【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)屬于基因工程疫苗領(lǐng)域，具體涉及共同表達(dá)新城疫病毒f基因和傳染性法氏囊病毒超強(qiáng)毒株vp2基因的重組馬立克氏病病毒及其應(yīng)用。
技術(shù)介紹
1、雞新城疫（nd）是由新城疫病毒（ndv）引起的雞的一種急性、高度接觸性、烈性傳染病。該病是目前危害養(yǎng)雞業(yè)最嚴(yán)重的疾病之一，也是我國中長期動(dòng)物疫病防治規(guī)劃中優(yōu)先防治和重點(diǎn)防范的禽病。ndv編碼的f蛋白是ndv包膜上的糖蛋白，是ndv主要的毒力基因和宿主保護(hù)性抗原，能夠誘導(dǎo)產(chǎn)生中和抗體。自80年代以來，我國規(guī)模化養(yǎng)雞場采用了對nd高頻率密集型免疫的程序。然而，傳統(tǒng)nd疫苗易于受到母源抗體干擾而免疫持續(xù)期不長，使得現(xiàn)地nd疫苗必須要多次免疫才能達(dá)到免疫效果，從而增加了雞群免疫壓力與養(yǎng)殖負(fù)擔(dān)。當(dāng)前迫切需要研制不受母源抗體干擾、免疫持續(xù)期長，且對流行的基因vii型ndv具有良好免疫效果的新型nd疫苗。
2、雞傳染性法氏囊病（ibd）是由傳染性法氏囊病病毒（ibdv）引起的一種主要危害雛雞的急性、高度接觸性傳染病。該病1979?年傳入我國，至80?年代末，歐洲與我國相繼出現(xiàn)了超強(qiáng)毒株（vvibdv），該類毒株致死率高達(dá)60%以上并引起更嚴(yán)重的免疫抑制，給世界養(yǎng)禽業(yè)造成了巨大損失。ibdv編碼的vp2蛋白是ibdv唯一的衣殼蛋白，也是ibdv主要的毒力基因和宿主保護(hù)性抗原，能夠誘導(dǎo)產(chǎn)生中和抗體。目前用于預(yù)防ibd的疫苗主要是傳統(tǒng)的滅活疫苗和弱毒活疫苗。滅活疫苗免疫持續(xù)期短，需要多次加強(qiáng)免疫；弱毒活疫苗免疫效果易于受到母源抗體干擾，中毒力活疫苗副作用大，能夠引起接種雞法氏囊損傷和免疫抑制。
3、馬立克氏病病毒（mdv）能引起雞的一種高度傳染性、淋巴組織增生性、免疫抑制性腫瘤病，其中，血清1型mdv弱毒活疫苗cvi988株在國內(nèi)外被廣泛用于雞馬立克氏病的防控。mdv基因組大，可供外源基因插入或替換的復(fù)制非必需基因多，是一種理想的構(gòu)建重組活載體疫苗的病毒載體。基于mdv載體的重組病毒疫苗能有效克服滅活疫苗和弱毒活疫苗免疫效果易受母源抗體干擾的缺陷。同時(shí)，mdv接種后終身帶毒，可持續(xù)表達(dá)外源蛋白抗原并誘導(dǎo)產(chǎn)生抗體，從而使機(jī)體產(chǎn)生持久的免疫力。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
1、本專利技術(shù)的目的在于提供一種共同表達(dá)新城疫病毒f基因和傳染性法氏囊病毒超強(qiáng)毒株vp2基因的重組馬立克氏病病毒。
2、本專利技術(shù)的目的還在于提供一種共同表達(dá)新城疫病毒f基因和傳染性法氏囊病毒超強(qiáng)毒株vp2基因的重組馬立克氏病病毒的構(gòu)建方法。
3、本專利技術(shù)的目的還在于提供一種共同表達(dá)新城疫病毒f基因和傳染性法氏囊病毒超強(qiáng)毒株vp2基因的重組馬立克氏病病毒的應(yīng)用。
4、為實(shí)現(xiàn)以上技術(shù)目的，本專利技術(shù)采用如下技術(shù)方案：
5、一種共同表達(dá)新城疫病毒f基因和傳染性法氏囊病毒超強(qiáng)毒株vp2基因的重組馬立克氏病病毒，所述重組馬立克氏病病毒是將包含雞β肌動(dòng)蛋白啟動(dòng)子、新城疫病毒f基因和傳染性法氏囊病毒超強(qiáng)毒株vp2基因編碼序列f2av2、土撥鼠肝炎病毒轉(zhuǎn)錄后調(diào)節(jié)序列、兔β球蛋白多聚腺苷酸序列的表達(dá)框架cagw-f2av2插入馬立克氏病病毒基因組后獲得。
6、所述編碼序列f2av2是由新城疫病毒f基因編碼序列和傳染性法氏囊病毒超強(qiáng)毒株vp2基因編碼序列以豬捷申病毒2a自剪切肽編碼序列連接獲得，所述編碼序列f2av2的核苷酸序列如seq?id?no.1所示。
7、所述表達(dá)框架cagw-f2av2是將f2av2克隆入pcaggs載體的雞β肌動(dòng)蛋白啟動(dòng)子和兔β球蛋白多聚腺苷酸序列之間，并將土撥鼠肝炎病毒轉(zhuǎn)錄后調(diào)節(jié)序列插入f2av2序列與兔β球蛋白多聚腺苷酸序列之間獲得，所述表達(dá)框架cagw-f2av2的核苷酸序列如seq?id?no.2所示。
