【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)屬于生物醫(yī)藥，尤其涉及一種負載蛋白質(zhì)的脂質(zhì)納米組裝體及其制備方法和應(yīng)用。
技術(shù)介紹
1、脂質(zhì)納米載體作為一種高度可調(diào)的藥物遞送系統(tǒng)，近年來在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域得到了廣泛關(guān)注，已廣泛應(yīng)用于癌癥、神經(jīng)系統(tǒng)疾病、傳染病及失控的炎癥等多種疾病的治療。該載體由類脂質(zhì)分子組成，能夠形成穩(wěn)定的納米結(jié)構(gòu)。通過精心設(shè)計其結(jié)構(gòu)，脂質(zhì)納米載體可以顯著增強穿透生物屏障(如細胞膜或細菌生物膜)的能力，從而提高與目標細胞或病原體的相互作用。此外，通過調(diào)整納米結(jié)構(gòu)的形態(tài)，還可以進一步調(diào)控藥物的釋放行為、細胞攝取效率及生物膜的穿透能力，從而實現(xiàn)更精準和有效的藥物遞送。
2、盡管脂質(zhì)納米載體在諸多方面表現(xiàn)出顯著優(yōu)勢，但在裝載蛋白質(zhì)類治療藥物時仍然面臨挑戰(zhàn)。蛋白質(zhì)類治療藥物在許多疾病的治療中需要與化學(xué)治療藥物結(jié)合使用。然而，由于脂質(zhì)分子的親脂性，這些納米結(jié)構(gòu)通常形成膠束或固體納米顆粒，其疏水核心不利于蛋白質(zhì)類藥物的穩(wěn)定裝載。蛋白質(zhì)類藥物在水環(huán)境中需要保持其結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性和功能性，而脂質(zhì)納米載體的疏水特性可能導(dǎo)致蛋白質(zhì)在裝載過程中發(fā)生變性、聚集或降解，削弱其治療效果。此外，脂質(zhì)納米載體的尺寸和結(jié)構(gòu)可能難以為較大的蛋白質(zhì)分子提供足夠的空間或適宜的構(gòu)象，導(dǎo)致裝載效率低下，并可能導(dǎo)致蛋白質(zhì)在封裝后喪失活性。因此，如何在脂質(zhì)納米載體中有效封裝和遞送蛋白質(zhì)治療藥物實現(xiàn)對生物被膜感染的協(xié)同治療，仍然是當前
的一大挑戰(zhàn)。
技術(shù)實現(xiàn)思路
1、為解決上述技術(shù)問題，本專利技術(shù)提出了一種負載蛋白質(zhì)的脂質(zhì)納米組裝體及其制備方
2、為實現(xiàn)上述目的，本專利技術(shù)提供了以下技術(shù)方案：
3、本專利技術(shù)的技術(shù)方案之一：
4、一種負載蛋白質(zhì)的脂質(zhì)納米組裝體的制備方法，包括以下步驟：
5、由含兒茶酚的α-氨基膦酸鹽衍生脂質(zhì)與苯基硼酸衍生物通過動態(tài)共價硼酸酯鍵結(jié)合形成脂質(zhì)分子，所述脂質(zhì)分子的結(jié)構(gòu)式如式ⅰ所示：
6、
7、式ⅰ中，r為含氮雜環(huán)化合物，包括1-乙基-1h-咪唑、吡啶、酮康唑、環(huán)丙沙星或伊康唑；
8、將所述脂質(zhì)分子溶于有機溶劑中，濃縮，加入溶于磷酸緩沖液中的蛋白質(zhì)治療藥物，超聲振蕩，離心，棄去上清液，用磷酸緩沖液重懸固體，得到負載蛋白質(zhì)的脂質(zhì)納米組裝體。
9、本專利技術(shù)負載蛋白質(zhì)的脂質(zhì)納米組裝體是利用含兒茶酚的α-氨基膦酸鹽衍生脂質(zhì)與苯基硼酸衍生物通過動態(tài)共價硼酸酯鍵結(jié)合生成的海綿狀脂質(zhì)分子，脂質(zhì)分子自組裝形成脂質(zhì)納米載體，包含水相和油相兩個區(qū)域，水相區(qū)域可以以高負載效率負載蛋白質(zhì)，而油相區(qū)域可以通過動態(tài)共價鍵高載藥量地負載疏水小分子藥物。通過篩選不同的苯基硼酸衍生物，優(yōu)化脂質(zhì)納米載體結(jié)構(gòu)與性質(zhì)，調(diào)控其與蛋白質(zhì)之間的相互作用，顯著提高蛋白質(zhì)的負載量與保護效率。在微酸環(huán)境與氧化刺激下，本專利技術(shù)制備的脂質(zhì)納米組裝體可將不同藥物分子與蛋白質(zhì)藥物進行可控釋放，實現(xiàn)協(xié)同治療的目的。
