【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)屬于農(nóng)業(yè)應(yīng)用微生物，尤其涉及一種利用根際馬賽菌提高大豆含油量的方法。
技術(shù)介紹
1、大豆是最重要的油料作物之一，占全球食用油消費(fèi)總量的50％以上，同時(shí)也是全球主要的植物蛋白來源，由于全球油料市場對油的需求不斷增長，開發(fā)高油大豆品種已成為大豆育種項(xiàng)目的優(yōu)先任務(wù)，迄今為止，通過育種項(xiàng)目已經(jīng)開發(fā)了許多高產(chǎn)和高油質(zhì)量的改良品種，以滿足全球大豆生產(chǎn)的快速增長需求，但仍存在顯著的差距，鑒定與種子油質(zhì)量性狀相關(guān)的決定因素對改善大豆質(zhì)量性狀至關(guān)重要，最近的研究表明，植物馴化和農(nóng)藝性狀(如抗逆性和抗病性)的遺傳改良改變了根際微生物群落的結(jié)構(gòu)和功能，然而，目前尚不清楚種子品質(zhì)育種是否會(huì)影響根際微生物群落，以及根際微生物群落對種子品質(zhì)的貢獻(xiàn)是什么。
2、土壤是植物及其相關(guān)微生物的棲息地，也是它們相互作用的介質(zhì)，在一定程度上，宿主植物通過在土壤-根界面沉積特定的分泌物(根系分泌物)來驅(qū)動(dòng)微生物的選擇，根系分泌物是可溶性有機(jī)物質(zhì)的混合物，包括糖類、氨基酸、有機(jī)酸、脂肪酸、蛋白質(zhì)和其他次級代謝物，能夠作為營養(yǎng)物質(zhì)、抗菌物質(zhì)、趨化性或信號分子，協(xié)調(diào)根際微生物組成的變化，植物根系分泌物的組成和數(shù)量具有物種或品種特異性，并且在生命周期內(nèi)和應(yīng)對環(huán)境變化時(shí)顯著變化，這些變化對根際微生物群落施加選擇壓力，然而，目前關(guān)于質(zhì)量性狀、根系分泌和根際微生物組裝之間關(guān)系的知識非常有限，植物根際的微生物定殖可以賦予宿主多種生物功能，例如，固氮根瘤菌可以形成共生根瘤，為豆科宿主的生長提供氮源，這代表了宿主植物與根際細(xì)菌之間最高水平的互利關(guān)系。許多假單胞菌和芽孢
3、因此，有必要提供一種新的利用根際馬賽菌提高大豆含油量的方法解決上述技術(shù)問題。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
1、本專利技術(shù)解決的技術(shù)問題是提供一種通過提供了兩株具有促進(jìn)大豆含油量的馬賽菌，該菌屬能夠被高油大豆品種的根際所富集，并能夠促進(jìn)大豆的生長和提高含油量，有助于高效便捷地提升大豆的品質(zhì)和國家糧油產(chǎn)能需求的利用根際馬賽菌提高大豆含油量的方法。
2、為解決上述技術(shù)問題，本專利技術(shù)提供的利用根際馬賽菌提高大豆含油量的方法包括：微生物分離與鑒定、種子含油量與脂肪酸分析以及株高、根長和氮及油份含量檢測；
3、所述微生物分離與鑒定包括以下步驟：
4、1)、將1克未種植的新鮮土壤樣品與2毫升過濾消毒的合豐52根系分泌物一起裝入5毫升離心管中，在28℃、180r/min的振蕩條件下培養(yǎng)24h后，對樣品進(jìn)行10倍梯度稀釋，涂布在最小培養(yǎng)基，在28℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2-3天；
5、2)、根據(jù)形態(tài)和顏色挑選出具有代表性的克隆，純化后甘油保存在-80℃；
6、3)、對純化的菌過夜培養(yǎng)后提取dna，利用27f和1492r引物進(jìn)行16s?rrna基因擴(kuò)增并測序，對分離菌株進(jìn)行鑒定。
7、作為本專利技術(shù)的進(jìn)一步方案，所述種子含油量與脂肪酸分析包括以下步驟：
8、1)、將氯氣滅菌的種子種植在裝有土壤和營養(yǎng)土的混合物中并生長4天；
9、2)、給植物接種30毫升的混合馬賽菌懸浮液(od600＝0.1)，然后用相同體積的水作為對照，植物在20℃/28℃、夜/晝16h的光周期下生長，生長期間進(jìn)行正常的水肥處理，開花期間再次接種相同濃度的細(xì)菌懸浮液；
10、3)、種子成熟后，測量經(jīng)馬賽菌處理和未處理的植物種子的含油量，用正己烷研磨種子以提取脂質(zhì)，在37℃下培養(yǎng)5h后，在室溫下以11000r/min的轉(zhuǎn)速離心10分鐘；
11、4)、上清液在預(yù)先稱重的1.5毫升離心管中真空蒸發(fā)，直至達(dá)到恒定重量，此過程重復(fù)兩次，然后再次稱量離心管重量，將試管中的脂質(zhì)量除以種子重量，即可確定種子脂質(zhì)含量，然后使用氣相的方法測定種子脂肪酸含量。
12、作為本專利技術(shù)的進(jìn)一步方案，所述株高、根長和氮含量檢測包括以下步驟：
13、1)、將經(jīng)氯氣滅菌的大豆種子在無菌水瓊脂上發(fā)芽3天，隨后將植物移植到裝有馬塞菌m16或m117懸浮液(od600＝0.1)的蛭石盆中，以確保每盆一棵幼苗，以無菌水為對照；
14、2)、植物在20℃/28℃的16h光照下生長，并根據(jù)需要澆滅菌的水；
15、3)、生長15天后，用無氮(nf)、低氮(ln，0.25mm)和正常氮(nn，7.5mm)bd營養(yǎng)液處理幼苗；
16、4)、每種處理包括15株幼苗，生長15天后，對植物進(jìn)行取樣，以確定其高度和長度；
17、5)、隨后將樣品在105℃下干燥0.5h，然后在70℃下干燥，直到達(dá)到恒重，通過凱氏定氮法測定氮含量。
