【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于微生物和生物肥料學領域，具體涉及一種防治水稻惡苗病的微生物復合菌劑及其制備方法與應用。
技術介紹
1、水稻(oryza?sativa?l.)是世界上最重要的糧食作物，是世界一半以上人口的重要食物來源。中國是世界上最大的稻米生產國和消費國，年均稻谷產量和消費量均占世界近三成，60％以上的人口以稻米為主食。因此，水稻在我國整個農業生產系統中占據了重要地位。
2、水稻在種植過程中常遭受到自然環境下的各種生物和非生物脅迫。其中，病蟲害是影響水稻產量最重要的一類生物脅迫，包括昆蟲、真菌、細菌和線蟲等的感染。目前，水稻惡苗病在亞洲廣泛流行，在田間條件下該病威脅著稻米的品質和產量，在嚴重感染下損失可達到95％。現階段，針對水稻惡苗病的防治方法主要有栽培抗性品種水稻和化學防治。然而，針對惡苗病的高抗水稻品種十分少見；化學防治雖然經濟高效，但容易讓病原菌逐漸產生耐藥性，同時對人畜不友好，對環境危害大。
3、近年來，更多人將目光投向了生物防治，生長在植物內外的有益微生物通過分泌抗菌物質、與病原菌競爭營養和生態位、誘導植物抗性以及促進植物生長等機制防治植物病害。但由于種植環境變化、水肥管理及耕種措施差異等原因，長期使用單一菌種存在功能效果單一和適應能力差等問題，因此，微生物菌劑的研究趨勢逐漸傾向于多菌種、多功能的復合微生物菌劑。如何高效、穩定發揮抑菌效果且安全有效仍然是復合菌劑開發需要解決的關鍵問題。
技術實現思路
1、針對現有技術的不足，本專利技術的目的在于提供一
2、為解決現有技術的問題，本專利技術采取的技術方案為：
3、一種防治水稻惡苗病的微生物復合菌劑，包括真菌菌絲懸浮液和細菌懸浮液，所述真菌菌絲懸浮液的菌株為擬莖點霉屬80439，所述細菌懸浮液的菌株包括耳炎假單胞菌bf72和枯草芽孢桿菌bf86。
4、作為改進的是，擬莖點霉屬80439菌絲量的干重為0.01g/5ml，復合細菌懸液的有效活菌數為1×108～109cfu。
5、作為改進的是，所述耳炎假單胞菌bf72，分離自水稻根際土壤，于2024年11月4日保藏在中國典型培養物保藏中心，保藏地址為中國武漢武漢大學，郵編430072，保藏編號cctcc?no.m?20242426，分類學命名為耳炎假單胞菌pseudomonas?otitidis?bf72。
6、進一步改進的是，所述耳炎假單胞菌bf72在lb培養上37℃培養24h，菌落呈圓形，黃綠色偏透明，表面光滑偏濕潤，邊緣規則，無暈環，中央凸起，直徑1-2mm，革蘭氏染色為陰性；能夠利用l-天門冬酰胺，l-精氨酸，γ-羥丁酸等碳源，具備固氮，解鉀，產蛋白酶能力。
7、作為改進的是，所述枯草芽孢桿菌bf86，分離自水稻根際土壤，于2024年11月4日保藏在中國典型培養物保藏中心，保藏地址為中國武漢武漢大學，郵編430072，保藏號為cctcc?no.m?20242427，分類命名為枯草芽孢桿菌bacillus?subtilis?bf86。
8、進一步改進的是，所述枯草芽孢桿菌bf86在lb培養上37℃培養24h，菌落呈圓形，污白色不透明，表面有褶皺，邊緣不規則，直徑2-3mm，革蘭氏染色為陽性，能夠產生芽孢。具備產纖維素酶，蛋白酶能力。
9、上述防治水稻惡苗病的微生物復合菌劑的制備方法，將植物內生真菌擬莖點霉屬(phomopsis?sp.)按1:10(v:v)的接種量接種于pdb培養基中，搖瓶培養48h，過濾培養液得真菌菌絲，并用無菌水充分沖洗，再用無菌水重懸菌絲制成干重為0.01g/5ml的真菌菌絲懸浮液；再將耳炎假單胞菌bf72、枯草芽孢桿菌bf86分別接種于lb培養基中，搖瓶培養至od600nm處吸光值為1.0，用pbs清洗并重懸菌體，使每種細菌的od600值維持在0.01水平后，等體積比混合，使其活菌數達到1×108～109cfu，即得。
10、上述防治水稻惡苗病的微生物復合菌劑在防治水稻惡苗病中的應用。
11、作為改進的是，上述應用的步驟如下：將發芽的水稻種子移栽至育苗基質中，根部澆灌上述防治水稻惡苗病的抗病微生物復合菌劑的真菌菌絲懸浮液，澆灌量為5ml/株，隔7天澆灌上述的防治水稻惡苗病的抗病微生物復合菌劑的細菌懸液，澆灌量為5ml/株。
12、有益效果：
13、與現有技術相比，本專利技術一種防治水稻惡苗病的微生物復合菌劑及其制備方法與應用，具有如下優勢：
14、1、本專利技術微生物復合菌劑由內生真菌和細菌組成的，該復合菌劑能明顯改善發病水稻的表型，降低水稻惡苗病發生的病害程度和病原菌的豐度，提高水稻地上部和地下部的pod、sod和pal活性從而增強水稻對病原菌的抗性，能夠達到甚至優于化學防治效果，高效且經濟環保。
