【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及制備谷朊粉短肽的方法，尤其涉及一種雙酶復合酶解制備谷朊粉短肽的方法。
技術介紹
1、小麥是世界上種植面積最廣的谷物，總產量僅次于水稻而略高于玉米。在我國，小麥年產量約為1億噸，居所有谷物之首。谷朊粉又稱活性面筋粉、小麥面筋蛋白，是以小麥為原料，經過深加工提取的一種淡黃色粉狀的天然谷物蛋白，在面制品、肉制品、水產制品、飲料業有廣泛的應用價值。據統計，世界上每年生產谷朊粉約50萬噸。谷朊粉含谷朊蛋白70%以上，是物美價廉的植物性蛋白資源。作為小麥淀粉加工的副產物，谷朊粉組成中除含有大量蛋白質外，還含有5%-10%的淀粉及少量的粗纖維，這些成分包裹了谷朊粉蛋白分子，阻止了谷朊蛋白與蛋白水解酶的接觸，限制了谷朊蛋白的酶解。目前谷朊粉酶解技術大多只使用蛋白酶進行蛋白質的酶解，因此，亟需一種新的不使用蛋白酶對谷朊粉進行酶解得到短肽的方法。
技術實現思路
1、本專利技術提供一種雙酶復合酶解制備谷朊粉短肽的方法，以解決
技術介紹
中指出的缺陷。
2、根據本專利技術實施例的第一方面，一種雙酶復合酶解制備谷朊粉短肽的方法，包括以下步驟：
3、步驟1：將谷朊粉經過球磨得到谷朊粉細粉粗品，將所述谷朊粉細粉粗品過篩得到谷朊粉細粉；
4、步驟2：將所述谷朊粉細粉與水混合，然后在75℃-90℃下加熱1.5-4h，得到第一混合漿料；
5、步驟3：向所述第一混合漿料中加入乙酸-乙酸鈉緩沖液，并調節ph值為5.0-6.0，得到第二混合漿料；
6、步
7、步驟5：制備包埋α-淀粉酶的水凝膠材料；
8、步驟6：向所述第一酶解液中加入酸性溶液和乙酰丙酮，調節ph值為3.0-3.5，然后加入包埋α-淀粉酶的水凝膠材料，在40℃-50℃下進行酶解，得到第二酶解液；在步驟6的酶解過程中保持ph值和溫度不變；
9、步驟7：將所述第二酶解液經過滅酶、離心和干燥，得到所述谷朊粉短肽。
10、在本專利技術實施例的一個方面，步驟1中，球磨過程包括：將所述谷朊粉加入至無水乙醇中進行球磨，所述谷朊粉和無水乙醇的質量比為1:(3.5-5)，使用5-10個10mm的瑪瑙球和25-40個6mm的瑪瑙球作為磨球，球磨機參數設置為轉數200-250rpm、球磨時間30-60min。
11、在本專利技術實施例的一個方面，具體地，步驟1中，球磨過程包括：將所述谷朊粉加入至無水乙醇中進行球磨，所述谷朊粉和無水乙醇的質量比為1:4，使用8個10mm的瑪瑙球和30個6mm的瑪瑙球作為磨球，球磨機參數設置為轉數250rpm、球磨時間45min。
12、在本專利技術實施例的一個方面，步驟1中，過篩的目數為150-200目。
13、在本專利技術實施例的一個方面，具體地，步驟1中，過篩的目數為150-200目。
14、在本專利技術實施例的一個方面，步驟2中，所述谷朊粉細粉與水的質量比為1:(10-15)。
15、在本專利技術實施例的一個方面，具體地，步驟2中，所述谷朊粉細粉與水的質量比為1:12。
16、在本專利技術實施例的一個方面，步驟4中，酶解時間為1.5-3h。
17、在本專利技術實施例的一個方面，具體地，酶解時間為2h。
18、在本專利技術實施例的一個方面，步驟6中，所述酸性溶液為稀鹽酸或冰醋酸。
19、在本專利技術實施例的一個方面，步驟6中，酶解時間為1-2h。
20、在本專利技術實施例的一個方面，具體地，步驟6中，酶解時間為1.5h。
21、在本專利技術實施例的一個方面，所述固定化的普魯蘭酶通過以下步驟制備：
22、步驟1-a：將普魯蘭酶和磁性fe3o4納米粒子分別加入至pbs緩沖溶液中，分別振蕩1-3h，然后將二者混合，在4℃下結合1.5-3h，得到第三混合溶液；
23、步驟2-a：向所述第三混合溶液加入第一交聯劑，在20℃-35℃下振蕩8-12h，然后靜置8-12h，使用磁鐵吸附磁性fe3o4納米粒子，得到所述固定化的普魯蘭酶。
24、在本專利技術實施例的一個方面，步驟1-a中所使用的提供普魯蘭酶是經過純化后得到的，但不限于此。
25、在本專利技術實施例的一個方面，在第三混合溶液中，磁性fe3o4納米粒子的質量百分含量為2.5-5%。
26、在本專利技術實施例的一個方面，具體地，在第三混合溶液中，磁性fe3o4納米粒子的質量百分含量為3.5%。
27、在本專利技術實施例的一個方面，步驟4中，普魯蘭酶的用量為1000-2000u/g原料。
