【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于微生物，涉及一種產苯乙醇、有機酸的梭菌及其用途。
技術介紹
1、β-苯乙醇(phenylethyl?alcohol)，分子式為c8h10o，分子量為122.17。為無色粘稠液體，沸點219℃，相對密度1.0230，折光率1.5310～1.5340。在蘋果、杏仁、香蕉、桃子、梨子、草莓、可可、蜂蜜等天然植物中發現。具有柔和、愉快而持久的玫瑰香氣，作為香料在食品香精、化妝品、洗滌產品中得到廣泛應用。同時，β－苯乙醇也是白酒、黃酒、清酒、果酒、葡萄酒、醬油、面包、干酪等傳統發酵食品中重要的呈味物質，如在米香型白酒中其為主體香。且β－苯乙醇不僅在濃香型白酒、醬香型白酒、豉香型白酒和黃酒等是重要的特征性風味物質，而且對這些發酵食品的其它風味物質起到協和及增效的作用。
2、目前，已經發現兩條微生物代謝產苯乙醇的途徑，主要有莽草酸途徑和艾氏途徑：莽草酸途徑是釀酒酵母從頭合成β-苯乙醇的代謝途徑，底物是糖酵解途徑的磷酸烯醇式丙酮酸和磷酸戊糖途徑的4-磷酸赤蘚糖；艾氏途徑是酵母以l-苯丙氨酸為前體，通過氨基轉移酶和脫羧酶合成β-苯乙醇。此前，對于發酵產苯乙醇的微生物的研究主要集中在好氧環境中各類酵母發酵產苯乙醇。醬香型白酒釀造微生物體系復雜，窖泥中厭氧微生物需要較為嚴苛的分離及培養條件。對于窖底厭氧環境中苯乙醇產生菌進行分離篩選和應用的報道較少。而有機酸對于釀造過程也起著至關重要的作用。
3、基于此，本專利技術旨在提供一株可以高產苯乙醇、以及多種有機酸的梭菌。
技術實現思路
1、本專利技術目的在于提供一株在實際釀造環境下，能夠代謝產生豐富的有機酸、苯乙醇等物質的梭菌。該梭菌篩選分離自窖泥中，可以利用各種糖和乳酸快速轉化為各類有機酸，也能夠在嚴格厭氧的條件下，有效利用苯丙氨酸迅速合成苯乙醇。一方面，可以利用該菌的特性將其用于釀酒過程，有利于改善白酒風味和品質；另一方面，可以利用梭菌mcgm113能夠在嚴格厭氧的條件下，有效利用苯丙氨酸迅速合成苯乙醇的特性，將其用于釀酒過程中，轉化窖池中積累的苯丙氨酸為苯乙醇，即用于釀酒窖池中，在窖泥的熟化和改良方面也有其重要價值。
2、一方面，本專利技術提供了一株梭菌(clostridium?sp.)mcgm113。
3、該菌株已經于2023年07月04日保藏于中國微生物菌種保藏管理會普通微生物中心，保藏編號為cgmcc?no.1.18018，保藏地址為：北京市朝陽區北辰西路1號院3號，分類命名為clostridium?sp.mcgm113。
4、1)菌株來源：本專利技術所獲得的這株梭菌篩選分離自醬香型白酒釀造過程中，具體從釀酒窖泥中篩選分離得到，具有生長迅速，適應性好，具有可以產豐富的有機酸、苯乙醇等物質且產量高等特性。
5、2)菌落特征：所述的梭菌mcgm113在72小時平板培養后，呈半透明圓形菌落，光滑，直徑1-2mm，邊緣整齊，易挑取。
6、3)菌體特征：所述的梭菌mcgm113，呈革蘭氏陽性，產芽孢，端生鞭毛，可運動，菌體桿狀，長2-4um，寬0.4-0.5um。
7、4)生理生化特征：所述梭菌mcgm113，通過biolog?an?microplate厭氧鑒定系統分析得出該菌的生理生化特征為：能利用d-果糖、d-半乳糖、d-半乳糖醛酸、α-d-葡萄糖、d-甘露糖、異麥芽酮糖、β羥基丁酸、丙酮酸甲酯以及l-谷氨酸等。
8、5)耐受性：所述的梭菌mcgm113的最適宜生長溫度為37-42℃，耐受溫度超過45℃；所述梭菌菌株mcgm113可在ph為4.5-8范圍內生長繁殖，最適生長ph為7.0；所述梭菌菌株mcgm113的最高耐受鹽度為2％，最適生長鹽度0.5％。
9、另一方面，本專利技術還提供了一種包含所述梭菌mcgm113的發酵劑或窖泥。
10、在一些實施方案中，所述發酵劑包含所述梭菌mcgm113的活細胞、干菌體、濕菌體、固定化的細胞、液體發酵劑、固體發酵劑，或者以其他任意形式存在的梭菌mcgm113。
11、在一些實施方案中，所述發酵劑還含有其它類型的細菌或真菌和/或酵母和/或曲霉。
12、再另一方面，本專利技術還提供了一種所述梭菌mcgm113在發酵領域的用途。
13、在一些實施方案中，所述發酵領域包括制備白酒、黃酒、清酒、果酒、葡萄酒、醬油、面包、干酪。
14、在一些實施方案中，所述發酵領域包括：發酵釀酒。
15、在一些實施方案中，所述釀酒包括釀造白酒、黃酒、清酒、果酒、葡萄酒；優選地，所述釀造白酒包括釀造濃香型白酒、醬香型白酒、豉香型白酒。
