、花藥不開裂、蕾鈴脫落等，進而影響結實率和種子產量。此外，高溫還會導致纖維長度和強度降低，影響棉花品質。因此創制棉花耐高溫種質顯得極為必要。
2、目前，棉花耐高溫育種主要采用傳統育種方法和轉基因技術。傳統育種方法周期長、效率低，難以滿足快速育種的需求。轉基因技術可以有效的將耐高溫基因導入棉花，但存在一定的安全性和倫理問題。因此研發一種安全、快速獲得耐高溫棉花種質的方法是現階段解決的技術問題。
技術實現思路
1、有鑒于此，本專利技術的目的在于提供了耐高溫棉花種質ghcki-pro5和ghcki-pro6的創制方法及應用，本專利技術通過crispr/lbcpf1基因編輯技術獲得含編輯后ghcki基因啟動子的植株在高溫下仍能保持一定的育性，保持了高溫下棉花產量，為棉花耐高溫育種提供了重要的種質資源。
2、
3、本專利技術提供一種棉花耐高溫編輯后ghcki基因啟動子，所述編輯后ghcki基因啟動子的核苷酸序列如seq?id?no.4或seq?id?no.5所示。
4、本專利技術提供所述的編輯后ghcki基因啟動子在創制棉花耐高溫株系中的應用。
5、本專利技術提供一種編輯棉花ghcki基因啟動子的sgrna，所述sgrna的核苷酸序列如seq?id?no.6所示。
6、本專利技術提供一種重組表達載體，包括所述的sgrna。
7、優選的，將所述的sgrna通過infusion體系連接至crispr/lbcpf1載體上，得到重組表達載體。
8、本專利技術提供一種重組菌，包含所述的重組表達載體。
9、本專利技術提供所述的sgrna或所述的重組表達載體或所述的重組菌在創制棉花耐高溫株系中的應用。
10、本專利技術提供一種創制棉花耐高溫株系的方法，包括如下步驟：將所述重組表達載體通過轉基因的方式轉化至野生棉花植株中，得到ghcki基因啟動子被編輯后的棉花耐高溫株系。
11、優選的，所述轉基因的方式包括農桿菌介導法。
12、本專利技術提供所述的方法在創制棉花耐高溫株系中的應用。
13、與現有技術相比，本專利技術具有如下有益效果：
14、本專利技術通過crispr/lbcpf1基因編輯技術敲除ghcki基因啟動子區域myb轉錄因子結合位點側翼序列或myb轉錄因子結合位點，獲得編輯后ghcki基因啟動子，含有該編輯后ghcki基因啟動子的棉花植株在高溫下仍能保持一定的育性，保持了高溫下棉花產量，為棉花耐高溫育種提供了重要的種質資源。
15、進一步的，本專利技術基于ghcki基因啟動子編輯創制棉花耐高溫種質的方法具有操作簡便、效率高、安全性好等優點，為棉花耐高溫育種提供了一種新的技術手段。而基因編輯技術中cpf1蛋白可以識別富含堿基t的5＇端的pam序列，相較于cas9識別富含堿基g的3＇端pam序列(ngg)，t堿基在生物基因組中有更廣覆蓋率，尤其啟動子中富含t序列，為我們編輯啟動子提供了新的思路。
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1.一種棉花耐高溫編輯后GhCKI基因啟動子，其特征在于，所述編輯后GhCKI基因啟動子的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.4或SEQ?ID?NO.5所示。
2.權利要求1所述的編輯后GhCKI基因啟動子在創制棉花耐高溫株系中的應用。
3.一種編輯棉花GhCKI基因啟動子的sgRNA，其特征在于，所述sgRNA的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.6所示。
4.一種重組表達載體，其特征在于，包括權利要求3所述的sgRNA。
5.如權利要求4所述的重組表達載體，其特征在于，將所述的sgRNA通過infusion體系連接至CRISPR/LbCpf1載體上，得到重組表達載體。
6.一種重組菌，其特征在于，包含權利要求4或5所述的重組表達載體。
7.如權利要求3所述的sgRNA或權利要求4或5所述的重組表達載體或權利要求6所述的重組菌在創制棉花耐高溫株系中的應用。
8.一種創制棉花耐高溫株系的方法，其特征在于，包括如下步驟：
9.如權利要求8所述的方法，其特征在于，所述轉基因的方式包括農桿菌介導法。
10.如權利要求8或9所述的方法在創制棉花耐高溫株系中的應用。
...【技術特征摘要】
1.一種棉花耐高溫編輯后ghcki基因啟動子，其特征在于，所述編輯后ghcki基因啟動子的核苷酸序列如seq?id?no.4或seq?id?no.5所示。
2.權利要求1所述的編輯后ghcki基因啟動子在創制棉花耐高溫株系中的應用。
3.一種編輯棉花ghcki基因啟動子的sgrna，其特征在于，所述sgrna的核苷酸序列如seq?id?no.6所示。
4.一種重組表達載體，其特征在于，包括權利要求3所述的sgrna。
5.如權利要求4所述的重組表達載體，其特征在于，將所述的sgrna...
【專利技術屬性】
技術研發人員：閔玲，付一諾，李焱龍，范亞茹，楊靜，孔杰，郭小平，梁亞軍，張銀寶，朱龍付，張獻龍，
申請(專利權)人：華中農業大學，
類型：發明
國別省市：
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