15、2、本專利技術通過溫室盆栽實驗進行上述三株菌株的單菌與組合菌群防治效果的比較，所述的復合菌劑對水稻惡苗病的防治效果最佳，并且能夠提高病害條件下水稻的根長及生物量，為防治水稻惡苗病提供了一種有效的復合菌劑。
16、3、本專利技術操作成本低，具有普適性，易于規模化生產。
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1.一種防治水稻惡苗病的微生物復合菌劑，其特征在于，包括真菌菌絲懸浮液和細菌懸浮液，所述真菌菌絲懸浮液的菌株為擬莖點霉屬80439，所述細菌懸浮液的菌株包括耳炎假單胞菌BF72和枯草芽孢桿菌BF86。
2.根據權利要求1所述的一種防治水稻惡苗病的微生物復合菌劑，其特征在于，擬莖點霉屬80439菌絲量的干重為0.01g/5ml，復合細菌懸液的有效活菌數為1×108~109?CFU。
3.根據權利要求1所述的一種防治水稻惡苗病的微生物復合菌劑，其特征在于，所述耳炎假單胞菌BF72，分離自水稻根際土壤，于2024年11月4日保藏在中國典型培養物保藏中心，保藏地址為湖北省武漢市武昌區八一路珞珈山，武漢大學保藏中心，郵編430072，保藏編號CCTCC?NO.?M?20242426，分類學命名為耳炎假單胞菌?Pseudomonas?otitidis?BF72。
4.根據權利要求3所述的一種防治水稻惡苗病的微生物復合菌劑，其特征在于，所述耳炎假單胞菌BF72的菌落呈圓形，黃綠色偏透明，表面光滑偏濕潤，邊緣規則，無暈環，中央凸起，直徑1-2mm，革蘭氏染色為
5.根據權利要求1所述的一種防治水稻惡苗病的微生物復合菌劑，其特征在于，所述枯草芽孢桿菌BF86，分離自水稻根際土壤，于2024年11月4日保藏在中國典型培養物保藏中心，保藏地址為湖北省武漢市武昌區八一路珞珈山，武漢大學保藏中心，郵編430072，保藏號為CCTCC?NO.?M?20242427，分類命名為枯草芽孢桿菌?Bacillus?subtilis?BF86。
6.根據權利要求5所述的一種防治水稻惡苗病的微生物復合菌劑，其特征在于，所述枯草芽孢桿菌BF86菌落呈圓形，污白色不透明，表面有褶皺，邊緣不規則，直徑2-3mm，革蘭氏染色為陽性，能夠產生芽孢；具備產纖維素酶，蛋白酶能力。
7.根據權利要求1-6中任一種防治水稻惡苗病的微生物復合菌劑的制備方法，其特征在于，將植物內生真菌擬莖點霉屬按體積比1:10的接種量接種于PDB培養基中，搖瓶培養48h，過濾培養液得真菌菌絲，并用無菌水充分沖洗，再用無菌水重懸菌絲制成干重為0.01g/5ml的真菌菌絲懸浮液；再將耳炎假單胞菌BF72、枯草芽孢桿菌BF86分別接種于LB培養基中，搖瓶培養至OD?600?nm處吸光值為1.0，用PBS清洗并重懸菌體，使每種細菌的OD600值維持在0.01水平后，等體積比混合，使其活菌數達到1×108~109?CFU，即得。
8.根據權利要求1-6中任一種防治水稻惡苗病的微生物復合菌劑在防治水稻惡苗病中的應用。
9.根據權利要求8所述的應用，其特征在于，將發芽的水稻種子移栽至育苗基質中，根部澆灌上述防治水稻惡苗病的抗病微生物復合菌劑的真菌菌絲懸浮液，澆灌量為5ml/株，隔7天澆灌上述的防治水稻惡苗病的抗病微生物復合菌劑的細菌懸液，澆灌量為5ml/株。
...【技術特征摘要】
1.一種防治水稻惡苗病的微生物復合菌劑，其特征在于，包括真菌菌絲懸浮液和細菌懸浮液，所述真菌菌絲懸浮液的菌株為擬莖點霉屬80439，所述細菌懸浮液的菌株包括耳炎假單胞菌bf72和枯草芽孢桿菌bf86。
2.根據權利要求1所述的一種防治水稻惡苗病的微生物復合菌劑，其特征在于，擬莖點霉屬80439菌絲量的干重為0.01g/5ml，復合細菌懸液的有效活菌數為1×108~109?cfu。
3.根據權利要求1所述的一種防治水稻惡苗病的微生物復合菌劑，其特征在于，所述耳炎假單胞菌bf72，分離自水稻根際土壤，于2024年11月4日保藏在中國典型培養物保藏中心，保藏地址為湖北省武漢市武昌區八一路珞珈山，武漢大學保藏中心，郵編430072，保藏編號cctcc?no.?m?20242426，分類學命名為耳炎假單胞菌?pseudomonas?otitidis?bf72。
4.根據權利要求3所述的一種防治水稻惡苗病的微生物復合菌劑，其特征在于，所述耳炎假單胞菌bf72的菌落呈圓形，黃綠色偏透明，表面光滑偏濕潤，邊緣規則，無暈環，中央凸起，直徑1-2mm，革蘭氏染色為陰性；能夠利用l-天門冬酰胺，l-精氨酸，γ-羥丁酸等碳源，具備固氮，解鉀，產蛋白酶能力。
5.根據權利要求1所述的一種防治水稻惡苗病的微生物復合菌劑，其特征在于，所述枯草芽孢桿菌bf86，分離自水稻根際土壤，于2024年11月4日保藏在中國典型培養物保藏中心，保藏地址為湖北省武漢市武昌區八...
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