【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)屬于生物，具體涉及一種抗人cd19的單鏈抗體及其應(yīng)用。
技術(shù)介紹
1、自身免疫性疾病是指免疫系統(tǒng)錯誤地攻擊和破壞自身組織和器官，導(dǎo)致身體產(chǎn)生自身免疫反應(yīng)。b細(xì)胞是免疫系統(tǒng)中的一種重要細(xì)胞類型，它們可以通過產(chǎn)生抗體來幫助身體抵抗病原體和異物。然而，在自身免疫性疾病中，b細(xì)胞會錯誤地攻擊身體自身的組織和器官。b細(xì)胞主要通過以下機(jī)制影響自身免疫性疾病：a.產(chǎn)生自身抗體：b細(xì)胞可以產(chǎn)生針對自身組織和器官的抗體，這些抗體可以導(dǎo)致自身免疫反應(yīng)。例如，在1型糖尿病中，b細(xì)胞產(chǎn)生胰島細(xì)胞抗體，攻擊和破壞胰島細(xì)胞，導(dǎo)致血糖水平異常升高。系統(tǒng)性紅斑狼瘡（systemic?lupus?erythematosus），患者體內(nèi)存在多種針對自身細(xì)胞核成分的抗體，如抗雙鏈?dna?抗體、抗?sm?抗體等。類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（rheumatoid?arthritis）：產(chǎn)生類風(fēng)濕因子（rf）、抗環(huán)瓜氨酸肽抗體（anti-ccp）等自身抗體。b.激活其他免疫細(xì)胞：b細(xì)胞可以激活其他免疫細(xì)胞，如巨噬細(xì)胞和t細(xì)胞，從而促進(jìn)自身免疫反應(yīng)。例如，在系統(tǒng)性紅斑狼瘡中，b細(xì)胞可以激活t細(xì)胞，導(dǎo)致免疫系統(tǒng)攻擊身體的多種組織和器官。c.促進(jìn)炎癥反應(yīng)：b細(xì)胞可以分泌炎癥因子，促進(jìn)炎癥反應(yīng)，加劇自身免疫反應(yīng)。例如，在關(guān)節(jié)炎中，b細(xì)胞可以產(chǎn)生促炎因子，引起關(guān)節(jié)炎癥狀。d.作為抗原提呈細(xì)胞：例如，多發(fā)性硬化癥（multiplesclerosis），b細(xì)胞提呈自身抗原激活?t?細(xì)胞，導(dǎo)致神經(jīng)髓鞘損傷。重癥肌無力（myasthenia?gravis），b細(xì)胞提呈乙酰膽堿受體相關(guān)抗原，引
2、b?細(xì)胞作為人體免疫系統(tǒng)的主要構(gòu)成之一，主要通過分泌抗體參與免疫反應(yīng)，還可與?t?細(xì)胞相互作用，釋放細(xì)胞因子參與自身免疫的發(fā)生與發(fā)展，目前已證實(shí)?b?細(xì)胞及其效應(yīng)物（如抗體和細(xì)胞因子）參與多個自身免疫性疾病的發(fā)生與發(fā)展。因此，清除?b?細(xì)胞、抑制異常的免疫反應(yīng)，成為治療自身免疫疾病的新策略，具有臨床意義和必要性。
3、目前b?細(xì)胞清除療法（bcdt）主要有：a.?利用抗體藥物靶向結(jié)合?b?細(xì)胞特異性抗原（b?細(xì)胞的特異表面分子主要有cd34、cd38、cd10、igh、cd19、cd20、cd21、cd22?和?cd23等），通過抗體依賴細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性作用（adcc）或補(bǔ)體依賴的細(xì)胞毒性作用（cdc）介導(dǎo)b?細(xì)胞裂解；b.?通過靶向結(jié)合?b?細(xì)胞存活需要的細(xì)胞因子，如?b?細(xì)胞激活因子（baff），從而誘導(dǎo)?b?細(xì)胞凋亡。
4、依據(jù)靶向清除與非靶向清除，可分為：靶向藥物（靶向cd20、靶向cd19（含car-t療法）、靶向?b?細(xì)胞活化因子（baff）等）；體外血漿置換、免疫抑制劑。其中靶向cd20可細(xì)分為：單抗、雙抗；靶向cd19?細(xì)分為單抗、雙抗、adc療法、car-t療法。
