【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及疫苗，具體涉及一種用于預防貓泛白細胞減少癥的疫苗及其制備方法和在預防貓泛白細胞減少癥方面的應用。
技術介紹
1、貓泛白細胞減少癥(feline?panleukopenia，fp)又稱貓瘟、貓傳染性腸炎，是由貓細小病毒(feline?parvovirus,fpv)引起的一種貓急性高度接觸性傳染病，臨床表現多以突發高熱、頑固性嘔吐、腹瀉、脫水、循環障礙及白細胞急劇減少為主要特征。貓細小病毒(fpv)與貓皰癥病毒(fhv)和貓杯狀病毒(fcv)一同被列為貓的三大病毒性傳染病之一。fpv分布于世界上多個國家及地區，可感染貓、小鼠、浣熊、猞猁、豹、虎、獅等多種動物，其中貓是最易感動物。fpv主要感染1歲以內的幼貓，通常情況下，對1歲以下的貓的致死率為50％～60％，對5月齡以下的幼貓的死亡率高達80％～90％。fpv編碼的vp2蛋白占所有結構蛋白的90％，含有多個抗原識別位點，為主要抗原性蛋白。vp2能夠誘導機體產生中和抗體，保護機體免受病毒的感染。
2、開發預防貓泛白細胞減少癥的疫苗，尤其是mrna疫苗對于貓主要疫病的防控具有積極的意義。相比傳統疫苗，mrna疫苗具有以下優勢：1)安全性好，mrna不會整合到宿主基因組，且能夠被正常的細胞自然降解；2)生產工藝簡單，不需要在細菌或細胞培養物中擴增，可體外轉錄產生，具有可快速生產的潛力；3)高效率，mrna疫苗可誘導體液和細胞雙重免疫，免疫原性好。
技術實現思路
1、本專利技術的目的為提供一種預防貓泛白細胞減少癥的疫
2、本專利技術術語“中性脂質”術語是指不帶電荷的、非磷酸甘油酯的脂質分子。
3、本專利技術術語“聚乙二醇(peg)-脂質”是指包含脂質部分和聚乙二醇部分的分子。
4、本專利技術術語“脂質納米顆粒”是指具有至少一個納米量級尺寸的顆粒，其包含至少一種脂質。
5、本專利技術術語“疫苗”是指適合于應用于動物(包括人)的組合物，在施用后誘導免疫應答，其強度足以最低限度地幫助預防、改善或治愈起因于由微生物感染的臨床疾病。
6、本專利技術術語，“n/p”為陽離子脂質中n與mrna單氨基酸中p的摩爾比。
7、本專利技術一方面，提供一種包含貓泛白細胞減少癥病毒(feline?panleukopeniavirus,fpv)vp2蛋白截短體的抗原肽，其特征在于，所述vp2蛋白截短體保留了vp2蛋白自n端至c端位置33至位置575的蛋白區域。
8、在一些具體實施方式中，所述編碼vp2蛋白的截短體的氨基酸序列如seq?id?no:2所示，或與seq?id?no:2具有至少75％的同源性；優選的，與seq?id?no：2具有至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％的同源性。
9、優選地，所述抗原肽還包括信號肽。
10、在一些具體實施方式中，所述抗原肽包括的各組成部分通過連接肽連接；優選的，所述連接肽為柔性連接肽；更優選的，所述連接肽的氨基酸序列為(ggggs)n或(g)n；進一步優選的，所述連接肽為ggggs。
11、本專利技術另一方面，提供一種編碼任一上述的包含貓泛白細胞減少癥病毒vp2蛋白截短體的抗原肽的核酸分子。
12、在一些具體實施方式中，所述核酸分子為mrna核酸分子。
13、具體的，所述核酸分子是天然或修飾的rna，所述修飾的rna包括通過用修飾的尿苷部分或全部取代天然尿苷對rna進行修飾；優選地，所述mrna序列是修飾的rna，所述修飾的rna為通過用1-甲基-假尿苷對天然尿苷進行全部替換。
14、具體的，所述核酸分子還包括5’帽子結構，5’非編碼區，3’非編碼區和/或多聚腺苷酸尾的mrna序列。
15、本專利技術另一方面，提供一種用于預防貓泛白細胞減少癥的mrna組合物，所述mrna組合物包含如上述任一的核酸分子。
16、優選的，所述mrna組合物還包括藥學上可接受的載體。
17、本專利技術另一方面，提供下述(a1)-(a4)中任一種生物材料：
18、(a1)含有上述任一核酸分子的表達盒；
