【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于生物醫藥領域，具體涉及一種可用于共價偶聯到核酸干擾(rnai)藥物分子中的5’-端修飾的2’,5’-連接核苷酸及其應用。
技術介紹
1、rna干擾(rnai)是指在進化過程中高度保守的、由雙鏈rna(double-strandedrna，dsrna)誘發的、同源mrna高效特異性降解的現象(有時也通過反義寡核苷酸干擾實現)，可以使相應基因表達量下調，導致相應基因在轉錄后的沉默。
2、從基因水平上，通過rnai幾乎可以治療所有的疾病，包括腫瘤、傳染病、遺傳性疾病等等，因而rnai已成為最熱門的生物醫藥研究領域，也是未來最有發展前景的新藥開發方向。目前已有9款反義寡聚核酸(aso)藥物和6款sirna藥物作為rnai藥物進入了臨床應用。在抗感染、代謝和遺傳性疾病治療方面發揮著獨特的作用。
3、sirna響應機制是一種以核酸內切酶復合物為特征介導的rna干擾方式。該核酸內切酶復合物通常稱為rna誘導沉默復合物(risc)。risc通過結合sirna反義鏈，招募靶基因mrna并進行互補性配對，對靶基因mrna進行降解。
4、sirna優點在于可以靶向致病基因組中的任何基因，有強力和持久的藥理作用和療效，還可以顯著降低給藥頻率，提高患者用藥的依從性，從而達到更好的治療效果和更優的安全性。
5、然而，sirna療法在開發中也遇到了獨特的挑戰。除了如何將sirna藥物分子靶向遞送到其作用的細胞中外，還要使被遞送的sirna藥物分子安全、快速、持久地發揮藥效，即提高sirna分子的成
6、業已證明，小核酸藥物依靠獨特的化學修飾可以降低體內的免疫原性和脫靶效應；不同修飾位點對沉默效率、代謝穩定性影響也不盡相同。某些已知的修飾核苷酸單體在被引入到sirna小核酸序列中時，會提高rnai療效的安全窗口和/或活性。
7、另一方面，盡管目前的galnac平臺能夠高效地將sirna遞送到肝實質細胞中，但僅有很少的一部分sirna分子從內涵體逃逸，接著被裝載到細胞質中risc復合物中才能發揮其藥理作用。大量sirna分子其實被限制在內涵體內，因此，通過對核苷單體的化學修飾來增強小核酸分子的代謝穩定性，或提升逃逸后sirna分子的risc裝載效率(loadingefficiency)將無疑會進一步提高小核酸藥物分子的療效及成藥性能。
8、因此，本領域里對小核酸進行新穎修飾，特別是對于核苷單體新型的化學修飾有著十分重要的價值。
技術實現思路
1、為了進一步提升sirna的成藥性能，本專利技術通過新型核酸化學手段，對非常規核苷酸單體進行修飾，并引入到sirna序列之中，進一步優化sirna的成藥性，提升sirna藥物分子的治療療效。
2、除非有特別說明，在說明書和權利要求書中使用的術語具有下述含義。
3、術語：
4、如本專利技術所用，術語“烷基”指飽和脂肪族烴基團，其為含有1至6個碳原子的烷基。非限制性實施例則包括甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、叔丁基、仲丁基、正戊基、正己基等。烷基可以是取代的或非取代的，當被取代時，取代基可以在任何可使用的連接點上被取代，所述取代基優選為一個或多個以下基團，其獨立地選自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、鹵素、巰基、羥基、硝基、氰基、環烷基、雜環烷基、芳基、雜芳基、環烷氧基、雜環烷氧基、環烷硫基、雜環烷硫基、氧基、羧基或羧酸酯基。
5、如本專利技術所用，術語“烯基”指由至少由兩個碳原子和至少一個碳-碳雙鍵組成的、且取代位點必須在碳碳雙鍵的其中一個碳原子上的如上所述烷基。例如乙烯基、1-丙烯基、2-丙烯基、1-、2-或3-丁烯基等。烯基可以是取代的或非取代的，當被取代時，取代基優選為一個或多個以下基團，其獨立地選自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、鹵素、巰基、羥基、硝基、氰基、環烷基、雜環烷基、芳基、雜芳基、環烷氧基、雜環烷氧基、環烷硫基、雜環烷硫基。
6、如本專利技術所用，“小核酸”是含有約10-50個單鏈核苷酸或雙鏈核苷酸堿基對的寡聚核苷酸序列。在一些實施方式中，小核酸具有與細胞內表達的靶基因核心序列至少部分互補的核堿基序列。在一些實施方式中，寡核苷酸在遞送至表達靶基因的細胞后，能調控相應靶基因的表達。靶基因表達可以在體外或體內被調控。“小核酸”包括但不限于：寡核苷酸、單鏈寡核苷酸、單鏈反義寡核苷酸、短干擾rna(sirna)、雙鏈rna(dsrna)、微小rna(mirna)、短發夾rna(shrna)、核酶、干擾性rna分子和dicer酶底物。
