【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)涉及生物醫(yī)藥，具體涉及一種npff的n端1位磷酸化修飾的衍生物及其制備方法和應(yīng)用。
技術(shù)介紹
1、神經(jīng)肽ff（neuropeptide?ff,?npff），作為哺乳動物體內(nèi)固有的一種神經(jīng)調(diào)節(jié)物質(zhì)，由八個氨基酸殘基構(gòu)成（序列為flfqpqrfamide），它屬于rfamide肽類家族，這一家族的顯著特點是其分子鏈的c端均含有rfamide結(jié)構(gòu)。npff的生理作用通過其內(nèi)源性受體npffr2（即npff受體2）介導(dǎo)，該受體隸屬于g蛋白偶聯(lián)受體（gpcr）這一龐大的蛋白家族。npff在生物體內(nèi)展現(xiàn)出多元化的生理功能，它不僅深度參與到痛覺信號的傳遞過程中，還對血壓調(diào)控、進食行為、內(nèi)分泌系統(tǒng)平衡以及體溫調(diào)節(jié)等關(guān)鍵生理活動產(chǎn)生重要影響。鑒于npff在體內(nèi)的廣泛分布及其在多個生物過程中的核心角色，針對npff及其受體的深入研究對于揭示生命活動的奧秘、開發(fā)新型藥物以治療疼痛、心血管疾病、代謝紊亂等具有重要意義，因而這一領(lǐng)域的研究工作備受矚目。
2、以多肽為代表的蛋白質(zhì)類藥物，憑借其高度的生物活性和特異性，在醫(yī)療領(lǐng)域展現(xiàn)出了廣泛的應(yīng)用前景。然而，這類藥物面臨的水溶性不佳、穩(wěn)定性差以及血漿半衰期短暫等挑戰(zhàn)，顯著制約了其臨床應(yīng)用的廣度與深度。為了克服這些局限，科學(xué)家們探索了多種策略，其中，npff的n端1位，簡稱npff（n端1位），npff（n端1位）磷酸化以及與藥物的共價偶聯(lián)可影響生物活性以及帶來可能的治療應(yīng)用，從而改善治療效果。npff（n端1位）磷酸化作為一種多肽藥物改進的前沿策略，展現(xiàn)了巨大的潛力。盡管npff本身擁有
技術(shù)實現(xiàn)思路
1、針對上述
技術(shù)介紹
中存在的不足，本專利技術(shù)提供一種npff的n端1位磷酸化修飾的衍生物及其制備方法和應(yīng)用。該方法采用npff（n端1位）磷酸化對神經(jīng)肽ff（npff）的n端進行修飾，生成了npff-peg衍生物。該衍生物針對小鼠足腫炎癥模型以及脂多糖（lps）刺激下的生存曲線模型中，展現(xiàn)出了顯著的抗炎活性。
2、本專利技術(shù)第一個目的是提供一種npff的n端1位磷酸化修飾的衍生物，該衍生物為磷酸化修飾npff的氨基端的phe，所述磷酸化修飾npff的氨基端的phe的氨基酸序列為：peg-phe-leu-phe-gln-pro-gln-arg-phe-nh2。
3、優(yōu)選地，該衍生物的結(jié)構(gòu)式如下：
4、。
5、本專利技術(shù)第二個目的是提供一種npff的n端1位磷酸化修飾的衍生物的制備方法，包括以下步驟：
6、s1、將wang樹脂置于n,n-二甲基酰胺中，進行溶脹；
7、s2、將溶脹后的樹脂、fmoc保護的phe，以及二環(huán)乙基碳二亞胺和4-二甲氨基吡啶，均勻溶解于dmf中進行反應(yīng)，再使用醋酸酐進行封端處理，得到封端化合物；
8、s3、將封端化合物加入至體積分數(shù)為18%的哌啶dmf溶液，隨后抽干，再次加入體積分數(shù)為18%的哌啶dmf溶液，經(jīng)反應(yīng)得到保護氨基酸；然后將保護氨基酸與o-苯并三氮唑-四甲基脲六氟磷酸鹽溶解于dmf后，加入4-甲基嗎啉，進行縮合反應(yīng)；
9、重復(fù)s2~s3，按照從c端至n端殘基序列的順序，依次縮合以下序列的氨基酸：phosphate-phe-leu-phe-gln-pro-gln-arg-phe-nh2，得到縮合物；
