【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及生物醫學領域，具體涉及用于不同模式allohct前供者篩選和移植后agvhd風險預測的基因組合及其應用。
技術介紹
1、異基因造血細胞移植(allogeneic?hematopoietic?cell?transplantation，allohct)可有效治療白血病、遺傳性疾病、自身免疫病等70余種疾病。急性移植物抗宿主病(acute?graft-versus-host?disease，agvhd)是allohct后常見的致死性并發癥，嚴重影響患者預后和生存。長期以來，供受者之間hla基因型是否匹配一直被認為是影響agvhd發生的決定性因素，選擇與受者hla完全相合的供者曾經是allohct領域的“金標準”。經過幾十年的發展和完善，北京大學血液病研究所原創的以抗胸腺球蛋白(atg)和粒細胞集落刺激因子(g-csf)誘導免疫耐受為基礎的hla單倍型相合allohct方案已取得與hla全相合移植相當的臨床療效，成為我國最主要的allohct模式，同時也在世界各國被廣泛應用。
2、hla單倍型相合移植方案的巨大成功意味著在臨床實踐中跨越了hla不合這一經典免疫學屏障，但無論hla單倍型相合還是hla全相合移植后均會發生agvhd，高度提示存在影響agvhd發生的其他遺傳學因素。另一方面，hla單倍型相合移植的成功應用極大解決了供者來源匱乏問題，使得患者父母、子女、同胞以及旁系親屬都成為潛在的候選供者。當患者擁有多個潛在供者時，如何選擇最合適的供者對于降低agvhd的發生風險、提高患者總生存率具有重要意義。>
技術實現思路
1、本專利技術的目的在于提供用于hla單倍型相合和hla全相合異基因造血細胞移植(allohct)前供者篩選和allohct后急性移植物抗宿主病(agvhd)風險預測的基因組合及其應用。
2、為了實現上述目的，本專利技術首先提供了檢測供-受者中基因對是否發生突變的物質的新用途。
3、本專利技術提供了檢測供-受者中基因對是否發生突變的物質在如下a1)-a4)中任一種中的應用：
4、a1)制備篩選或輔助篩選異基因造血細胞移植前供者的產品；
5、a2)制備異基因造血細胞移植前供者和受者之間的配對或輔助配對(對allohct前供者和受者進行匹配或輔助匹配)的產品；
6、a3)制備預測或輔助預測異基因造血細胞移植后患者發生急性移植物抗宿主病的風險的產品；
7、a4)制備診斷或輔助診斷異基因造血細胞移植后患者是否發生急性移植物抗宿主病的產品。
8、本專利技術還提供了檢測供-受者中基因對是否發生突變的物質在如下b1)-b4)任一種中的應用：
9、b1)篩選或輔助篩選異基因造血細胞移植前供者；
10、b2)異基因造血細胞移植前供者和受者之間的配對或輔助配對(對allohct前供者和受者進行匹配或輔助匹配)；
11、b3)預測或輔助預測異基因造血細胞移植后患者發生急性移植物抗宿主病的風險；
12、b4)診斷或輔助診斷異基因造血細胞移植后患者是否發生急性移植物抗宿主病。
13、為了實現上述目的，本專利技術還提供了一種具有如下a1)-a4)任一種功能的試劑盒，其包括檢測供-受者中基因對是否發生突變的物質；
14、a1)篩選或輔助篩選異基因造血細胞移植前供者；
15、a2)造血細胞移植前供者和受者之間的配對或輔助配對(對allohct前供者和受者進行匹配或輔助匹配)；
16、a3)預測或輔助預測造血細胞移植后患者發生急性移植物抗宿主病的風險；
17、a4)診斷或輔助診斷造血細胞移植后患者是否發生急性移植物抗宿主病。
18、以上任一所述應用或試劑盒中，所述基因對為如下基因對中的至少一種：adamts7-apol4、agap3-acr、anapc1-acr、card8-sirpb1、dcaf15-acr、dennd3-acr、frmd5-myct1、hapln3-acr、hrnr-acr、magee2-acr、myct1-krtap10-1、myct1-oas1、nudt1-acr、oas1-acr、pabpc3-acr、sirpa-acr、slc35g6-acr、tlr8-acr、zfpm1-acr、actn2-obscn、cdh15-frmd5、cdh15-gpr161、cdh15-obscn、gnrh2-frmd5、gnrh2-krt24、gnrh2-magee2、gnrh2-obscn、gpsm1-obscn、hapln3-obscn、lcn10-cd33、ms4a12-actn2、ms4a12-znf211、rbmx-cd33、sirpb1-actn2、sirpb1-obscn。
19、以上任一所述應用或試劑盒中，每個基因對中“-”前后兩個基因分別對應供者和受者，即將上述每個基因對中位于“-”之前的基因記作第一基因，位于“-”之后的基因記作第二基因，所述檢測供-受者中基因對是否發生突變是指檢測供者中的第一基因和受者中的第二基因是否發生突變。