10、優(yōu)選的，所述含兒茶酚的α-氨基膦酸鹽衍生脂質(zhì)與苯基硼酸衍生物通過動態(tài)共價硼酸酯鍵結(jié)合形成脂質(zhì)分子的步驟為：將所述含兒茶酚的α-氨基膦酸鹽衍生脂質(zhì)與苯基硼酸衍生物溶于三氯甲烷中，并在45℃條件下反應(yīng)12h，通過動態(tài)共價硼酸酯鍵的連接，制得脂質(zhì)分子。
11、優(yōu)選的，所述含兒茶酚的α-氨基膦酸鹽衍生脂質(zhì)與苯基硼酸衍生物的摩爾比為1:1。
12、優(yōu)選的，所述蛋白質(zhì)治療藥物包括dnase蛋白質(zhì)(脫氧核糖核酸酶)、rnase蛋白質(zhì)(核糖核酸酶)、hrp蛋白質(zhì)(辣根過氧化物酶)或bsa蛋白質(zhì)(牛血清蛋白)。
13、優(yōu)選的，所述含兒茶酚的α-氨基膦酸鹽衍生脂質(zhì)的制備方法，包括以下步驟：
14、將二苯基亞磷酸鹽和1-十烷醇溶于吡啶中，在130～150℃條件下反應(yīng)4h，得到十烷基磷酸酯；將n,n-二乙基乙二胺和3,4-二羥基苯甲醛在氮氣保護氛圍下于甲醇中混合，在65～75℃條件下反應(yīng)3h，減壓旋干后加入所述十烷基磷酸酯，在100～110℃條件下反應(yīng)1.5h，制得所述含兒茶酚的α-氨基膦酸鹽衍生脂質(zhì)，其結(jié)構(gòu)式如式ⅱ所示：
15、
16、優(yōu)選的，在含兒茶酚的α-氨基膦酸鹽衍生脂質(zhì)的制備方法中，所述二苯基亞磷酸鹽和1-十烷醇的摩爾比為1:2；
17、所述n,n-二乙基乙二胺和3,4-二羥基苯甲醛的摩爾比為1:1。
18、更優(yōu)選的，烷基鏈長度為10的含兒茶酚的α-氨基膦酸鹽衍生脂質(zhì)的制備方法為：
19、將50mmol的二苯基亞磷酸鹽、100mmol的1-十烷醇和50ml的吡啶加入圓底燒瓶中，在140℃下反應(yīng)4h，反應(yīng)結(jié)束后，通過減壓蒸餾去除吡啶及副產(chǎn)物苯酚，得到白色固體十烷基磷酸酯；隨后，將2mmol的n,n-二乙基乙二胺與2mmol的3,4-二羥基苯甲醛在氮氣保護下混合，加入6ml甲醇，在70℃下反應(yīng)3h，反應(yīng)完成后，將溶劑在30℃下減壓旋干，然后迅速加入2mmol十烷基磷酸酯，并在100℃下反應(yīng)1.5h；最后，通過硅膠層析柱進行分離提純，依次使用體積比為1:30、1:20、1:10的甲醇與二氯甲烷混合溶液作為洗脫液進行洗脫，最終獲得烷基鏈長度為10的含兒茶酚的α-氨基膦酸鹽衍生脂質(zhì)。
20、優(yōu)選的，所述苯基硼酸衍生物的結(jié)構(gòu)式如下：
21、
22、優(yōu)選的，酮康唑苯硼酸衍生物的制備方法，步驟如下：
23、將1mmol的酮康唑和1mmol的4-(溴甲基)苯基硼酸溶解于15ml乙腈中，在73℃下反應(yīng)過夜，反應(yīng)完成后，通過減壓蒸餾去除反應(yīng)溶劑，得到粗產(chǎn)物；最后，粗產(chǎn)物通過硅膠柱層析純化，最終獲得酮康唑苯硼酸衍生物，即苯基硼酸修飾的酮康唑(ket-pba)，其為白色固體，合成路線如下：
24、
25、優(yōu)選的，環(huán)丙沙星苯硼酸衍生物的制備方法，步驟如下：
26、將1mmol的環(huán)丙沙星加入到8ml的dmf(二甲基甲酰胺)和水的混合溶液中(dmf和水的體積比為2:1)，加入3mmol的碳酸鉀超聲使其溶解，隨后加入1.2mmol的4-(溴甲基)苯基硼，攪拌過夜，用薄層色譜發(fā)監(jiān)測反應(yīng)進度，反應(yīng)結(jié)束后，用1m的鹽酸溶液調(diào)節(jié)體系的ph至中性，使產(chǎn)物沉淀析出，抽濾、干燥得白色固體，即為環(huán)丙沙星苯硼酸衍生物，合成路線如下：
27、
28、優(yōu)選的，吡啶苯硼酸衍生物的制備方法，步驟如下:
29、將1mmol的吡啶和1mmol的4-(溴甲基)苯基硼酸溶解于15ml乙腈中，在70℃下反應(yīng)過夜。將反應(yīng)得到的沉淀物過濾，用二甲醚洗滌，本文檔來自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護點】
1.一種負載蛋白質(zhì)的脂質(zhì)納米組裝體的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的負載蛋白質(zhì)的脂質(zhì)納米組裝體的制備方法，其特征在于，所述含兒茶酚的α-氨基膦酸鹽衍生脂質(zhì)的制備方法，包括以下步驟：
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的負載蛋白質(zhì)的脂質(zhì)納米組裝體的制備方法，其特征在于，所述二苯基亞磷酸鹽和1-十烷醇的摩爾比為1:2；
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的負載蛋白質(zhì)的脂質(zhì)納米組裝體的制備方法，其特征在于，所述苯基硼酸衍生物的結(jié)構(gòu)式如下：
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的負載蛋白質(zhì)的脂質(zhì)納米組裝體的制備方法，其特征在于，所述含兒茶酚的α-氨基膦酸鹽衍生脂質(zhì)與苯基硼酸衍生物的摩爾比為1:1。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的負載蛋白質(zhì)的脂質(zhì)納米組裝體的制備方法，其特征在于，所述有機溶劑包括三氯甲烷、乙醇、甲醇或乙腈；
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的負載蛋白質(zhì)的脂質(zhì)納米組裝體的制備方法，其特征在于，所述超聲振蕩的溫度為35～45℃，超聲振蕩的時間為5～20min。
8.一種負載蛋白質(zhì)的脂質(zhì)納米組裝體，根據(jù)權(quán)利要求1～7任一
9.權(quán)利要求8所述的負載蛋白質(zhì)的脂質(zhì)納米組裝體在解離生物被膜中的應(yīng)用。
10.權(quán)利要求8所述的負載蛋白質(zhì)的脂質(zhì)納米組裝體在制備抗真菌藥物中的應(yīng)用。
...【技術(shù)特征摘要】
1.一種負載蛋白質(zhì)的脂質(zhì)納米組裝體的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的負載蛋白質(zhì)的脂質(zhì)納米組裝體的制備方法，其特征在于，所述含兒茶酚的α-氨基膦酸鹽衍生脂質(zhì)的制備方法，包括以下步驟：
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的負載蛋白質(zhì)的脂質(zhì)納米組裝體的制備方法，其特征在于，所述二苯基亞磷酸鹽和1-十烷醇的摩爾比為1:2；
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的負載蛋白質(zhì)的脂質(zhì)納米組裝體的制備方法，其特征在于，所述苯基硼酸衍生物的結(jié)構(gòu)式如下：
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的負載蛋白質(zhì)的脂質(zhì)納米組裝體的制備方法，其特征在于，所述含兒茶酚的α-氨基膦酸鹽衍...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：顏笑健，劉勇，王雨萌，劉陽，李圓鳳，樸銀子，
申請(專利權(quán))人：溫州醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院，
類型：發(fā)明
國別省市：
還沒有人留言評論。發(fā)表了對其他瀏覽者有用的留言會獲得科技券。