19、(a2)含有上述任一核酸分子的重組載體；
20、(a3)含有上述任一核酸分子的重組菌；
21、(a4)含有上述任一核酸分子的轉基因細胞系。
22、本專利技術另一方面，提供一種用于診斷或檢測貓泛白細胞減少癥病毒的試劑盒，所述試劑盒包含上述任一的包含貓泛白細胞減少病毒vp2蛋白截短體的抗原肽、上述任一的核酸分子、上述任一的mrna組合物或如上述任一的生物材料。
23、本專利技術另一方面，提供一種用于預防貓泛白細胞減少癥病毒感染的疫苗，所述疫苗包含上述任一抗原肽或包含上述任一的核酸分子。
24、在一些具體實施方式中，所述疫苗為mrna疫苗，所述mrna疫苗由遞送載體包裹的所述貓細小病毒蛋白或其蛋白同源物的信使核糖核酸(mrna)。
25、在一些具體實施方式中，所述疫苗為mrna疫苗，所述mrna疫苗中的核酸分子被包裹在遞送載體中；優選的，所述遞送載體為脂質納米顆粒(lnp)，所述mrna核酸分子包封于所述脂質納米顆粒(lnp)中；更優選的，所述脂質納米顆粒包含陽離子脂質、中性磷脂、甾族脂質和聚乙二醇(peg)-脂質或所述脂質納米顆粒包含類固醇-陽離子脂質化合物、中性磷脂、聚乙二醇脂質。
26、優選的，所述脂質納米顆粒包含陽離子脂質、中性磷脂、甾族脂質和聚乙二醇(peg)-脂質或類固醇-陽離子脂質化合物、中性磷脂、聚乙二醇脂質。
27、優選的，所述的mrna序列的長度為200-10000個氨基酸。進一步優選的，所述的mrna序列的長度為500-8000個氨基酸。
28、所述mrna疫苗免疫后可誘導針對貓細小病毒的強效持久的高水平中和抗體。
29、優選的，所述脂質納米顆粒包含陽離子脂質、中性磷脂、甾族脂質和聚乙二醇(peg)-脂質或類固醇-陽離子脂質化合物、中性磷脂、聚乙二醇脂質。
30、優選的，所述的陽離子脂質具有以下結構：
31、
32、或其藥物可接受的鹽或立體異構體，其中：
33、g1和g2各自獨立地為未取代的c6-c10亞烷基；
34、g3為未取代的c1-c12亞烷基；
35、r1和r2各自獨立地為c6-c24烷基或c6-c24烯基；
36、r3為or5、cn、-c(＝o)or4、-oc(＝o)r4或–nr5c(＝o)r4；r4為c1-c12烴基；并且
37、r5為h或c1-c6烴基。
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1.一種包含貓泛白細胞減少癥病毒(Feline?panleukopenia?virus,FPV)VP2蛋白截短體的抗原肽，其特征在于，所述VP2蛋白截短體保留了VP2蛋白自N端至C端位置33至位置575的蛋白區域。
2.根據權利要求1所述的抗原肽，其特征在于，所述編碼VP2蛋白的截短體的氨基酸序列如SEQ?ID?NO:2所示，或與SEQ?ID?NO:2具有至少75％的同源性；優選的，與SEQ?ID?NO：2具有至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％的同源性。
3.根據權利要求1或2所述的抗原肽，其特征在于，所述抗原肽的N端插入信號肽。
4.根據權利要求3所述的抗原肽，其特征在于，所述抗原肽包括的各組成部分通過連接肽連接；優選的，所述連接肽為柔性連接肽；更優選的，所述連接肽的氨基酸序列為(GGGGS)n或(G)n；進一步優選的，所述連接肽為GGGGS。
5.一種編碼如權利要求1-4任一項所述的包含貓泛白細胞減少癥病毒VP2蛋白截短體的抗原肽的核酸分子。
6.根據權利要求5所述的核酸分子，其特征在
7.根據權利要求6所述的核酸分子，其特征在于，所述核酸分子是天然或修飾的RNA，所述修飾的RNA包括通過用修飾的尿苷部分或全部取代天然尿苷對RNA進行修飾；優選地，所述mRNA序列是修飾的RNA，所述修飾的RNA為通過用1-甲基-假尿苷對天然尿苷進行全部替換。
8.根據權利要求7所述的核酸分子，其特征在于，所述核酸分子還包括5’帽子結構，
9.一種用于預防貓泛白細胞減少癥的mRNA組合物，其特征在于，所述mRNA組合物包含如權利要求6-8任一項所述的核酸分子。
