【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及天然提取物，尤其涉及一種葛仙米醇溶性中性多糖及其制備方法。
技術介紹
1、葛仙米，學名球狀念珠藻，是一種藥食兩用的特色低等藻類植物，有許多念珠狀藻絲包埋于凝膠狀多糖基質中，形成球形或橢球形原植體呈墨綠色，直徑可達2厘米。據《本草綱目拾遺》和《藥性考》記載，葛仙米可食用，亦可入藥。葛仙米富含多糖，有研究報道指出，葛仙米多糖具有良好的抗氧化、抗腫瘤以及提升免疫力等作用。
2、近年來，人們逐漸重視對葛仙米活性成分的研究，結果發現葛仙米中的多糖具有極高的生物活性，且研究均集中于葛仙米水溶性多糖上，對醇溶性多糖的研究較少。莫開菊通過堿酶復合預處理對葛仙米進行優化提取，得到水溶性葛仙米多糖，其單糖組成包括甘露糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖以及半乳糖醛酸甲酯。從目前的研究情況來看，雖然一些研究人員已經鑒定出了一些葛仙米多糖的結構，但目前并沒有公開有關對葛仙米中的醇溶性中性多糖的研究。
技術實現思路
1、有鑒于此，本專利技術提出了一種葛仙米醇溶性中性多糖及其制備方法和應用，旨在填補該領域的研究空缺。
2、本專利技術的技術方案是這樣實現的：本專利技術提供了一種葛仙米醇溶性中性多糖的制備方法，其包括如下步驟：
3、步驟一、將干燥葛仙米粉加入到超純水中，超聲處理，然后加入復合酶，并用鹽酸調節反應體系ph至5.0，酶解處理后，升溫滅活復合酶，過濾，得到葛仙米粗多糖提取液；
4、步驟二、將葛仙米粗多糖提取液濃縮處理，
5、步驟三、將步驟二得到的多糖溶解配制成溶液，然后過聚酰胺樹脂柱，收集透過液；
6、步驟四、濃縮透過液至原體積的1/10-1/20，使用sevag試劑對濃縮后的透過液進行除蛋白操作；
7、步驟五、將除去蛋白的透過液經過經deaeseplifea25葡聚糖凝膠層析柱上樣，再分別按順序使用0mol/l、0.1mol/l、0.3mol/l、0.5mol/l、0.7mol/l的氯化鈉溶液進行分級洗脫，使用全自動餾分收集器收集洗脫液，每個樣品管收集10ml，全程使用苯酚-硫酸法對各餾分進行測定，以吸光度為縱坐標，收集管數為橫坐標繪制洗脫曲線圖，收集第一個洗脫曲線峰對應樣品管的樣品；
8、步驟六、合并步驟五收集的樣品，經過透析袋除鹽后真空冷凍干燥，得到葛仙米醇溶性中性多糖。
9、在一些實施方式中，步驟一種調節酒精度時采用95％乙醇進行調節。
10、在一些實施方式中，在步驟一中，滅活復合酶的方法包括，加熱至100℃，保溫處理10min。
11、在一些實施方式中，超聲處理前，葛仙米與超純水的質量比為1：(10-20)，在超聲處理后，還包括向溶液體系中補充加入超純水，補充超純水后，葛仙米與超純水的質量比為1：(100-200)。
12、在一些實施方式中，步驟一中，復合酶包括果膠酶和纖維素酶，果膠酶：纖維素酶的質量比為2:1。
13、在一些實施方式中，步驟一中，復合酶的添加量為葛仙米粉質量的1.5％-2.5％，酶解溫度為30-65℃，酶解時間為1-4h。
14、在一些實施方式中，步驟一中，超聲功率為120-160w，超聲時間為30-60min。
15、在一些實施方式中，步驟二中，濃縮處理為將葛仙米粗多糖提取液濃縮至原體積的1/30-1/50，離心處理的轉速為3000-5000rpm，離心時間為5-15min。
16、在一些實施方式中，步驟三中，將步驟二得到的多糖溶解配制成溶液濃度為5-10mg/ml。
17、上述實施方式中，配置溶液時所用溶劑為超純水。
18、在一些實施方式中，步驟四中，sevag溶劑與濃縮后的透過液的體積比為(1-2)：1。
19、上述實施方式中，所用sevag溶劑為氯仿與正丁醇按照體積比為5：1混合制備得到。
20、在一些實施方式中，步驟六中，透析袋的分子量為8000-12000da。
21、第二方面，本專利技術還提供一種由上述制備方法制備得到的葛仙米醇溶性中性多糖，將該多糖命名為gxm-1。