20、以上任一所述應用或試劑盒中，所述檢測供-受者中基因對是否發生突變的物質可為檢測供-受者外周血中基因對是否發生突變的物質。
21、進一步的，所述檢測供-受者外周血中基因對是否發生突變的物質可為檢測供-受者外周血中基因對是否發生突變的試劑和/或儀器。
22、所述試劑和/或儀器包括但不限于提取人體外周血細胞基因組dna的試劑，采用現有技術中的各種常規方法(如dna測序、限制性酶切片段長度多態性、單鏈構象多態性、等位基因特異性的寡核苷酸雜交等等)檢測外周血中基因對是否發生突變所需的試劑和/或儀器。
23、更進一步的，利用dna測序(如高通量測序或一代測序等等)檢測外周血中基因對是否發生突變所需的試劑和/或儀器包括測序中所用的各種引物、探針和測序儀。
24、在本專利技術的一個具體實施例中，所述dna測序的方法具體可包括如下步驟：
25、1、抽取allohct前供者、受者靜脈血，并抽提基因組dna；
26、2、使用酶切方法將200ng基因組dna隨機片段化為150-200bp平均長度，經末端修復補平并在3’末端加a堿基形成粘性末端，然后與含有特異性barcode序列的接頭連接，再用磁珠篩選去除連接不完整的產物以及接頭自連產物，最后利用與接頭序列互補的通用引物進行pcr擴增，形成測序文庫；
27、3、使用pool探針在雜交緩沖液中進行雜交，然后使用磁珠捕獲雜交的目的片段并分離純化，再pcr擴增捕獲的dna片段并進行捕獲文庫的質檢(包括qubit濃度測定和2100bioanalyzer片段長度測定)，最后在novaseq6000測序儀上，按照illumina的標準流程進行pe150高通量測序；
28、4、使用測序圖譜進行基因型分析。
29、以上任一所述應用或試劑盒本文檔來自技高網...
【技術保護點】
1.檢測供-受者中基因對是否發生突變的物質在如下A1)-A4)任一種中的應用：
2.檢測供-受者中基因對是否發生突變的物質在如下B1)-B4)任一種中的應用：
3.根據權利要求1或2所述的應用，其特征在于：所述異基因造血細胞移植包括HLA單倍型相合異基因造血細胞移植和HLA全相合異基因造血細胞移植。
4.根據權利要求1-3任一所述的應用，其特征在于：所述檢測供-受者中基因對是否發生突變的物質為檢測供-受者外周血中基因對是否發生突變的物質。
5.根據權利要求1-4任一所述的應用，其特征在于：所述檢測供-受者外周血中基因對是否發生突變的物質為檢測供-受者外周血中基因對是否發生突變的試劑和/或儀器。
6.一種具有如下a1)-a4)任一種功能的試劑盒，其包括檢測供-受者中基因對是否發生突變的物質；
7.根據權利要求6所述的試劑盒，其特征在于：所述異基因造血細胞移植包括HLA單倍型相合異基因造血細胞移植和HLA全相合異基因造血細胞移植。
8.根據權利要求6或7所述的試劑盒，其特征在于：所述檢測供-受者中基因
9.根據權利要求6-8任一所述的試劑盒，其特征在于：所述檢測供-受者外周血中基因對是否發生突變的物質為檢測供-受者外周血中基因對是否發生突變的試劑和/或儀器。
10.ADAMTS7、APOL4、AGAP3、ACR、ANAPC1、CARD8、SIRPB1、DCAF15、DENND3、FRMD5、MYCT1、HAPLN3、HRNR、MAGEE2、KRTAP10-1、OAS1、NUDT1、PABPC3、SIRPA、SLC35G6、TLR8、ZFPM1、ACTN2、OBSCN、CDH15、GPR161、GNRH2、KRT24、GPSM1、LCN10、CD33、MS4A12、ZNF211和/或RBMX作為靶點在制備預防和/或治療急性移植物抗宿主病的產品中的應用。
...【技術特征摘要】
1.檢測供-受者中基因對是否發生突變的物質在如下a1)-a4)任一種中的應用：
2.檢測供-受者中基因對是否發生突變的物質在如下b1)-b4)任一種中的應用：
3.根據權利要求1或2所述的應用，其特征在于：所述異基因造血細胞移植包括hla單倍型相合異基因造血細胞移植和hla全相合異基因造血細胞移植。
4.根據權利要求1-3任一所述的應用，其特征在于：所述檢測供-受者中基因對是否發生突變的物質為檢測供-受者外周血中基因對是否發生突變的物質。
5.根據權利要求1-4任一所述的應用，其特征在于：所述檢測供-受者外周血中基因對是否發生突變的物質為檢測供-受者外周血中基因對是否發生突變的試劑和/或儀器。
6.一種具有如下a1)-a4)任一種功能的試劑盒，其包括檢測供-受者中基因對是否發生突變的物質；
7.根據權利要求6所述的試劑盒，其特征在于：所述異基因造血細胞移植包括hla單倍型相合異基因造血細胞移...
【專利技術屬性】
技術研發人員：黃曉軍，高歌，劉江瑩，梁爽，亢雨箋，
申請(專利權)人：北京大學人民醫院，
類型：發明
國別省市：
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