【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)屬于法醫(yī)學(xué)，具體涉及一種用于毛干個(gè)體識別的引物組、試劑盒及其應(yīng)用。
技術(shù)介紹
1、毛發(fā)樣本是法醫(yī)鑒定工作中的常見樣本之一，法醫(yī)工作者經(jīng)常會(huì)在案發(fā)現(xiàn)場收集到毛發(fā)樣本，但由于毛發(fā)多為自然脫落，所以毛囊多萎縮或沒有毛囊，容易導(dǎo)致檢測失敗或得不到足夠的核dna。
2、由于毛干中也含有一定量的dna，盡管毛干中的dna含量極微且多降解，但是現(xiàn)有研究中也存在一些以毛干進(jìn)行個(gè)體識別的方法，如常染色體短串聯(lián)重復(fù)序列(str)檢測法、線粒體dna檢測法以及單氨基酸多態(tài)性檢測法。但是由于毛干dna存在微量降解的現(xiàn)狀，常染色體str檢測法常出現(xiàn)長片段基因座丟失段片段基因座等位基因丟失或者插入的現(xiàn)象；雖然通過對線粒體dna的2個(gè)高變區(qū)進(jìn)行檢測能夠得到單核苷酸多態(tài)性的差異，但由于線粒體dna屬于母系遺傳，只能用于不同母系個(gè)體排除；單氨基酸多態(tài)性方法雖然可以通過單氨基酸多態(tài)性的變化反推基因組dna序列非同義單核苷酸多態(tài)性，但dna上的同義突變不能反映在單氨基酸上，信息量較低且由于氨基酸的化學(xué)修飾或生物修飾導(dǎo)致質(zhì)譜分析時(shí)質(zhì)量偏移，會(huì)引起非同義單核苷酸多態(tài)性推斷錯(cuò)誤。
3、可見，現(xiàn)有的以毛干進(jìn)行個(gè)體識別的方法均存在一些無法克服的缺陷，本領(lǐng)域中還缺少實(shí)現(xiàn)對毛干樣本的精準(zhǔn)個(gè)體識別的新的遺傳標(biāo)記和檢測方法。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
1、本專利技術(shù)的目的在于提供一種用于毛干個(gè)體識別的引物組、試劑盒及其應(yīng)用，所述引物組以及包含所述引物組的試劑盒能夠?qū)崿F(xiàn)毛干高表達(dá)mrna標(biāo)記上csnp和/或mh位點(diǎn)的
2、本專利技術(shù)提供了檢測人基因csnp位點(diǎn)的試劑在毛干個(gè)體識別的mrna多態(tài)性檢測、毛干檢材的法醫(yī)鑒定和毛干檢材的法醫(yī)檢測中的一項(xiàng)或多項(xiàng)中的應(yīng)用；所述人基因csnp位點(diǎn)包括如下表所示的404個(gè)csnp：
3、
4、
5、本專利技術(shù)還提供了一種用于毛干個(gè)體識別的引物組，所述引物組包括326對引物對，所述326對引物對的核苷酸序列如seq?id?no.1～seq?id?no.652所示。
6、本專利技術(shù)還提供了一種用于毛干個(gè)體識別的試劑盒，所述試劑盒包括上述技術(shù)方案所述的引物組。
7、本專利技術(shù)還提供了上述技術(shù)方案所述的引物組或上述技術(shù)方案所述的試劑盒在毛干個(gè)體識別的mrna多態(tài)性檢測、毛干檢材的法醫(yī)鑒定和毛干檢材的法醫(yī)檢測中的一項(xiàng)或多項(xiàng)中的應(yīng)用。
8、本專利技術(shù)還提供了一種檢測毛干個(gè)體識別的mrna多態(tài)性檢測方法，包括如下步驟：
9、提取待測毛干樣本的rna，并將得到的毛干樣本rna進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄，得到毛干樣本cdna；
10、以上述技術(shù)方案所述的引物組對所述毛干樣本cdna進(jìn)行多重pcr擴(kuò)增，得到毛干樣本的多重pcr擴(kuò)增產(chǎn)物；
11、基于所述毛干樣本的多重pcr擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行文庫構(gòu)建，得到毛干樣本測序文庫；
12、對所述毛干樣本測序文庫進(jìn)行高通量測序，得到高通量測序結(jié)果；
13、基于所述高通量測序結(jié)果進(jìn)行基因分型，得到csnp和/或微單倍型分型結(jié)果。
14、有益效果：
15、本專利技術(shù)提供了檢測人基因csnp位點(diǎn)的試劑在毛干個(gè)體識別的mrna多態(tài)性檢測、毛干檢材的法醫(yī)鑒定和毛干檢材的法醫(yī)檢測中的一項(xiàng)或多項(xiàng)中的應(yīng)用；所述人基因csnp位點(diǎn)包括404個(gè)csnp。在此基礎(chǔ)上，本專利技術(shù)還提供了能夠擴(kuò)增所述404個(gè)csnp的引物組、試劑盒以及以rna為模板在毛干個(gè)體識別的mrna多態(tài)性檢測、毛干檢材的法醫(yī)鑒定和毛干檢材的法醫(yī)檢測中的應(yīng)用。