28、在本專利技術實施例的一個方面，步驟6中，α-淀粉酶的用量為600-1500u/g原料。
29、在本專利技術實施例的一個方面，在步驟2-a中，在使用磁鐵吸附磁性fe3o4納米粒子后，經過干燥過程，得到所述固定化的普魯蘭酶。
30、在本專利技術實施例的一個方面，所述第一交聯劑為4-(n-馬來酰亞胺甲基)環己烷-1-羧酸磺酸基琥珀酰亞胺酯鈉鹽或1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺。
31、在本專利技術實施例的一個方面，在第三混合溶液中，所述第一交聯劑的質量百分含量為1%-1.5%。
32、在本專利技術實施例的一個方面，所述固定化的普魯蘭酶通過以下步驟制備：
33、步驟1-a：將普魯蘭酶和磁性fe3o4納米粒子分別加入至同體積的pbs緩沖溶液中，分別振蕩1.5h，然后將二者混合，在4℃下結合2h，得到第三混合溶液；
34、步驟2-a：向所述第三混合溶液加入1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺，在25℃下振蕩10h，然后靜置8h，使用磁鐵吸附磁性fe3o4納米粒子，經過干燥后得到所述固定化的普魯蘭酶。
35、在本專利技術實施例的一個方面，所述包埋α-淀粉酶的水凝膠材料通過以下步驟制備：
36、步驟1-c：將聚乙二醇二丙烯酸酯和聚乙二醇甲基丙烯酸酯加入至水中，加熱至45℃-60℃并保持攪拌，然后逐滴加入α-淀粉酶溶液，得到第四混合溶液；
37、步驟2-c：將所述第四混合溶液溫度降至室溫，然后加入光引發劑，振蕩2-4h，得到第五混合溶液；
38、步驟3-c：將所述第五混合溶液在365nm紫外燈下光照1-2h，得到水凝膠；
39、步驟4-c：使用pbs緩沖溶液對所述水凝膠進行沖洗，然后加入第二交聯劑，經過30-60min的交聯反應，得到所述包埋α-淀粉酶的水凝膠材料粗品。
40、在本專利技術實施例的一個方面，所述第二交聯劑為戊二醛。
41、在本專利技術實施例的一個方面，所述第二交聯劑的質量，為步驟3-c得到的水凝膠質量的1.5%-2.5%。
42、在本專利技術實施例的一個方面，所述聚乙二醇二丙烯酸酯和聚乙二醇甲基丙烯酸本文檔來自技高網...
【技術保護點】
1.一種雙酶復合酶解制備谷朊粉短肽的方法，其特征在于，包括以下步驟：
2.根據權利要求1所述的雙酶復合酶解制備谷朊粉短肽的方法，其特征在于，滿足以下條件中的至少一個：
3.根據權利要求1所述的雙酶復合酶解制備谷朊粉短肽的方法，其特征在于，所述固定化的普魯蘭酶通過以下步驟制備：
4.根據權利要求1所述的雙酶復合酶解制備谷朊粉短肽的方法，其特征在于，所述包埋α-淀粉酶的水凝膠材料通過以下步驟制備：
5.根據權利要求3所述的雙酶復合酶解制備谷朊粉短肽的方法，其特征在于，所述第一交聯劑為4-(N-馬來酰亞胺甲基)環己烷-1-羧酸磺酸基琥珀酰亞胺酯鈉鹽或1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺。
6.根據權利要求4所述的雙酶復合酶解制備谷朊粉短肽的方法，其特征在于，所述第二交聯劑為戊二醛。
7.根據權利要求1所述的雙酶復合酶解制備谷朊粉短肽的方法，其特征在于，步驟7滿足以下條件中的至少一個：
8.一種谷朊粉短肽，其特征在于，所述谷朊粉短肽通過權利要求1-7任一項所述的雙酶復合酶解制備谷朊粉短肽的方法制備
9.根據權利要求8所述的谷朊粉短肽，其特征在于，所述谷朊粉短肽中分子量小于1000Da的含量為89%-98%。
...【技術特征摘要】
1.一種雙酶復合酶解制備谷朊粉短肽的方法，其特征在于，包括以下步驟：
2.根據權利要求1所述的雙酶復合酶解制備谷朊粉短肽的方法，其特征在于，滿足以下條件中的至少一個：
3.根據權利要求1所述的雙酶復合酶解制備谷朊粉短肽的方法，其特征在于，所述固定化的普魯蘭酶通過以下步驟制備：
4.根據權利要求1所述的雙酶復合酶解制備谷朊粉短肽的方法，其特征在于，所述包埋α-淀粉酶的水凝膠材料通過以下步驟制備：
5.根據權利要求3所述的雙酶復合酶解制備谷朊粉短肽的方法，其特征在于，所述第一交聯劑為4-(n-馬來酰亞胺甲基)環己...
【專利技術屬性】
技術研發人員：孫福林，于清，郝夕祥，王立寶，韓代軍，
申請(專利權)人：山東渠風食品科技有限公司，
類型：發明
國別省市：
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