5、cd19是一種b細(xì)胞表面的95kpa的糖蛋白，從b細(xì)胞發(fā)育的早期即開始表達(dá)，直至其分化為漿細(xì)胞。cd19是免疫球蛋白（ig）超家族的成員之一，作為b細(xì)胞表面信號轉(zhuǎn)導(dǎo)復(fù)合物的組成元素之一，參與調(diào)控了b細(xì)胞受體的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)過程。在cd19缺陷的小鼠模型中，外盾淋巴組織中b細(xì)胞的數(shù)量會出現(xiàn)明顯的減少，對疫苗和絲裂原的應(yīng)答也會下降，同時伴有血清ig水平的減低。通常認(rèn)為，cd19的表達(dá)只限于b細(xì)胞系（b-cell?1ineage），而不表達(dá)于多能造血干細(xì)胞表面。cd19還表達(dá)于大多數(shù)b細(xì)胞淋巴瘤、套細(xì)胞淋巴瘤、alls、clls、多毛細(xì)胞白血病，和一部分急性髓性白血病細(xì)胞的表面。因此，在對白血病/淋巴瘤的治療中。cd19是一種非常有價值的免疫治療靶點(diǎn)。重要的是，cd19不會表達(dá)于除b細(xì)胞外的大多數(shù)正常細(xì)胞表面，包括多能造血干細(xì)胞，這一特征使cd19可以作為一種安全的治療靶點(diǎn)，可將患者發(fā)生自身免疫性疾病或不可逆性骨髓毒性損傷的風(fēng)險降至最低。當(dāng)前，已經(jīng)研制出了抗cd19的抗體或scfv片段，并且在小鼠模型和人類/靈長類動物中證明了其應(yīng)用的前景。近年來cd19cart細(xì)胞領(lǐng)域競爭激烈，一些大的制藥公司也和研究機(jī)構(gòu)建立了合作關(guān)系。接受表達(dá)cd28或4-1bb的cd19car?t細(xì)胞治療后，小兒和成人復(fù)發(fā)或難治性急性b細(xì)胞淋巴瘤具有大約90%的完全緩解率。但是car-t細(xì)胞療法操作繁瑣，car-t細(xì)胞在給藥前需要用氟達(dá)拉濱和環(huán)磷酰胺進(jìn)行淋巴細(xì)胞耗竭化療。而且car-t細(xì)胞更高的療效伴隨著毒性，car-t細(xì)胞療法中的t細(xì)胞具有內(nèi)在的功能活性，導(dǎo)致其毒性更加復(fù)雜和嚴(yán)重，例如可致命的細(xì)胞因子釋放綜合征（crs）。
6、血液吸附治療是基于孔吸附，和/或疏水作用，和/或靜電吸附，和/或生物親和（補(bǔ)體結(jié)合，fc段結(jié)合和抗原-抗體結(jié)合）原理，通過體外循技術(shù)，廣譜性、選擇性或特異性地吸附血液中的致病因子，又不至于影響機(jī)體正常功能，從而達(dá)到凈化血液，緩解病情的目的。
7、臨床中常用的血液凈化技術(shù)包括血液灌流、血液濾過、血液透析等，目前血液凈化已成為繼手術(shù)、藥物之后的第三種治療方式，成功應(yīng)用于自身免疫性疾病的治療以及肝衰竭、腎衰竭、藥物中毒的治療。近年來，血液凈化也被廣泛應(yīng)用于炎癥因子、膿毒癥、重癥胰腺炎的治療。血液凈化也可用于重癥新冠病毒感染的治療。
8、在血液凈化治療免疫性疾病方面，康碧爾蛋白a免疫吸附柱，將一位患罕見重癥“視神經(jīng)脊髓炎譜系病”10年、雙目失明的20歲女孩救治成功。僅用時18天，患者便康復(fù)出院。它將免疫類疾病患者的血漿輸入吸附柱，讓柱子上的基因工程重組葡萄球菌蛋白a分子，快速“抓住”并清除患者血漿中的致病性抗體，再讓凈化后的血液回輸?shù)饺梭w內(nèi)，如此循環(huán)往復(fù)，持續(xù)清除血液中的致病物質(zhì)，從而達(dá)到救治目的。可廣泛應(yīng)用于治療腎衰竭尿毒癥、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、風(fēng)免疫病、重癥肌無力等神經(jīng)系統(tǒng)疾病以及器官移植排斥反應(yīng)等多個領(lǐng)域。
9、因此，將免疫吸附劑與抗體藥物組成的復(fù)合物也有吸附作用，所以可用于b細(xì)胞異常的自身免疫性疾病治療的輔助治療方式。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
1、本專利技術(shù)的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的至少一個不足，提供一種抗人cd19的單鏈抗體及其應(yīng)用。
2、本專利技術(shù)所采取的技術(shù)方案是：