16、與現(xiàn)有技術(shù)中采用毛干dna為模板進(jìn)行個(gè)體檢測的方法相比，本專利技術(shù)以rna為模板進(jìn)行檢測，這樣即使毛干為微量降解樣本，但是rna為多拷貝，毛干中存在足量的rna分子，為后續(xù)檢測提供足量模板，克服了從毛干中無法獲得足量核dna的問題；另外，rna分子上存在可用于個(gè)體識別的多態(tài)性位點(diǎn)，即所述404個(gè)csnp位點(diǎn)，rna序列上保留了dna序列的多態(tài)性，因而可以用rna多態(tài)性反應(yīng)dna多態(tài)性。進(jìn)而，以本專利技術(shù)所述引物組可以實(shí)現(xiàn)毛干高表達(dá)mrna標(biāo)記上csnp和/或mh位點(diǎn)的檢測，解決毛干樣本無法進(jìn)行個(gè)體識別的問題，且精準(zhǔn)性較高。同時(shí)，本專利技術(shù)所使用儀器和試劑均為法醫(yī)實(shí)驗(yàn)室常規(guī)配備，操作簡便，易于推廣。
本文檔來自技高網(wǎng)...【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
1.檢測人基因cSNP位點(diǎn)的試劑在毛干個(gè)體識別的mRNA多態(tài)性檢測、毛干檢材的法醫(yī)鑒定和毛干檢材的法醫(yī)檢測中的一項(xiàng)或多項(xiàng)中的應(yīng)用；所述人基因cSNP位點(diǎn)包括如下表所示的404個(gè)cSNP：
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述試劑包括擴(kuò)增所述404個(gè)cSNP位點(diǎn)的引物組。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于，所述引物組包括326對引物對，所述326對引物對的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.1～SEQ?ID?NO.652所示。
4.一種用于毛干個(gè)體識別的引物組，其特征在于，所述引物組包括326對引物對，所述326對引物對的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.1～SEQ?ID?NO.652所示。
5.一種用于毛干個(gè)體識別的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括權(quán)利要求4所述的引物組。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒中還包括RNA提取相關(guān)試劑和/或RNA反轉(zhuǎn)錄相關(guān)試劑。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒中還包括高通量建庫和/或測序相關(guān)試劑。
8.權(quán)利要
9.一種檢測毛干個(gè)體識別的mRNA多態(tài)性檢測方法，其特征在于，包括如下步驟：
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的mRNA多態(tài)性檢測方法，其特征在于，所述基因分型時(shí)的擴(kuò)增子reads數(shù)量閾值設(shè)置為30。
...【技術(shù)特征摘要】
1.檢測人基因csnp位點(diǎn)的試劑在毛干個(gè)體識別的mrna多態(tài)性檢測、毛干檢材的法醫(yī)鑒定和毛干檢材的法醫(yī)檢測中的一項(xiàng)或多項(xiàng)中的應(yīng)用；所述人基因csnp位點(diǎn)包括如下表所示的404個(gè)csnp：
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述試劑包括擴(kuò)增所述404個(gè)csnp位點(diǎn)的引物組。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于，所述引物組包括326對引物對，所述326對引物對的核苷酸序列如seq?id?no.1～seq?id?no.652所示。
4.一種用于毛干個(gè)體識別的引物組，其特征在于，所述引物組包括326對引物對，所述326對引物對的核苷酸序列如seq?id?no.1～seq?id?no.652所示。
5.一種用于毛干個(gè)體識...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：張更謙，劉晉玎，嚴(yán)江偉，贠克明，張雨欣，
申請(專利權(quán))人：山西醫(yī)科大學(xué)，
類型：發(fā)明
國別省市：
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