18、作為本專利技術(shù)的進(jìn)一步方案，所述最小培養(yǎng)基包含0.5g葡萄糖、0.5g多肽、0.5g谷氨酸鈉、0.5g酵母提取物、0.44g?k2hpo4、0.1g(nh4)2so4、0.1g?mgso4和ph?7.0。
19、作為本專利技術(shù)的進(jìn)一步方案，所述氯氣滅菌的種子和混合物的體積比為3：1，所述氯氣滅菌的種子為吉林查里花和合豐52。
20、作為本專利技術(shù)的進(jìn)一步方案，所述土壤可經(jīng)過高油品種根系分泌物處理并分離到2株候選菌株。
21、作為本專利技術(shù)的進(jìn)一步方案，所述>m117如下：
22、>m117
23、cggggatgctttacctgcagtcgaacggcagcgcggggcaacctggcggcgagtggcgaacgggtgagtaatatatcggaacgtacccaagagtgggggataacgtagcgaaagttacgctaataccgcatacgatctaaggatgaaagtgggggatcgcaagacctcatgctcctggagcggccgatatctgattagctagttggtgaggtaaaggctcaccaaggcgacgatcagtagctggtctgagaggacgaccagccacactgggactgagacacggcccagactcctacgggaggcagcagtggggaattttggacaatgggcgcaagcctgatccagcaatgccgcgtgagtgaagaaggccttcgggttgtaaagctcttttgtcagggaagaaacggctccggctaatatccggggctaatgacggtacctgaagaataagcaccggctaactacgtgccagcagccgcggtaa本文檔來自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
1.一種利用根際馬賽菌提高大豆含油量的方法，其特征在于，包括：
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用根際馬賽菌提高大豆含油量的方法，其特征在于：所述種子含油量與脂肪酸分析包括以下步驟：
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用根際馬賽菌提高大豆含油量的方法，其特征在于：所述株高、根長和氮含量檢測包括以下步驟：
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用根際馬賽菌提高大豆含油量的方法，其特征在于：所述最小培養(yǎng)基包含0.5g葡萄糖、0.5g多肽、0.5g谷氨酸鈉、0.5g酵母提取物、0.44g?K2HPO4、0.1g(NH4)2SO4、0.1gMgSO4和pH?7.0。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的利用根際馬賽菌提高大豆含油量的方法，其特征在于：所述氯氣滅菌的種子和混合物的體積比為3：1，所述氯氣滅菌的種子為吉林查里花和合豐52。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用根際馬賽菌提高大豆含油量的方法，其特征在于：所述土壤可經(jīng)過高油品種根系分泌物處理并分離到2株候選菌株。
7.根據(jù)權(quán)利要求3所述的利用根際馬賽菌提高大豆含油量的方法，其特征在于：所述>M11
8.根據(jù)權(quán)利要求3所述的利用根際馬賽菌提高大豆含油量的方法，其特征在于：所述>M16如下：
9.根據(jù)權(quán)利要求3所述的利用根際馬賽菌提高大豆含油量的方法，其特征在于：所述馬塞菌M117和M16在促進(jìn)大豆生長提高大豆含油量中的應(yīng)用。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的利用根際馬賽菌提高大豆含油量的方法，其特征在于：所述的馬塞菌在制備提高大豆產(chǎn)量和含油量的微生物菌劑，微生物肥料，生物肥料等產(chǎn)品中的應(yīng)用。
...【技術(shù)特征摘要】
1.一種利用根際馬賽菌提高大豆含油量的方法，其特征在于，包括：
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用根際馬賽菌提高大豆含油量的方法，其特征在于：所述種子含油量與脂肪酸分析包括以下步驟：
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用根際馬賽菌提高大豆含油量的方法，其特征在于：所述株高、根長和氮含量檢測包括以下步驟：
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用根際馬賽菌提高大豆含油量的方法，其特征在于：所述最小培養(yǎng)基包含0.5g葡萄糖、0.5g多肽、0.5g谷氨酸鈉、0.5g酵母提取物、0.44g?k2hpo4、0.1g(nh4)2so4、0.1gmgso4和ph?7.0。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的利用根際馬賽菌提高大豆含油量的方法，其特征在于：所述氯氣滅菌的種子和混合物的體積比為3：1，所述氯氣滅菌的種...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：李霞，韓琴，朱光輝，李明波，
申請(專利權(quán))人：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)，
類型：發(fā)明
國別省市：
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