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    用于治療腫瘤維持生育力的DNA酶納米材料合成方法技術

    技術編號:44036049 閱讀:4 留言:0更新日期:2025-01-15 01:14
    本發明專利技術涉及用于治療腫瘤維持生育力的DNA酶納米材料合成方法,該方法首先合成帶有APE1酶位點的DNAzyme,然后將其與血紅蛋白、二價鐵溶液和去離子水混合,經過渦旋、離心和洗滌等步驟形成納米復合物,并在合成過程中利用單寧酸實現包裹保存。本發明專利技術合成的新型納米復合物,可以在APE1高表達的腫瘤細胞的中進行解離發揮作用,而在正常細胞中不發揮作用,實現靶向治療,有效保護生殖器官;同時,通過超聲和酶雙控活化合成的新型納米復合物可以實現時空可控聯合治療腫瘤,用于腫瘤治療的生育力維持,避免對生殖器官的損傷。

    【技術實現步驟摘要】

    本專利技術涉及生物醫藥,具體涉及用于治療腫瘤維持生育力的dna酶納米材料合成方法。


    技術介紹

    1、dna酶(dnazyme)是一種短dna低聚物,因其高催化效率和特異性,已成為疾病治療中基因調控的有前途的工具。

    2、dnazyme通過切割連接體光化學整合到dna納米結構中,用于基因調控活性的光學控制已被報道。雖然這些光激活策略提供了dnazyme活性的時空控制,但它們在體內的應用受到光的淺層組織滲透的影響。相比之下,內源性酶由于其高催化效率、底物選擇性和在許多病變細胞中的空間過表達而呈現出更有希望的觸發機制。最近,酶反應元件已被納入dnazyme設計中,以開發有條件地調節其催化活性以響應特定酶觸發的策略。盡管取得了這些進展,但由于缺乏可靠的工程方法,酶激活dnazyme系統在體內腫瘤治療中的應用仍然具有挑戰性。

    3、聲動力治療(sdt)是一種新興的治療方式,它利用低強度超聲(us)激活癌變區域內的聲敏劑,產生活性氧(ros)來根除腫瘤細胞,從而為腫瘤治療提供了一種高度可控的方法。us的優點包括侵入性小,副作用輕,深度組織穿透遠遠超過光(>10cm),使sdt成為一種有前途的治療方式。因此,各種聲敏劑,從有機分子到無機納米顆粒,已經被探索以提高聲動力效率。

    4、無尿嘧啶/無嘧啶內切酶1(ape1)在堿基切除修復途徑中起著至關重要的作用,它負責切除基本(ap)位點以促進dna損傷修復。目前已研究證明使用ape1作為設計酶激活dna系統的觸發器,使疾病細胞選擇性分子成像和治療成為可能。

    5、血紅蛋白(hb)是一種具有四個血紅素基團的天然生物分子,由于其卓越的聲動力效率,水溶性和生物相容性,超越了傳統的有機聲敏劑,因此作為聲敏劑具有顯著的優勢。

    6、dnazymes的治療應用受到細胞膜穿透性差和生物環境不穩定的限制,這就需要使用納米載體進行有效的細胞內遞送。同時,被dnazymes降解的靶rna分子通常在癌癥細胞和正常細胞中表達,導致靶向非腫瘤效應和降低治療精度。為了解決這個問題,研究人員嘗試開發刺激反應策略來實現對dnazyme活動的時空控制,但其抗腫瘤效果與預期相差甚遠。因此,控制聲敏劑與其他治療劑的共同遞送對于推進下一代sdt系統至關重要。


    技術實現思路

    1、為解決上述技術問題,本申請設計一種針對survivin的帶有ape1控制位點的dnazyme,結合血紅蛋白和二價鐵離子形成納米復合物,從而實現在ape1高表達細胞中實現dnazyme解除ap位點發揮作用,在超聲介導下實現腫瘤靶向治療,同時不影響腫瘤治療后的生育力維持。

    2、為實現上述目的,本申請旨在提出用于治療腫瘤維持生育力的dna酶納米材料合成方法,該合成方法包括:

    3、步驟s1:合成帶有ape1酶位點的dnazyme(ap-dz);

    4、步驟s2:在合成管混合ap-dz、血紅蛋白、二價鐵溶液和去離子水;

    5、步驟s3:將步驟s1得到的混合溶液用渦旋儀進行渦旋處理后放入金屬恒溫加熱儀中反應;

    6、步驟s4:將反映后的溶液再次進行渦旋處理后用離心機進行離心處理;

    7、步驟s5:離心結束后,用移液槍吸取棄上清,保留沉淀置于收集管中;

    8、步驟s6:在收集管中加入去離子水后進行第三次渦旋處理;

    9、步驟s7:渦旋處理后在管中加入fecl3·6h2o后進行第四次渦旋處理;

    10、步驟s8:然后進行兩次洗滌后,將dna納米材料放置在4℃中進行保存待使用。

    11、進一步的,所述步驟s2中,合成每100μl,用量為15μlap-dz(濃度為100μm),10μl血紅蛋白(濃度為1mg/ml),3μl二價鐵溶液(濃度為4mg/ml);72μl去離子水。

    12、進一步的,所述步驟s3中渦旋處理時間為10s,所用的金屬恒溫加熱儀需要提前預熱95°,反應時間為2h。

    13、進一步的,所述步驟s4中渦旋處理時間5s,離心條件為13000轉,離心處理時間為10min。

    14、進一步的,所述步驟s6中去離子水用量為100μl,渦旋時間為10s,在渦旋條件下加入5μl的ta(濃度為4mg/ml)。

    15、進一步的,所述步驟s7中fecl3·6h2o濃度為1mg/ml,用量為5μl,渦旋時間為30s。

    16、進一步的,所述步驟s8中洗滌包括以下步驟:

    17、步驟s81:將溶液用離心機進行離心處理后加入去離子水;

    18、步驟s82:進行渦旋處理。

    19、進一步的,所述步驟s81中離心條件為13000轉,離心處理時間為3min,所述去離子水用量為100μl,所述步驟s82中渦旋時間為10s。

    20、進一步的,所述dna納米材料的水合尺寸為143nm~163nm。

    21、進一步的,所述dna納米材料在制備用于腫瘤治療藥物中的應用。

    22、相比于現有技術,本申請的優點和效果如下:

    23、1、本專利技術用于治療腫瘤維持生育力的dna酶納米材料合成方法,該dna納米材料adh@ta能在ape1高表達的腫瘤細胞的中進行解離發揮作用,而在正常細胞中不發揮作用,實現靶向治療,有效保護生殖器官。

    24、2、本專利技術用于治療腫瘤維持生育力的dna酶納米材料合成方法,能實現時空可控聯合治療腫瘤,用于腫瘤治療的生育力維持。

    25、3、本專利技術用于治療腫瘤維持生育力的dna酶納米材料合成方法,其中腫瘤殺傷通過超聲的進一步介導,能實現對腫瘤部位進行超聲,避免對生殖器官的損傷。

    26、上述說明僅是本申請技術方案的概述,為了能夠更清楚了解本申請的技術手段,從而可依照說明書的內容予以實施,并且為了讓本申請的上述和其他目的、特征和優點能夠更明顯易懂,以下以本申請的較佳實施例并配合附圖詳細說明如后。

    27、根據下文結合附圖對本申請具體實施例的詳細描述,本領域技術人員將會更加明了本申請的上述及其他目的、優點和特征。

    本文檔來自技高網
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    【技術保護點】

    1.用于治療腫瘤維持生育力的DNA酶納米材料合成方法,其特征在于,所述合成方法包括以下步驟:

    2.根據權利要求1所述的用于治療腫瘤維持生育力的DNA酶納米材料合成方法,其特征在于:所述步驟S2中,合成每100μL,用量為15μLAP-DZ(濃度為100μM),10μL血紅蛋白(濃度為1mg/ml),3μL二價鐵溶液(濃度為4mg/ml);72μL去離子水。

    3.根據權利要求1所述的用于治療腫瘤維持生育力的DNA酶納米材料合成方法,其特征在于:所述步驟S3中渦旋處理時間為10s,所用的金屬恒溫加熱儀需要提前預熱95°,反應時間為2h。

    4.根據權利要求1所述的用于治療腫瘤維持生育力的DNA酶納米材料合成方法,其特征在于:所述步驟S4中渦旋處理時間5s,離心條件為13000轉,離心處理時間為10min。

    5.根據權利要求1所述的用于治療腫瘤維持生育力的DNA酶納米材料合成方法,其特征在于:所述步驟S6中去離子水用量為100μL,渦旋時間為10s,在渦旋條件下加入5μL的TA(濃度為4mg/ml)。

    6.根據權利要求1所述的用于治療腫瘤維持生育力的DNA酶納米材料合成方法,其特征在于:所述步驟S7中FeCl3·6H2O濃度為1mg/mL,用量為5μL,渦旋時間為30s。

    7.根據權利要求1所述的用于治療腫瘤維持生育力的DNA酶納米材料合成方法,其特征在于:所述步驟S8中洗滌包括以下步驟:

    8.根據權利要求7所述的用于治療腫瘤維持生育力的DNA酶納米材料合成方法,其特征在于:所述步驟S81中離心條件為13000轉,離心處理時間為3min,所述去離子水用量為100μL,所述步驟S82中渦旋時間為10s。

    9.根據權利要求1-8任一項所述的合成方法制得的DNA納米材料,其特征在于,所述DNA納米材料的水合尺寸為143nm~163nm。

    10.根據權利要求9所述的DNA納米材料在制備用于腫瘤治療藥物中的應用。

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    【技術特征摘要】

    1.用于治療腫瘤維持生育力的dna酶納米材料合成方法,其特征在于,所述合成方法包括以下步驟:

    2.根據權利要求1所述的用于治療腫瘤維持生育力的dna酶納米材料合成方法,其特征在于:所述步驟s2中,合成每100μl,用量為15μlap-dz(濃度為100μm),10μl血紅蛋白(濃度為1mg/ml),3μl二價鐵溶液(濃度為4mg/ml);72μl去離子水。

    3.根據權利要求1所述的用于治療腫瘤維持生育力的dna酶納米材料合成方法,其特征在于:所述步驟s3中渦旋處理時間為10s,所用的金屬恒溫加熱儀需要提前預熱95°,反應時間為2h。

    4.根據權利要求1所述的用于治療腫瘤維持生育力的dna酶納米材料合成方法,其特征在于:所述步驟s4中渦旋處理時間5s,離心條件為13000轉,離心處理時間為10min。

    5.根據權利要求1所述的用于治療腫瘤維持生育力的dna酶納米材料合成方法,其特征在于:所述步驟s6中去離子水...

    【專利技術屬性】
    技術研發人員:黃漢記鄭立,陸真慧,覃愛平,楊育妮,黃筱涵王嘉偉舒金輝,周紅,蔣家君,
    申請(專利權)人:廣西醫科大學,
    類型:發明
    國別省市:

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