7、如本專利技術所用，術語“寡核苷酸”和“多核苷酸”是指連接的核苷的聚合物，其中每一個核苷可獨立地被修飾或不被修飾。
8、如本專利技術所用，“rnai藥物”是指含有能夠以序列特異性方式降低或抑制信使rna(mrna)翻譯的rna或rna類(例如化學修飾的rna)寡核苷酸分子。
9、如本專利技術所用，rnai藥物可以通過rna干擾機制(例如通過與哺乳動物細胞的mrna干擾通路機制(rna誘導沉默復合物risc)的相互作用來誘導mrna降解)、或其它任意機制或通路發揮作用。雖然認為本專利技術所用的術語rnai藥物主要通過rna干擾機制發揮作用，但所述rnai藥物并不受限于或局限于任何特定的作用通路或機制。rnai藥物包括但不限于：單鏈寡核苷酸、單鏈反義寡核苷酸、短干擾rna(sirna)、雙鏈rna(dsrna)、微小rna(mirna)、短發夾rna(shrna)和dicer酶底物。本專利技術所述的rnai藥物由具有與作為靶標的mrna至少部分互補的寡核苷酸鏈構成。在一些實施方式中，本專利技術所述的rnai藥物是雙鏈的，且由反義鏈和與該反義鏈至少部分互補的正義鏈構成。
10、如本專利技術所用，術語“沉默”、“減少”、“抑制”、“下調”、或“敲減”指給定的基因表達時，用本專利技術所述的rnai藥物分子處理細胞、組織、器官或動物體內直接給藥時，與未經如此處理的細胞、組織、器官或動物體內給藥相比，基因的表達水平有所減少或下調。
11、如本專利技術所用，術語“序列”或“核苷酸序列”是指核苷酸堿基序列、或核苷酸的順序、或次序，使用標準核苷酸命名法以字母順序表示。
12、如本專利技術所用，“核苷酸堿基”或“核堿基”是雜環嘧啶或嘌呤化合物，其中常規核酸的標準組分，包括腺嘌呤(a)、鳥嘌呤(g)、胞嘧啶(c)、胸腺嘧啶(t)和尿嘧啶(u)常規核苷酸的堿基。核堿基可以被修飾或被新型非常規核堿基替代。
13、如本專利技術所用，術語“雜環堿基部分”是本專利技術所定義的、可替代核堿基的、新型含氮雜環堿基或修飾核堿基。在一些實施方式中，雜環堿基部分是嘧啶、取代的嘧啶、嘌呤或取代的嘌呤以及含氮雜環。在一些實施方式中，雜環堿基部分是非常規的嘌呤或取代的嘌呤。在一些實施方式中，雜環堿基部分是非常規的嘧啶或取代的嘧啶。在一些實施方式中，雜環堿基部分含有非天然五本文檔來自技高網...
【技術保護點】
1.一種化合物，其特征在于，具有通式I的結構：
2.根據權利要求1所述的化合物，其特征在于，具有通式II的結構：
3.根據權利要求2所述的化合物，其特征在于，所述的Bx為雜環堿基，優選地為修飾或未修飾的尿嘧啶、胸腺嘧啶、腺嘌呤、鳥嘌呤和胞嘧啶，更優選為尿嘧啶。
4.根據權利要求2所述的化合物，其特征在于，所述的PA為亞磷酰胺，所述的化合物為亞磷酰胺核苷酸單體，所述的化合物具有以下結構之一：
5.如權利要求2所述的化合物，其特征在于，所述化合物選自：
6.一種末端攜帶權利要求1-5任一項所示修飾核苷酸單體的RNAi分子。
7.根據權利要求6所述的RNAi分子，其特征在于，所述為RNAi分子為RNAi雙鏈分子。
8.根據權利要求7所述的RNAi分子，其特征在于，所述修飾核苷酸單體連接在反義鏈5’-末端1號位。
9.根據權利要求8所述的RNAi分子，其特征在于，所述RNAi分子選自以下通式III：
10.根據權利要求9所述的RNAi分子，其特征在于，所述通式中sp3?C-H或sp
11.權利要求1-5任一項所述的化合物或權利要求8-10任一項所述的RNAi分子在制備RNAi藥物中的應用。
12.包括權利要求8-10任一項所述的RNAi分子的綴合物、醫藥組合物、細胞或試劑盒。
13.一種RNAi藥物，所述RNAi藥物為通過權利要求1-5任一項所述的化合物制備的RNAi藥物。
...【技術特征摘要】
1.一種化合物，其特征在于，具有通式i的結構：
2.根據權利要求1所述的化合物，其特征在于，具有通式ii的結構：
3.根據權利要求2所述的化合物，其特征在于，所述的bx為雜環堿基，優選地為修飾或未修飾的尿嘧啶、胸腺嘧啶、腺嘌呤、鳥嘌呤和胞嘧啶，更優選為尿嘧啶。
4.根據權利要求2所述的化合物，其特征在于，所述的pa為亞磷酰胺，所述的化合物為亞磷酰胺核苷酸單體，所述的化合物具有以下結構之一：
5.如權利要求2所述的化合物，其特征在于，所述化合物選自：
6.一種末端攜帶權利要求1-5任一項所示修飾核苷酸單體的rnai分子。
7.根據權利要求6所述的rnai分子，其特征在于，所述為rnai分子為rnai雙鏈分子...
【專利技術屬性】
技術研發人員：李強，趙維峰，張婕婷，陳璞，
申請(專利權)人：納肽得青島生物醫藥有限公司，
類型：發明
國別省市：
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