【技術實現步驟摘要】
技術介紹
1、在全球范圍內，超過4億人長期感染hbv，且因此處于患上嚴重肝病(例如慢性肝炎、肝硬化、肝衰竭和肝細胞癌(hcc))的增大風險中，導致估計每年60萬人死亡。
2、慢性hbv感染的自然演變包括四個連續的階段：(1)早期的“免疫耐受”階段，高水平的病毒復制和極少的肝臟炎癥；(2)免疫反應期，明顯的肝臟炎癥和血清轉氨酶升高；一些患者進展至(3)“非復制”階段，血清轉化為抗hbe，檢測不到或低水平病毒血癥(2000iu/ml以下，通過基于pcr的測定方法)，并且肝臟炎癥消退；(4)hbeag陰性的慢性乙型肝炎，原因是出現了特定的病毒突變，其阻止了hbeag的產生，但不妨礙病毒復制。這種形式的慢性乙型肝炎(chb)的特征在于波動的血清hbv?dna和血清轉氨酶(alt和ast)水平和進行性肝病。重要的是注意，chb可能以hbeag陽性或hbeag陰性chb呈現。對chb患者的縱向研究表明，發生肝硬化的5年累積發病率為8％-20％。肝失代償的5年累積發病率約為20％。世界范圍的hcc發病率增加了，且目前構成第五種最常見的癌癥。hbv相關hcc的年發病率很高，肝硬化形成時范圍為2-5％。
3、hbv治療的主要目標是永久地抑制hbv復制并改善肝臟疾病。臨床上重要的短期目標是實現hbeag-血清轉化、血清alt和ast的正常化、肝臟炎癥的消退以及防止肝失代償。治療的最終目標是獲得持久的反應以防止發生肝硬化和肝癌從而延長生存期。由于感染肝細胞的細胞核中特定形式的病毒共價閉合環狀dna(ccchbv?dna)的持
4、目前治療hbv的標準方法包括基于干擾素或胸腺素α1的免疫療法，以及通過抑制hbv聚合酶來抑制病毒產生。hbv聚合酶抑制劑有效減少病毒產生，但在迅速降低hbsag方面幾乎沒有效果，或在長期治療時在有限數量的患者中可緩慢降低hbsag(如在使用富馬酸替諾福韋二吡呋酯的情況中)。基于干擾素的免疫療法可以實現病毒產生的減少和hbsag從血液的早期去除，但僅在少部分治療的受試者中是這樣。hbsag在血液中一般公認的作用是隔絕抗hbsag抗體，并使傳染性病毒顆粒逃脫免疫檢測，這很可能是hbv感染保持慢性狀況的原因之一。此外，hbsag，hbeag和hbcag都具有免疫抑制特性，在施用任何當前可用的hbv治療后這些病毒蛋白在患者血液中的持久存在可能對阻止患者獲得對其hbv感染的免疫控制有重要影響。
5、盡管三種主要的hbv蛋白(hbsag、hbeag和hbcag)均具有免疫抑制特性，但hbsag構成了hbv感染受試者的血液循環中的絕大多數hbv蛋白。此外，雖然hbeag的清除(通過血清轉化)或血清病毒血癥減輕與形成對脫離治療的hbv感染的持續控制無關，但是在hbv感染中從血液清除血清hbsag(和血清轉化)是治療(其導致對脫離治療的hbv感染的控制)的抗病毒反應的公認的預后指標(盡管這僅在一小部分接受免疫治療的患者中發生)。因此，雖然所有三種主要hbv蛋白(hbsag、hbeag和hbcag)的減少可導致抑制性效應的最佳去除，但是單獨的hbsag去除本身可能也足以在hbv感染的受試者中消除大部分對免疫功能的病毒抑制。
6、因此，在尚無可在大部分患者中恢復對hbv的免疫控制的任何現行治療方案的情況下，需要針對hbv感染的有效治療，該治療可在大多數患者中抑制病毒復制并恢復免疫控制。因此，在本領域中需要用于感染hbv或患有hbv相關疾病的受試者的替代療法和聯合療法。
技術實現思路
1、在一些實施方案中，本公開提供了雙鏈核糖核酸(dsrna)劑組合物，其影響乙型肝炎病毒(hbv)基因的rna轉錄物的rna誘導沉默復合物(risc)介導的切割。hbv基因可以在細胞內，例如在受試者(如人)體內的細胞內。