10、將縮合物以及nh2-(ch2ch2o)8-ch2ch2cooh、hbtu溶解于dmf中，隨后加入nmm，進行反應(yīng)去除fmoc保護基團后，并經(jīng)裂解獲取含有多肽的裂解液；
11、將裂解液進行后處理獲取npff的n端1位磷酸化修飾的衍生物。
12、優(yōu)選地，經(jīng)裂解的過程，包括：
13、配制裂解液：向三氟乙酸中，加入超純水、三異丙基硅烷和1,2-乙二硫醇，混合均勻；其中，三氟乙酸、超純水、三異丙基硅烷以及1,2-乙二硫醇體積比為94:2:1:3；
14、將去除fmoc保護基團的產(chǎn)物浸泡于裂解液中，于100~200分鐘。
15、優(yōu)選地，經(jīng)裂解之后，還包括：在氯氣環(huán)境中，對裂解液進行吹干處理；再使用乙醚對吹干后的樣品進行多次洗滌，并在室溫條件下?lián)]發(fā)至完全干燥，隨后，采用高效液相色譜法對干燥后的樣品進行純化；
16、純化時，流動相由體積濃度0.15%三氟乙酸與乙腈以50:50的體積比混合而成。
17、優(yōu)選地，制得封端化合物、縮合反應(yīng)后產(chǎn)物以及去除fmoc保護基團的產(chǎn)物，均依次采用dmf、甲醇進行多次循環(huán)清洗，去除雜質(zhì)。
18、本專利技術(shù)第三個目的是提供一種npff的n端1位磷酸化修飾的衍生物在制備鎮(zhèn)痛藥物或制備抗炎藥物中的應(yīng)用，其特征在于，該衍生物按常規(guī)藥劑學(xué)制成片劑、膠囊劑或注射劑。
19、本專利技術(shù)第四個目的是提供一種抗炎片劑，包括以下重量份組分：npff-peg40.0份，填充劑175.0份，崩解劑10.0份，黏合劑5.0份，潤滑劑3.0份；
20、其中，npff-peg為上述提供的npff的n端1位磷酸化修飾的衍生物。
21、本專利技術(shù)第五個目的是提供一種抗炎軟膠囊，包括以下重量份組分：npff-peg85.0份，填充劑85.0份，黏合劑5.0份，潤滑劑5.0份；
22、其中，npff-peg為上述提供的npff的n端1位磷酸化修飾的衍生物。
23、本專利技術(shù)第六個目的是提供一種抗炎注射液，包括以下重量份組分：npff-peg120.0份，枸櫞酸1.0份，枸櫞酸鈉1.0份，氯化鈉16.0份，注射用水2000份；
24、其中，npff-peg為上述提供的npff的n端1位磷酸化修飾的衍生物。
25、與現(xiàn)有技術(shù)相比，本專利技術(shù)的有益效果是：
26、本專利技術(shù)提供了一種npff的n端1位磷酸化修飾的衍生物及其制備方法，并深入探索了其在抗炎治療中的潛在應(yīng)用。本專利技術(shù)采用npff（n端1位）磷酸化對神經(jīng)肽ff（npff）的n端進行修飾，生成了npff-peg復(fù)合物。
27、本專利技術(shù)通過精細設(shè)計的實驗方案，利用小鼠足腫炎癥模型和lps（脂多糖）刺激生存曲線模型，對npff（n端1位）磷酸化的抗炎活性進行了全面評估。實驗結(jié)果顯示，npff（n端1位）磷酸化展現(xiàn)出了卓越的抗炎性能。在模擬炎癥環(huán)境的小鼠足腫模型中，給予14?mg/kg和28?mg/kg劑量的npff（n端1位）磷酸化，分別有效抑制了炎癥反應(yīng)的41.25%和50.74%（在觀察期12小時后），這一顯著效果表明了npff（n端1位）磷酸化在控制局部炎癥中的強大能力。進一步地，在更為嚴峻的lps刺激生存曲線模型中，npff（n端1位）磷酸化同樣展現(xiàn)出了其保護性作用。當以1?mg/kg的本文檔來自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護點】
