【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及能夠長期儲存的肉毒桿菌毒素凍干劑型組合物，更具體地，涉及能夠長期儲存的包含肉毒桿菌毒素和硫酸魚精蛋白的復合物、等滲劑和緩沖劑的肉毒桿菌毒素凍干劑型組合物。
技術介紹
1、自19世紀90年代以來，已經發現了分泌具有神經毒性毒素的各種梭菌屬菌株，并且在過去70年中已經實現了對這些菌株分泌的毒素的表征。
2、來源于梭菌屬菌株的具有神經毒性的毒素，即肉毒桿菌毒素，根據其血清學特征分為a至g七種類型。每種毒素具有約150kda的毒素蛋白，并且天然地由并入了各種無毒蛋白的復合物組成。中等復合物(300kda)由毒素蛋白和無毒的非血凝素蛋白組成，并且大復合物(450kda)和巨大復合物(900kda)被配置成使得中等復合物與血凝素結合(sugiyama,h,microbiol?rev.,44:419,1980)。已知這些無毒的非血凝素蛋白具有保護毒素免受腸內低ph和各種蛋白水解酶影響的功能。
3、該毒素在細胞中被合成為具有分子量約為150kda的單個多肽，以及然后通過胞內蛋白水解酶的作用或用酶諸如胰蛋白酶的人工處理，在距n-末端1/3的位置處被切割，并且因此被分成兩個單元，即輕鏈(l：分子量：50kda)和重鏈(h：分子量：100kda)。經如此分割的毒素的毒性比單個多肽的毒性顯著增加。該兩個單元通過二硫鍵相互連接，并且各自具有不同的功能。重鏈與靶細胞的受體結合并在低ph(ph?4)下與生物膜反應而形成通道(mantecucco,c?et?al,tibs,18:324,1993)，而輕鏈具有藥理學活性，因
4、毒素在神經肌肉接頭的膽堿能突觸前處抑制乙酰膽堿的胞吐作用，從而引起全身乏力。據認為，這種毒素具有任何酶活性，因為即使以極少量使用也會出現毒性。
5、最近發現，毒素具有金屬肽酶活性，并且其底物是小突觸小泡蛋白、突觸融合蛋白和25kda的突觸體相關蛋白(snap25)，它們是胞吐機械復合物(exocytosis?machinerycomplex)的單元蛋白。各種類型的毒素都以這三種蛋白質中的一種作為底物。已知b型、d型、f型和g型在特定位點切割小突觸泡蛋白，a型和e型在特定位點切割snap25，以及c型在特定位點切割突觸融合蛋白。
6、特別地，已知a型肉毒桿菌毒素在ph為4.0至6.8的稀釋水性溶液中是可溶的。已知在約7或更高的ph下，起到穩定作用的非毒素蛋白與神經毒素分離，從而導致毒性逐漸喪失，特別是隨著ph和溫度的升高，毒性降低。
7、由于少量的肉毒桿菌毒素便對人體是致命的且易于大規模生產，所以它是一種可以與炭疽桿菌(bacillus?anthracis)、鼠疫桿菌(yersinia?pestis)和天花病毒(smallpoxvirus)一起用于四大生物恐怖武器的毒素。然而，特別地，已經發現當以等于或小于不會全身性影響人體的劑量注射時，a型肉毒桿菌毒素可以麻痹所注射部位的局部肌肉。利用這些特征，a型肉毒桿菌毒素可以用作除皺劑和用于痙攣性偏癱和腦癱的治療劑，并且因此對其的需求迅速增加，并且正在對生產肉毒桿菌毒素的方法進行徹底研究以滿足這種需求。
8、目前，代表性的市售產品是allergan的(一種a型肉毒桿菌毒素純化的神經毒素復合物)，并且100-單位小瓶的包含約5ng的純化的a型肉毒桿菌毒素復合物、0.5mg的人血清白蛋白和0.9mg的氯化鈉，并以真空干燥形式提供，并使用不含任何防腐劑的無菌鹽水(注射0.9％氯化鈉)來重構。其他市售產品包括來自英國ipsen的(一種在肉毒桿菌毒素藥物組合物中含有乳糖和人血清白蛋白的肉毒桿菌a型毒素血凝素復合物，使用前用0.9％氯化鈉重構)和來自solstice?neurosciences的(一種包含b型肉毒桿菌毒素、人血清白蛋白、琥珀酸鈉和氯化鈉的注射液，ph約為5.6)。
9、肉毒桿菌毒素主要以凍干制劑的形式分配，并且已經進行了許多研究來保持凍干制劑長期穩定。例如，us?7,744,904?b1試圖通過在磷酸鹽緩沖鹽水中將α、β和γ環糊精與肉毒桿菌毒素簡單混合形成環糊精-肉毒桿菌毒素復合物來提高肉毒桿菌毒素的穩定性。然而，在α、β和γ環糊精的情況下，允許口服給藥，但是問題在于，由于它們的有限的溶解度以及腎毒性，不適合作為主要用作注射劑的肉毒桿菌毒素的賦形劑。此外，當將具有不均勻的顆粒大小的肉毒桿菌毒素注射到體內時，它在體內不能正常發揮作用，以至于可能無法實現所需的治療或美容效果，從而導致各種副作用。