2、本公開還提供了使用dsrna劑組合物治療受益于抑制hbv基因表達的疾病，如hbv感染或hbv相關疾病，例如慢性乙型肝炎感染(chb)的受試者的方法和療法，所述dsrna組合物影響hbv基因的rna轉錄物的rna誘導沉默復合物(risc)介導的切割，從而抑制所述hbv基因的表達。
3、在一個方面，本公開提供了用于抑制hbv表達的dsrna劑。例如，本公開提供了一種dsrna劑，其包含形成雙鏈區的有義鏈和反義鏈，其中所述反義鏈包含如下示出的修飾的核苷酸序列：
4、5'-usgfsuga(agn)gcfgfaagugfcafcacsusu-3'(seq?id?no:16)，
5、5'-usgfsuga(agn)gcgaagugfdcafcacsusu-3'(seq?id?no:18)，
6、5'-usgfsudga(agn)gcfgfaagugfcafcacsusu-3'(seq?id?no:20)，
7、5'-usgfsudgadagdcgfaagugfcafcacsusu-3'(seq?id?no:23)，
8、5'-usgfsuga(agn)dgcfgfaagugfcafcacsusu-3'(seq?id?no:24)，
9、5'-usgfsudgadagdcgfaagugfcafdcacsusu-3'(seq?id?no:25)，或
10、5'-usgfsuga(agn)gcfgfaagugfdcafcacsusu-3'(seq?id?no:28)，
11、其中a、c、g和u分別為2’-o-甲基腺苷-3’-磷酸、2’-o-甲基胞苷-3’-磷酸、2’-o-甲基鳥苷-3’-磷酸和2’-o-甲基尿苷-3’-磷酸；
12、af、cf、gf和uf分別為2’-氟代腺苷-3’-磷酸、2’-氟代胞苷-3’-磷酸、2’-氟代鳥苷-3’-磷酸和2’-氟代尿苷-3’-磷酸；
13、da、dc、dg和dt分別為2’-脫氧腺苷-3’-磷酸、2’-脫氧胞苷-3’-磷酸、2’-脫氧鳥苷-3’-磷酸和2’-脫氧胸苷-3’-磷酸；
14、(agn)是腺苷-二醇核酸(gna)；并且
15、s是硫代磷酸酯連接(phosphorothioate?linkage)。
16、在一些實施方案中，有義鏈包含修飾的核苷酸序列5'-gsusgugfcafcfufucgcuucaca-3'(seq?id?no：29)，
17、其中a、c、g和u分別為2’-o-甲基腺苷-3’-磷酸、2’-o-甲基胞苷-3’-磷酸、2’-o-甲基鳥苷-3’-磷酸和2’-o-甲基尿苷-3’-磷酸；
18、af、cf、gf和uf分別為2’-氟代腺苷-3’-磷酸、2’-氟代胞苷-3’-磷酸、2’-氟代鳥苷-3’-磷酸和2’-氟代尿苷-3’-磷酸；并且
19、s是硫代磷酸酯連接(phosphorothioat本文檔來自技高網...
【技術保護點】
1.一種雙鏈核糖核酸(dsRNA)劑，其包含形成雙鏈區的有義鏈和反義鏈，其中所述反義鏈包含如下示出的修飾的核苷酸序列：
2.根據權利要求1所述的dsRNA劑，其中所述有義鏈包含修飾的核苷酸序列5'-gsusguGfcAfCfUfucgcuucaca-3'(SEQ?ID?NO：29)，
3.根據權利要求1所述的dsRNA劑，其中所述反義鏈和所述有義鏈包含如下示出的修飾的核苷酸序列：
4.根據權利要求1-3中任一項所述的dsRNA劑，其中至少一條鏈包含具有至少1個核苷酸的3'突出端。