22、在一些實施方式中，上述制備得到的葛仙米醇溶性中性多糖gxm-1的蛋湯組成包括巖藻糖、鼠李糖、阿拉伯糖、半乳糖、葡萄糖，前述單糖的摩爾比為1.31：3.40：0.57：2.87：91.85，重均分子量為2.690×106da，數均分子量為1.454×106da，峰位分子量為8.694×105da，分子量分布范圍為7×105da-6×106da，其鍵合結構連接方式包括t-glc(p)、6-glc(p)、4-glc(p)、3,4-glc(p)、4,6-gal(p)、3,4,6-glc(p)，相對摩爾比為21.54：3.49：50.21：14.59：8.38：1.78。
23、第三方面，本專利技術還提供一種上述葛仙米醇溶性中性多糖在酒體中的應用，將葛仙米醇溶性中性多糖添加至酒體中，可以使酒體具有抗疲勞活性。
24、本專利技術相對于現有技術具有以下有益效果：
25、本專利技術從葛仙米中提取并純化得到了均一性的葛仙米醇溶性多糖gxm-1，并通過結構鑒定得到其單糖組成和鍵合結構，為葛仙米多糖在酒體中的穩定應用提供參考。
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1.一種葛仙米醇溶性中性多糖的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：
2.如權利要求1所述的葛仙米醇溶性中性多糖的制備方法，其特征在于，步驟一中，復合酶包括果膠酶和纖維素酶，果膠酶：纖維素酶的質量比為2:1。
3.如權利要求1所述的葛仙米醇溶性中性多糖的制備方法，其特征在于，步驟一中，復合酶的添加量為葛仙米粉質量的1.5％-2.5％，酶解溫度為30-65℃，酶解時間為1-4h。
4.如權利要求1所述的葛仙米醇溶性中性多糖的制備方法，其特征在于，步驟一中，超聲功率為120-160W，超聲時間為30-60min。
5.如權利要求1所述的葛仙米醇溶性中性多糖的制備方法，其特征在于，步驟三中，將步驟二得到的多糖溶解配制成溶液濃度為5-10mg/ml。
6.如權利要求1所述的葛仙米醇溶性中性多糖的制備方法，其特征在于，步驟四中，Sevag溶劑與濃縮后的透過液大體積比為(1-2)：1。
7.如權利要求所述的葛仙米醇溶性中性多糖的制備方法，其特征在于，步驟六中，透析袋的分子量為8000-12000Da。
8.一種
9.如權利要求8所述的葛仙米醇溶性中性多糖，其特征在于，其單糖組成包括巖藻糖、鼠李糖、阿拉伯糖、半乳糖、葡萄糖，且摩爾比為1.31：3.40：0.57：2.87：91.85，重均分子量為2.690×106Da，數均分子量為1.454×106Da，峰位分子量為8.694×105Da，分子量分布范圍為7×105Da-6×106Da，其鍵合結構連接方式包括t-Glc(p)、6-Glc(p)、4-Glc(p)、3,4-Glc(p)、4,6-Gal(p)、3,4,6-Glc(p)，相對摩爾比為21.54：3.49：50.21：14.59：8.38：1.78。
10.如權利要求8或9所述的葛仙米醇溶性中性多糖的應用，其特征在于，作為添加劑在酒體中的應用。
...【技術特征摘要】
1.一種葛仙米醇溶性中性多糖的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：
2.如權利要求1所述的葛仙米醇溶性中性多糖的制備方法，其特征在于，步驟一中，復合酶包括果膠酶和纖維素酶，果膠酶：纖維素酶的質量比為2:1。
3.如權利要求1所述的葛仙米醇溶性中性多糖的制備方法，其特征在于，步驟一中，復合酶的添加量為葛仙米粉質量的1.5％-2.5％，酶解溫度為30-65℃，酶解時間為1-4h。
4.如權利要求1所述的葛仙米醇溶性中性多糖的制備方法，其特征在于，步驟一中，超聲功率為120-160w，超聲時間為30-60min。
5.如權利要求1所述的葛仙米醇溶性中性多糖的制備方法，其特征在于，步驟三中，將步驟二得到的多糖溶解配制成溶液濃度為5-10mg/ml。
6.如權利要求1所述的葛仙米醇溶性中性多糖的制備方法，其特征在于，步驟四中，sevag溶劑與濃縮后的透過液大體積比為(1-2)：1。
7.如權利要求所述的...
【專利技術屬性】
技術研發人員：王喆，潘凱進，陳陽，楊強，徐劍，石萬銀，
申請(專利權)人：勁牌有限公司，
類型：發明
國別省市：
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