【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及林木材性測定，尤其涉及一種評估轉基因楊樹苗期植株材性的方法和過表達pagexpa1基因在促進楊樹木質部發育中的應用。
技術介紹
1、轉基因楊樹植株是指通過基因工程技術，將外源基因或載體導入楊樹植株中，并在其苗期階段生長發育的楊樹個體。轉基因楊樹植株在生長速度、形態特征、生理生化特性、抗逆性或抗病蟲害能力等方面在生長早期便顯出一些與非轉基因楊樹不同的特征。但由于直接測定木材材性(如密度、強度等)通常需要在樹木生長到一定年限后才能進行。而優質、速生轉基因楊樹在生長早期就需要進行木材材性的鑒定和分析，為的是確保其速生、優質特性得以體現并滿足后續應用需求，并實現早期優良株系的篩選。因此，需要開發一種在楊樹生長早期就能對木材材性進行鑒定的方法。
2、expansin擴展蛋白是誘導細胞壁延伸的主要因子，作為植物細胞壁蛋白，能夠疏松植物細胞壁的組分，增加細胞壁柔韌性。研究表明，expansin家族在植物根系延長、果實成熟、葉柄脫落、植株發育及抗逆等方面發揮著重要作用。目前，在楊樹中的研究多集中于根的生長伸長、植株形態發育和抗逆等方面。而纖維的伸長和木質部的發育是林木木材形成和發育過程中的重要生物學過程，因此，擴展蛋白能否通過對細胞壁的延伸作用影響纖維細胞和木質部細胞的發育及變化還需要進一步的研究和完善。
技術實現思路
1、本專利技術的目的在于提供一種評估轉基因楊樹苗期植株材性的方法和過表達pagexpa1基因在促進楊樹木質部發育中的應用，以解決現有技術中無法在楊樹生長早
2、為了實現上述專利技術目的，本專利技術提供以下技術方案：
3、本專利技術提供了一種評估轉基因楊樹苗期植株材性的方法，包括以下步驟：
4、s1.通過pcr檢測外源基因是否整合到楊樹基因組中；
5、s2.檢測外源基因在楊樹中的表達水平；
6、s3.對轉基因楊樹的莖干維管組織進行顯微結構分析；
7、s4.通過纖維離析將纖維、導管、篩管細胞分離，將離析好的纖維染色，觀察纖維、導管、篩管細胞的形態和結構。
8、優選的，所述顯微結構分析包括以下步驟：
9、(1)截取楊樹莖段，然后切片，所述切片的厚度為55～65μm；
10、(2)將所述切片與染料混合，進行染色；
11、(3)將染色后的切片從染料中取出，在顯微鏡下觀察楊樹莖干的維管結構和組織特征；
12、(4)對轉基因和非轉基因楊樹植株的橫切面直徑、木質部區域寬度和木質部細胞層數進行測量和統計，以鑒定外源基因對楊樹植株木質部區域發育的影響。
13、優選的，所述染料包括甲苯胺藍溶液或間苯三酚染料。
14、優選的，所述甲苯胺藍溶液的濃度為0.8～1.2％w/v，甲苯胺藍溶液染色的時間為8～12s。
15、優選的，所述間苯三酚染料包括間苯三酚溶液和鹽酸溶液，所述間苯三酚溶液的濃度為2～4％，所述鹽酸的濃度為30～40％；所述間苯三酚溶液和鹽酸溶液的體積比為1.5～2.5：1。
16、優選的，所述間苯三酚染料染色的時間為28～32s。
17、優選的，所述纖維離析的步驟如下：
18、(1)將楊樹木質部組織切成厚度為0.4～0.6mm的條狀樣本，然后與離析液混合，得到混合物；
19、(2)將所述混合物于加熱條件下反應72～96h，直到細條出現白色纖維組織。
20、優選的，所述離析液包括過氧化氫和冰醋酸；所述過氧化氫的濃度為25～35％；所述過氧化氫和冰醋酸的體積比為1：2～3。
21、優選的，所述加熱的方式為金屬浴加熱，所述加熱的溫度為60～70℃。
22、本專利技術還提供了過表達pagexpa1基因在促進楊樹纖維細胞和木質部細胞發育中的應用。
23、通過采用上述技術方案，本專利技術具有如下有益效果：本專利技術評估轉基因楊樹苗期植株材性的方法，包括以下步驟：s1.通過pcr檢測外源基因是否整合到楊樹基因組中；s2.檢測外源基因在楊樹中的表達水平；s3.對轉基因楊樹的莖干維管組織進行顯微結構分析；s4.通過纖維離析將纖維、導管、篩管細胞分離，將離析好的纖維染色，觀察纖維、導管、篩管細胞的形態和結構。本專利技術的方法可以在楊樹生長早期就能對木材材性進行全面評估。本專利技術還提供了過表達pagexpa1基因在促進楊樹木質部發育中的應用，為楊樹種植資源改良打下了基礎。
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1.一種評估轉基因楊樹苗期植株材性的方法，其特征在于，包括以下步驟：
2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述顯微結構分析包括以下步驟：
3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，所述染料包括甲苯胺藍溶液或間苯三酚染料。
4.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，所述甲苯胺藍溶液的濃度為0.8～1.2％w/v，甲苯胺藍溶液染色的時間為8～12s。
5.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，所述間苯三酚染料包括間苯三酚溶液和鹽酸溶液，所述間苯三酚溶液的濃度為2～4％，所述鹽酸的濃度為30～40％；所述間苯三酚溶液和鹽酸溶液的體積比為1.5～2.5：1。
6.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，所述間苯三酚染料染色的時間為28～32s。
7.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述纖維離析的步驟如下：
8.根據權利要求7所述的方法，其特征在于，所述離析液包括過氧化氫和冰醋酸；所述過氧化氫的濃度為25～35％；所述過氧化氫和冰醋酸的體積比為1：2～3。
9.根據權利要求7所述的的方
10.過表達pagEXPA1基因在促進楊樹木質部發育中的應用。
...【技術特征摘要】
1.一種評估轉基因楊樹苗期植株材性的方法，其特征在于，包括以下步驟：
2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述顯微結構分析包括以下步驟：
3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，所述染料包括甲苯胺藍溶液或間苯三酚染料。
4.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，所述甲苯胺藍溶液的濃度為0.8～1.2％w/v，甲苯胺藍溶液染色的時間為8～12s。
5.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，所述間苯三酚染料包括間苯三酚溶液和鹽酸溶液，所述間苯三酚溶液的濃度為2～4％，所述鹽酸的濃度為30～40％；所述間苯三酚溶液和...
【專利技術屬性】
技術研發人員：唐芳，賀學嬌，趙樹堂，劉穎麗，
申請(專利權)人：中國林業科學研究院林業研究所，
類型：發明
國別省市：
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