8、所述重組馬立克氏病病毒是將含有馬立克氏病病毒cvi988株基因組dna片段的重組黏粒c1、c2、c3、c5、c6以及含有新城疫病毒f基因和傳染性法氏囊病毒超強(qiáng)毒株vp2基因表達(dá)框架的重組黏粒c4-45-f2av2共轉(zhuǎn)染cef細(xì)胞后，通過病毒拯救獲得的；所述的重組黏粒c1、c2、c3、c5、c6分別含有馬立克氏病病毒cvi988株基因組第1-37644位、第29969-68579位、第60962-99647位、第115670-152340、第143712-178311位核苷酸片段；所述的重組黏粒c4-45-f2av2是在c4的基礎(chǔ)上，在cvi988株基因組ul45和ul46基因之間插入表達(dá)框架cagw-f2av2后獲得的，所述的重組黏粒c4包含cvi988株基因組第91415-126182位核苷酸片段。
9、一種所述的共同表達(dá)新城疫病毒f基因和傳染性法氏囊病毒超強(qiáng)毒株vp2基因的重組馬立克氏病病毒在制備新城疫、雞傳染性法氏囊病和雞馬立克氏病疫苗中的應(yīng)用。
10、本專利技術(shù)利用重組克隆技術(shù)，將包含新城疫病毒基因vii型毒株f基因和傳染性法氏囊病毒超強(qiáng)毒株vp2基因的表達(dá)框架插入到馬立克氏病病毒cvi988株基因組ul45和ul46基因之間的間隔區(qū)中，構(gòu)建了共同表達(dá)新城疫病毒f基因和傳染性法氏囊病毒超強(qiáng)毒株vp2基因的重組馬立克氏病病毒疫苗株c20101株。將該重組病毒疫苗株免疫無特定病原體（spf）雞后，能使spf雞獲得對新城疫病毒、傳染性法氏囊病毒以及馬立克氏病病毒的免疫保護(hù)，可以用于新城疫、雞傳染性法氏囊病和馬立克氏病疫苗的制備。
11、本專利技術(shù)提供的重組馬立克氏病病毒株制備的疫苗能夠同時(shí)提供針對新城疫病毒、傳染性法氏囊病毒以及馬立克氏病病毒感染的多重保護(hù)，具有良好的市場應(yīng)用前景。
本文檔來自技高網(wǎng)...【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
1.一種共同表達(dá)新城疫病毒F基因和傳染性法氏囊病毒超強(qiáng)毒株VP2基因的重組馬立克氏病病毒，其特征在于，所述重組馬立克氏病病毒是將包含雞β肌動(dòng)蛋白啟動(dòng)子、新城疫病毒F基因和傳染性法氏囊病毒超強(qiáng)毒株VP2基因編碼序列F2AV2、土撥鼠肝炎病毒轉(zhuǎn)錄后調(diào)節(jié)序列、兔β球蛋白多聚腺苷酸序列的表達(dá)框架CAGW-F2AV2插入馬立克氏病病毒基因組后獲得的；
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的共同表達(dá)新城疫病毒F基因和傳染性法氏囊病毒超強(qiáng)毒株VP2基因的重組馬立克氏病病毒，其特征在于，所述重組馬立克氏病病毒是將含有馬立克氏病病毒CVI988株基因組DNA片段的重組黏粒C1、C2、C3、C5、C6以及含有新城疫病毒F基因和傳染性法氏囊病毒超強(qiáng)毒株VP2基因表達(dá)框架的重組黏粒C4-45-F2AV2共轉(zhuǎn)染CEF細(xì)胞后，通過病毒拯救獲得的；所述的重組黏粒C1、C2、C3、C5、C6分別含有馬立克氏病病毒CVI988株基因組第1-37644位、第29969-68579位、第60962-99647位、第115670-152340、第143712-178311位核苷酸片段；所述的重組黏粒C4-45-F2AV2
3.一種如權(quán)利要求1所述的共同表達(dá)新城疫病毒F基因和傳染性法氏囊病毒超強(qiáng)毒株VP2基因的重組馬立克氏病病毒在制備新城疫、雞傳染性法氏囊病和雞馬立克氏病疫苗中的應(yīng)用。
...【技術(shù)特征摘要】
1.一種共同表達(dá)新城疫病毒f基因和傳染性法氏囊病毒超強(qiáng)毒株vp2基因的重組馬立克氏病病毒，其特征在于，所述重組馬立克氏病病毒是將包含雞β肌動(dòng)蛋白啟動(dòng)子、新城疫病毒f基因和傳染性法氏囊病毒超強(qiáng)毒株vp2基因編碼序列f2av2、土撥鼠肝炎病毒轉(zhuǎn)錄后調(diào)節(jié)序列、兔β球蛋白多聚腺苷酸序列的表達(dá)框架cagw-f2av2插入馬立克氏病病毒基因組后獲得的；
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的共同表達(dá)新城疫病毒f基因和傳染性法氏囊病毒超強(qiáng)毒株vp2基因的重組馬立克氏病病毒，其特征在于，所述重組馬立克氏病病毒是將含有馬立克氏病病毒cvi988株基因組dna片段的重組黏粒c1、c2、c3、c5、c6以及含有新城疫病毒f基因和傳染性法氏囊病毒超強(qiáng)毒株vp2基因表達(dá)框架的重組黏粒c4-45-f2av2共...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：李凱，王笑梅，李曉涵，田世茂，李守軍，車艷杰，朱秀同，
申請(專利權(quán))人：中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院都市農(nóng)業(yè)研究所，
類型：發(fā)明
國別省市：
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