10.根據權利要求9所述的mRNA組合物，其特征在于，所述mRNA組合物還包括藥學上可接受的載體。
11.下述(a1)-(a4)中任一種生物材料：
12.一種用于診斷或檢測貓泛白細胞減少癥病毒的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包含如權利要求1-4任一項所述的包含貓泛白細胞減少病毒VP2蛋白截短體的抗原肽、如權利要求5-8任一項所述的核酸分子、如權利要求9-10任一項所述的mRNA組合物或如權利要求11所述的生物材料。
13.一種用于預防貓泛白細胞減少癥的疫苗，其特征在于，所述疫苗包含如權利要求1-4任一項所述的抗原肽或包含如權利要求5-8任一項所述的核酸分子。
14.根據權利要求13所述的疫苗，其特征在于，所述疫苗為mRNA疫苗，所述mRNA疫苗中的核酸分子被包裹在遞送載體中；優選的，所述遞送載體為脂質納米顆粒(LNP)，所述mRNA核酸分子包封于所述脂質納米顆粒(LNP)中；更優選的，所述脂質納米顆粒包含陽離子脂質、中性磷脂、甾族脂質和聚乙二醇(PEG)-脂質或所述脂質納米顆粒包含類固醇-陽離子脂質化合物、中性磷脂、聚乙二醇脂質。
15.一種用于預防貓泛白細胞減少癥的mRNA疫苗的制備方法，其特征在于，將權利要求5-8任一項所述的mRNA核酸分子包裹于脂質納米顆粒制備得到所述疫苗。
16.根據權利要求15所述的mRNA疫苗的制備方法，其特征在于，將陽離子脂質、中性磷脂、甾族脂質、聚乙二醇(PEG)-脂質溶解至溶劑或將類固醇-陽離子脂質化合物、中性磷脂、聚乙二醇脂質溶解至溶劑后與權利要求5-8任一項所述的mRNA核酸分子混合后制得所述疫苗。
17.一種如權利要求1-4任一項所述的抗原肽、如權利要求5-8任一項所述的核酸分子、如權利要求9-10任一項所述的mRNA組合物或如權利要求11所述的生物材料在制備用于預防或治療貓泛白細胞減少癥的疫苗或藥物中的用途。
...【技術特征摘要】
1.一種包含貓泛白細胞減少癥病毒(feline?panleukopenia?virus,fpv)vp2蛋白截短體的抗原肽，其特征在于，所述vp2蛋白截短體保留了vp2蛋白自n端至c端位置33至位置575的蛋白區域。
2.根據權利要求1所述的抗原肽，其特征在于，所述編碼vp2蛋白的截短體的氨基酸序列如seq?id?no:2所示，或與seq?id?no:2具有至少75％的同源性；優選的，與seq?id?no：2具有至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％的同源性。
3.根據權利要求1或2所述的抗原肽，其特征在于，所述抗原肽的n端插入信號肽。
4.根據權利要求3所述的抗原肽，其特征在于，所述抗原肽包括的各組成部分通過連接肽連接；優選的，所述連接肽為柔性連接肽；更優選的，所述連接肽的氨基酸序列為(ggggs)n或(g)n；進一步優選的，所述連接肽為ggggs。
5.一種編碼如權利要求1-4任一項所述的包含貓泛白細胞減少癥病毒vp2蛋白截短體的抗原肽的核酸分子。
6.根據權利要求5所述的核酸分子，其特征在于，所述核酸分子為mrna核酸分子。
7.根據權利要求6所述的核酸分子，其特征在于，所述核酸分子是天然或修飾的rna，所述修飾的rna包括通過用修飾的尿苷部分或全部取代天然尿苷對rna進行修飾；優選地，所述mrna序列是修飾的rna，所述修飾的rna為通過用1-甲基-假尿苷對天然尿苷進行全部替換。
8.根據權利要求7所述的核酸分子，其特征在于，所述核酸分子還包括5’帽子結構，
9.一種用于預防貓泛白細胞減少癥的mrna組合物，其特征在于，所述mrna組合物包含如權利要求6-8任一項所述的核酸分子。
10.根據權利要求9所述的mrna組合物，其特征在于，所述...
【專利技術屬性】
技術研發人員：劉性坡，王浩猛，李藎，武云暉，顧超男，王夢超，劉健，朱濤，邱東旭，宇學峰，
申請(專利權)人：康希諾上海生物研發有限公司，
類型：發明
國別省市：
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