10、因此，本專利技術人已經努力開發了一種凍干制劑，其中肉毒桿菌毒素被均勻地制粒并且穩定性也得到增強，并且因此確定，當制備包含硫酸魚精蛋白作為賦形劑的肉毒桿菌毒素凍干制劑時，硫酸魚精蛋白和肉毒桿菌毒素形成復合物，使得肉毒桿菌毒素的功效與之前的3個月相比可以持續6個月或更長時間，并且可以均勻地制備具有0.3或更小pdi值的肉毒桿菌毒素顆粒，從而實現了本專利技術。
11、引文列表
12、專利文獻
13、(專利文獻1)us?7,744,904?b1
技術實現思路
1、本專利技術的目的是提供一種具有均勻的肉毒桿菌毒素顆粒大小和改善的長期儲存穩定性的新型肉毒桿菌毒素凍干制劑組合物，以及其制備方法。
2、為了實現上述目的，本專利技術提供了一種包含肉毒桿菌毒素和硫酸魚精蛋白的復合物、等滲劑和緩沖劑的肉毒桿菌毒素凍干制劑組合物。
3、此外，本專利技術提供了一種制備肉毒桿菌毒素凍干制劑的方法，包括：
4、(a)通過混合肉毒桿菌毒素和硫酸魚精蛋白來形成肉毒桿菌毒素和硫酸魚精蛋白的復合物；
5、(b)通過向肉毒桿菌毒素和硫酸魚精蛋白的復合物中加入選自由聚山梨醇酯20、羥丙基-β-環糊精、人血清白蛋白和甘露醇組成的組的至少一種賦形劑、等滲劑和緩沖劑來制備肉毒桿菌毒素原液；以及
6、(c)對肉毒桿菌毒素原液進行凍干。
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1.一種肉毒桿菌毒素凍干制劑組合物，包含肉毒桿菌毒素和硫酸魚精蛋白的復合物、等滲劑和緩沖劑。
2.根據權利要求1所述的肉毒桿菌毒素凍干制劑組合物，其中，所述硫酸魚精蛋白的濃度為1.72nM至0.22mM。
3.根據權利要求1所述的肉毒桿菌毒素凍干制劑組合物，其中，所述肉毒桿菌毒素和所述硫酸魚精蛋白以1:5至1:20的質量比形成復合物。
4.根據權利要求1所述的肉毒桿菌毒素凍干制劑組合物，其中，所述組合物還包含選自由以下組成的組的至少一種賦形劑：聚山梨醇酯20、羥丙基-β-環糊精、人血清白蛋白和甘露醇。
5.根據權利要求4所述的肉毒桿菌毒素凍干制劑組合物，其中，所述組合物還包含羥丙基-β-環糊精、人血清白蛋白和甘露醇。
6.根據權利要求5所述的肉毒桿菌毒素凍干制劑組合物，其中，所述羥丙基-β-環糊精的濃度為5至20w/v％。
7.根據權利要求5所述的肉毒桿菌毒素凍干制劑組合物，其中，所述人血清白蛋白的濃度為0.35至0.5w/v％。
8.根據權利要求5所述的肉毒桿菌毒素凍干制劑組合物，其中，所述甘露
9.根據權利要求1所述的肉毒桿菌毒素凍干制劑組合物，其中，所述等滲劑的濃度為0.7至1.0w/v％。
10.根據權利要求1所述的肉毒桿菌毒素凍干制劑組合物，其中，所述緩沖劑具有6.0至7.0的pH以及10至35mM的濃度。
11.根據權利要求1所述的肉毒桿菌毒素凍干制劑組合物，其中，所述肉毒桿菌毒素選自由以下組成的組：血清型A、B、C、D、E、F和G。
12.一種制備肉毒桿菌毒素凍干制劑的方法，包括：
...【技術特征摘要】
1.一種肉毒桿菌毒素凍干制劑組合物，包含肉毒桿菌毒素和硫酸魚精蛋白的復合物、等滲劑和緩沖劑。
2.根據權利要求1所述的肉毒桿菌毒素凍干制劑組合物，其中，所述硫酸魚精蛋白的濃度為1.72nm至0.22mm。
3.根據權利要求1所述的肉毒桿菌毒素凍干制劑組合物，其中，所述肉毒桿菌毒素和所述硫酸魚精蛋白以1:5至1:20的質量比形成復合物。
4.根據權利要求1所述的肉毒桿菌毒素凍干制劑組合物，其中，所述組合物還包含選自由以下組成的組的至少一種賦形劑：聚山梨醇酯20、羥丙基-β-環糊精、人血清白蛋白和甘露醇。
5.根據權利要求4所述的肉毒桿菌毒素凍干制劑組合物，其中，所述組合物還包含羥丙基-β-環糊精、人血清白蛋白和甘露醇。
6.根據權利要求5所述的肉毒桿菌毒素凍干制劑組合物，...
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