5.根據權利要求1-3中任一項所述的dsRNA劑，其中至少一條鏈包含具有2個核苷酸的3'突出端。
6.根據權利要求1-5中任一項所述的dsRNA劑，其中所述雙鏈區的長度為19-21個核苷酸對。
7.根據權利要求1-6中任一項所述的dsRNA劑，其中每條鏈獨立地具有19-23個核苷酸。
8.根據權利要求7所述的dsRNA劑，其中每條鏈獨立地具有19-21個核苷酸。
9.根據權利要求1-8中任一項所述的dsRNA
10.根據權利要求9所述的dsRNA劑，其中所述配體綴合至所述dsRNA劑的有義鏈的3’端。
11.根據權利要求9或10所述的dsRNA劑，其中所述配體為N-乙酰半乳糖胺(GalNAc)衍生物。
12.根據權利要求11所述的dsRNA劑，其中所述配體是
13.根據權利要求12所述的dsRNA劑，其中如以下示意所示的，所述dsRNA劑綴合至所述配體：
14.根據權利要求13所述的dsRNA劑，其中X為O。
15.根據權利要求1所述的dsRNA劑，其中所述反義鏈由如下示出的修飾的核苷酸序列組成：
16.根據權利要求1所述的dsRNA劑，其中所述反義鏈和所述有義鏈由如下示出的修飾的核苷酸序列組成：
17.根據權利要求1所述的dsRNA劑，其中所述反義鏈和所述有義鏈由如下示出的修飾的核苷酸序列組成：
18.根據權利要求1-17中任一項所述的dsRNA劑，其中所述dsRNA劑抑制細胞中乙型肝炎病毒(HBV)的表達。
19.一種細胞，其包含權利要求1-18中任一項所述的dsRNA劑。
20.一種藥物組合物，其包含權利要求1-19中任一項所述的dsRNA劑和藥用賦形劑。
21.一種抑制細胞中乙型肝炎病毒(HBV)基因表達的方法，所述方法包括使所述細胞與權利要求1-18中任一項所述的dsRNA劑或權利要求20所述的藥物組合物接觸，從而抑制所述細胞中所述HBV基因的表達。
22.根據權利要求21所述的方法，其中所述HBV基因表達被抑制至少80％、90％、95％或98％，或被抑制至低于測定方法的檢測水平。
23.一種抑制細胞中乙型肝炎病毒(HBV)復制的方法，所述方法包括使所述細胞與權利要求1-18中任一項所述的dsRNA劑或權利要求20所述的藥物組合物接觸，從而抑制所述細胞中所述HBV的復制。
24.根據權利要求23所述的方法，其中所述細胞中HBV的復制被抑制至少80％、90％、95％或98％，或被抑制至低于測定方法的檢測水平。
25.根據權利要求21-24中任一項所述的方法，其中所述細胞在受試者體內。
26.根據權利要求25所述的方法，其中所述受試者是人。
27.根據權利要求26所述的方法，其中所述受試者患有HBV相關疾病。
28.根據權利要求21-24中任一項所述的方法，其中所述細胞在體外。
29.一種降低感染乙型肝炎病毒(HBV)的受試者中的HBV抗原水平的方法，所述方法包括向所述受試者施用治療有效量的權利要求1-18中任一項所述的dsRNA劑或權利要求20所述的藥物組合物，從而降低所述受試者中所述HBV抗原的水平。
30.根據權利要求29所述的方法，其中所述HBV抗原是HBsAg。
31.根據權利要求29所述的方法，其中所述HBV抗原是HBeAg。
32.根據權利要求29所述的方法，其中在來自所述受試者的血清中測量所述抗原。
33.根據權利要求29所述的方法，其中所述受試者是HBeAg陽性的。
34.根據權利要求29所述的方法，其中所述受試者是HBeAg陰性的。
35.根據權利要求29-34中任一項所述的方法，其中血清中所述HBV抗原水平降低至少1log10、至少2log10、至少3log10或至少4log10，或降低至低于測定方...