1.一種NPFF的N端1位磷酸化修飾的衍生物，其特征在于，該衍生物為磷酸化修飾NPFF的氨基端的Phe，所述磷酸化修飾NPFF的氨基端的Phe的氨基酸序列為：PEG-Phe-Leu-Phe-Gln-Pro-Gln-Arg-Phe-NH2。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的NPFF的N端1位磷酸化修飾的衍生物，其特征在于，該衍生物的結(jié)構(gòu)式如下：
3.一種權(quán)利要求1或2所述的NPFF的N端1位磷酸化修飾的衍生物的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的NPFF的N端1位磷酸化修飾的衍生物的制備方法，其特征在于，經(jīng)裂解的過程，包括：
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的NPFF的N端1位磷酸化修飾的衍生物的制備方法，其特征在于，經(jīng)裂解之后，還包括：在氯氣環(huán)境中，對裂解液進行吹干處理；再使用乙醚對吹干后的樣品進行多次洗滌，并在室溫條件下?lián)]發(fā)至完全干燥，隨后，采用高效液相色譜法對干燥后的樣品進行純化；
6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的NPFF的N端1位磷酸化修飾的衍生物的制備方法，其特征在于，制得封端化合物、縮合反應(yīng)后產(chǎn)物以及去除Fmo
7.一種權(quán)利要求1或2所述的NPFF的N端1位磷酸化修飾的衍生物在制備鎮(zhèn)痛藥物或制備抗炎藥物中的應(yīng)用，其特征在于，該衍生物按常規(guī)藥劑學(xué)制成片劑、膠囊劑或注射劑。
8.一種抗炎片劑，其特征在于，包括以下重量份組分：NPFF-PEG40.0份，填充劑175.0份，崩解劑10.0份，黏合劑5.0份，潤滑劑3.0份；
9.一種抗炎軟膠囊，其特征在于，包括以下重量份組分：NPFF-PEG85.0份，填充劑85.0份，黏合劑5.0份，潤滑劑5.0份；
10.一種抗炎注射液，其特征在于，包括以下重量份組分：NPFF-PEG120.0份，枸櫞酸1.0份，枸櫞酸鈉1.0份，氯化鈉16.0份，注射用水2000份；
...【技術(shù)特征摘要】
1.一種npff的n端1位磷酸化修飾的衍生物，其特征在于，該衍生物為磷酸化修飾npff的氨基端的phe，所述磷酸化修飾npff的氨基端的phe的氨基酸序列為：peg-phe-leu-phe-gln-pro-gln-arg-phe-nh2。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的npff的n端1位磷酸化修飾的衍生物，其特征在于，該衍生物的結(jié)構(gòu)式如下：
3.一種權(quán)利要求1或2所述的npff的n端1位磷酸化修飾的衍生物的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的npff的n端1位磷酸化修飾的衍生物的制備方法，其特征在于，經(jīng)裂解的過程，包括：
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的npff的n端1位磷酸化修飾的衍生物的制備方法，其特征在于，經(jīng)裂解之后，還包括：在氯氣環(huán)境中，對裂解液進行吹干處理；再使用乙醚對吹干后的樣品進行多次洗滌，并在室溫條件下?lián)]發(fā)至完全干燥，隨后，采用高效液相色譜法對干燥后的樣品進行純化；
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：李慧娟，
申請(專利權(quán))人：陜西工業(yè)職業(yè)技術(shù)學(xué)院，
類型：發(fā)明
國別省市：
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