3、一種抗人cd19的單鏈抗體，包括重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)，所述重鏈可變區(qū)的互補(bǔ)決定區(qū)域cdr1～cdr3的氨基酸序列分別如seq?id?no.1～seq?id?no.3所示，所述輕鏈可變區(qū)的互補(bǔ)決定區(qū)域cdr1～cdr3的氨基酸序列分別如seq?id?no.4～seqid?no.6所示。
4、在一些單鏈抗體的實(shí)例中，所述重鏈可變區(qū)的氨基酸序列如seq?id?no.7所示，所述輕鏈可變區(qū)的氨基酸序列如seq?id?no.8所示。
5、在一些單鏈抗體的實(shí)例中，其為嵌合抗體、人源化抗體、融合fc片段的抗體。
6、在一些單鏈抗體的實(shí)例中，所述fc片段選自人源igg1、igg2、igg3或igg4的fc段或其變體、改造體。
7、在一些單鏈抗體的實(shí)例中，抗體通過連接序列與其他抗體偶聯(lián)，形成二價或多本文檔來自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
1.一種抗人CD19的單鏈抗體，包括重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)，其特征在于，所述重鏈可變區(qū)的互補(bǔ)決定區(qū)域CDR1～CDR3的氨基酸序列分別如SEQ?ID?NO.1～SEQ?ID?NO.3所示，所述輕鏈可變區(qū)的互補(bǔ)決定區(qū)域CDR1～CDR3的氨基酸序列分別如SEQ?ID?NO.4～SEQ?IDNO.6所示。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的單鏈抗體，其特征在于，所述重鏈可變區(qū)的氨基酸序列如SEQID?NO.7所示，所述輕鏈可變區(qū)的氨基酸序列如SEQ?ID?NO.8所示。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的單鏈抗體，其特征在于，其為嵌合抗體、人源化抗體、融合Fc片段的抗體。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的單鏈抗體，其特征在于，所述Fc片段選自人源IgG1、IgG2、IgG3或IgG4的Fc段或其變體、改造體。
5.一種核酸分子，其特征在于，編碼權(quán)利要求1～4任一項所述的單鏈抗體。
6.一種表達(dá)載體，其特征在于，包含權(quán)利要求5所述的核酸分子。
7.權(quán)利要求1～4所述單鏈抗體的應(yīng)用，其特征在于，所述應(yīng)用包括：
8.根據(jù)權(quán)利要求7
9.一種免疫吸附劑，包括固相載體，其特征在于，所述固相載體上偶聯(lián)有權(quán)利要求1～4所述的單鏈抗體。
10.一種血液凈化器械，其特征在于，包括權(quán)利要求9所述的免疫吸附劑。
...【技術(shù)特征摘要】
1.一種抗人cd19的單鏈抗體，包括重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)，其特征在于，所述重鏈可變區(qū)的互補(bǔ)決定區(qū)域cdr1～cdr3的氨基酸序列分別如seq?id?no.1～seq?id?no.3所示，所述輕鏈可變區(qū)的互補(bǔ)決定區(qū)域cdr1～cdr3的氨基酸序列分別如seq?id?no.4～seq?idno.6所示。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的單鏈抗體，其特征在于，所述重鏈可變區(qū)的氨基酸序列如seqid?no.7所示，所述輕鏈可變區(qū)的氨基酸序列如seq?id?no.8所示。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的單鏈抗體，其特征在于，其為嵌合抗體、人源化抗體、融合fc片段的抗體。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的單鏈抗體，其特征...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：吳泳棋，張海珍，陳鑫威，蔡博生，楊正根，陳校園，
申請(專利權(quán))人：廣州康盛生物科技股份有限公司，
類型：發(fā)明
國別省市：
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