16、再另一方面，本專利技術還提供了一種所述梭菌mcgm113在產苯乙醇和/或產有機酸方面的用途。
17、在一些實施方案中，所述產苯乙醇包括：通過莽草酸途徑或艾氏途徑產苯乙醇。
18、在一些實施方案中，所述產苯乙醇包括：利用糖或苯丙氨酸或l-苯丙氨酸發酵產苯乙醇。
19、在一些實施方案中，所述產有機酸包括利用碳源產有機酸。
20、在一些實施方案中，所述有機酸包括異丙醇、乙酸、丙酸、異丁酸、丁酸、異戊酸、戊酸、苯乙酸、苯丙酸、棕櫚酸以及硬脂酸中的至少一種或者多種。
21、本專利技術還提供了所述梭菌mcgm113在人工窖泥培育中的用途。
22、再另一方面，本專利技術還提供了一種人工窖泥的培育方法，包含加入所述梭菌mcgm113的步驟。
23、在一些實施方案中，所述人工窖泥培育包括窖泥的熟化和/或改良。
24、在一些實施方案中，所述方法包括如下步驟：
25、(1)取窖泥，將其制備為窖泥水懸液，滅菌；
26、(2)將所述梭菌mcgm113的菌液加入所述窖泥水懸液中，進行厭氧培養，得到培育后的窖泥。
27、在一些實施方案中，所述步驟(1)中，所述窖泥水懸液的制備方法包括如下步驟：將所述窖泥置于厭氧瓶中，加入厭氧化的蒸餾水浸沒所述窖泥，劇烈震蕩，得到所述窖泥水懸液。
28、在一些實施方案中，所述厭氧化的蒸餾水為在蒸餾水中加入0.1％半胱氨酸鹽酸鹽后滅菌得到。
29、在一些實施方案中，所述步驟(2)中，所述梭菌mcgm113的菌液通過如下步驟制備得到：
30、1)取培養到對數期的梭菌mcgm113，厭氧下離心，棄去上層懸液；
31、2)用5-15倍于所述梭菌mcgm113菌體體積的厭氧化的pbs重懸，高速離心，重復2-5次；
32、3)取所述離心后的菌體，再次重懸，得到所述菌液。
33、在一些實施方案中，所述厭氧化的pbs為向所述pbs中加入0.1％半胱氨酸鹽酸鹽后滅菌得到。
34、在一些實施方案中，所述高速離心轉速為6000g-10000g。
35、綜上所述，本申請包括以下至少一種有益技術效果：
36、(1)本專利技術從白酒釀造窖泥中篩選到一株本文檔來自技高網...
【技術保護點】
1.一株梭菌(Clostridiumsp.)mCGM113，已于2023年07月04日保藏于中國微生物菌種保藏管理會普通微生物中心，保藏編號為CGMCCNo.1.18018。
2.包含如權利要求1所述梭菌mCGM113的發酵劑。
3.如權利要求2所述的發酵劑，其特征在于，包含所述梭菌mCGM113的活細胞和/或干菌體和/或濕菌體和/或固定化的細胞和/或液體菌劑和/或固體菌劑。
4.如權利要求1所述梭菌mCGM113或如權利要求2-3任一所述的發酵劑在發酵領域的用途。
5.如權利要求4所述的用途，其特征在于，所述發酵領域包括制備白酒、黃酒、清酒、果酒、葡萄酒、醬油、面包、干酪。
6.如權利要求4所述的用途，其特征在于，所述發酵領域包括：發酵釀酒；或/
7.如權利要求1所述梭菌mCGM113或如權利要求2-3任一所述的發酵劑在發酵產苯乙醇和/或產有機酸方面的用途；或/
8.如權利要求7所述的用途，其特征在于，所述有機酸包括異丙醇、乙酸、丙酸、異丁酸、丁酸、異戊酸、戊酸、苯乙酸、苯丙酸、棕櫚酸以及硬脂酸
9.如權利要求1所述梭菌mCGM113在人工窖泥培育中的用途；或/
10.一種人工窖泥的培育方法，其特征在于，包含加入如權利要求1所述的梭菌mCGM113的步驟；或/
...【技術特征摘要】
1.一株梭菌(clostridiumsp.)mcgm113，已于2023年07月04日保藏于中國微生物菌種保藏管理會普通微生物中心，保藏編號為cgmccno.1.18018。
2.包含如權利要求1所述梭菌mcgm113的發酵劑。
3.如權利要求2所述的發酵劑，其特征在于，包含所述梭菌mcgm113的活細胞和/或干菌體和/或濕菌體和/或固定化的細胞和/或液體菌劑和/或固體菌劑。
4.如權利要求1所述梭菌mcgm113或如權利要求2-3任一所述的發酵劑在發酵領域的用途。
5.如權利要求4所述的用途，其特征在于，所述發酵領域包括制備白酒、黃酒、清酒、果酒、...
【專利技術屬性】
技術研發人員：陳良強，羅莎，黃旭，蒲秀鑫，呂錫斌，周楠，楊帆，劉雙江，王莉，萬波，
申請(專利權)人：貴州茅臺酒股份有限公司，
類型：發明
國別省市：
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