【技術特征摘要】
1.一種雙鏈核糖核酸(dsrna)劑，其包含形成雙鏈區的有義鏈和反義鏈，其中所述反義鏈包含如下示出的修飾的核苷酸序列：
2.根據權利要求1所述的dsrna劑，其中所述有義鏈包含修飾的核苷酸序列5'-gsusgugfcafcfufucgcuucaca-3'(seq?id?no：29)，
3.根據權利要求1所述的dsrna劑，其中所述反義鏈和所述有義鏈包含如下示出的修飾的核苷酸序列：
4.根據權利要求1-3中任一項所述的dsrna劑，其中至少一條鏈包含具有至少1個核苷酸的3'突出端。
5.根據權利要求1-3中任一項所述的dsrna劑，其中至少一條鏈包含具有2個核苷酸的3'突出端。
6.根據權利要求1-5中任一項所述的dsrna劑，其中所述雙鏈區的長度為19-21個核苷酸對。
7.根據權利要求1-6中任一項所述的dsrna劑，其中每條鏈獨立地具有19-23個核苷酸。
8.根據權利要求7所述的dsrna劑，其中每條鏈獨立地具有19-21個核苷酸。
9.根據權利要求1-8中任一項所述的dsrna劑，其還包含配體。
10.根據權利要求9所述的dsrna劑，其中所述配體綴合至所述dsrna劑的有義鏈的3’端。
11.根據權利要求9或10所述的dsrna劑，其中所述配體為n-乙酰半乳糖胺(galnac)衍生物。
12.根據權利要求11所述的dsrna劑，其中所述配體是
13.根據權利要求12所述的dsrna劑，其中如以下示意所示的，所述dsrna劑綴合至所述配體：
14.根據權利要求13所述的dsrna劑，其中x為o。
15.根據權利要求1所述的dsrna劑，其中所述反義鏈由如下示出的修飾的核苷酸序列組成：
16.根據權利要求1所述的dsrna劑，其中所述反義鏈和所述有義鏈由如下示出的修飾的核苷酸序列組成：
17.根據權利要求1所述的dsrna劑，其中所述反義鏈和所述有義鏈由如下示出的修飾的核苷酸序列組成：
18.根據權利要求1-17中任一項所述的dsrna劑，其中所述dsrna劑抑制細胞中乙型肝炎病毒(hbv)的表達。
19.一種細胞，其包含權利要求1-18中任一項所述的dsrna劑。
20.一種藥物組合物，其包含權利要求1-19中任一項所述的dsrna劑和藥用賦形劑。
21.一種抑制細胞中乙型肝炎病毒(hbv)基因表達的方法，所述方法包括使所述細胞與權利要求1-18中任一項所述的dsrna劑或權利要求20所述的藥物組合物接觸，從而抑制所述細胞中所述hbv基因的表達。
22.根據權利要求21所述的方法，其中所述hbv基因表達被抑制至少80％、90％、95％或98％，或被抑制至低于測定方法的檢測水平。
23.一種抑制細胞中乙型肝炎病毒(hbv)復制的方法，所述方法包括使所述細胞與權利要求1-18中任一項所述的dsrna劑或權利要求20所述的藥物組合物接觸，從而抑制所述細胞中所述hbv的復制。
24.根據權利要求23所述的方法，其中所述細胞中hbv的復制被抑制至少80％、90％、95％或98％，或被抑制至低于測定方法的檢測水平。
25.根據權利要求21-24中任一項所述的方法，其中所述細胞在受試者體內。
26.根據權利要求25所述的方法，其中所述受試者是人。
27.根據權利要求26所述的方法，其中所述受試者患有hbv相關疾病。
28.根據權利要求21-24中任一項所述的方法，其中所述細胞在體外。
29.一種降低感染乙型肝炎病毒(hbv)的受試者中的hbv抗原水平的方法，所述方法包括向所述受試者施用治療有效量的權利要求1-18中任一項所述的dsrna劑或權利要求20所述的藥物組合物，從而降低所述受試者中所述hbv抗原的水平。
30.根據權利要求29所述的方法，其中所述hbv抗原是hbsag。
31.根據權利要求29所述的方法，其中所述hbv抗原是hbeag。
32.根據權利要求29所述的方法，其中在來自所述受試者的血清中測量所述抗原。
33.根據權利要求29所述的方法，其中所述受試者是hbeag陽性的。
34.根據權利要求29所述的方法，其中所述受試者是hbeag陰性的。
35.根據權利要求29-34中任一項所述的方法，其中血清中所述hbv抗原水平降低至少1log10、至少2log10、至少3log10或至少4log10，或降低至低于測定方法的檢測水平。
36.一種減少感染乙型肝炎病毒(hbv)的受試者中的hbv病毒載量的方法，其包括向所述受試者施用治療有效量的權利要求1至18中任一項所述的dsrna劑或權利要求20所述的藥物組合物，從而降低所述受試者中的hbv病毒載量。
37.根據權利要求36所述的方法，其中在來自所述受試者的血清中測量所述hbv病毒載量。
38.根據權利要求36或37所述的方法，其中所述受試者是hbeag陽性的。
39.根據權利要求36或37所述的方法，其中所述受試者為hbeag陰性的。
40.根據權利要求36至39中任一項所述的方法，其中血清中所述hbv病毒載量降低至少1log10、至少2log10...
【專利技術屬性】
技術研發人員：V·R·賈達夫，M·A·邁爾，S·米爾斯坦，M·K·施萊格爾，
申請(專利權)人：阿爾尼拉姆醫藥品有限公司，
類型：發明
國別省市：
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