【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及血影制劑，尤其涉及一種具肝靶向性的血影制劑及其制備方法和應用。
技術介紹
1、肝臟是控制免疫耐受的關鍵器官。抗原靶向到肝臟的抗原呈遞細胞，可以誘導對肝臟本身或肝臟外組織的自身抗原的免疫耐受反應。肝靶向遞藥已有一定的研究積累。肝靶向納米遞藥系統根據靶向機制可分為主動靶向(主要基于“受體-配體結合”和“抗原-抗體結合”原理，如半乳糖受體介導的脂質體)、被動靶向(主要基于顆粒尺寸效應，如plga納米粒)和物理化學靶向(主要基于磁場、超聲波等技術，如fe3o4磁性納米粒)。上述基于納米材料的肝靶向納米遞藥系統在取得一定的肝靶向遞送效果的同時，也存在著載藥量低、由化學修飾導致制備工藝復雜、長期使用安全性尚不明確等不足，至今仍處于概念研究階段。
2、近年來，為解決上述這些問題，研究人員將目光開始轉移到基于天然材料的仿生藥物遞送系統上來。細胞藥物是藥物研究領域的顛覆性技術。紅細胞占所有人類細胞數量的1/4，無細胞核和線粒體，非常適合作為藥物的載體。當前紅細胞制劑領域的研究集中在利用紅細胞壽命120天的生理規律而開發的紅細胞載藥長效制劑方面(國際上已有兩個品種進入iii期臨床)，而對于紅細胞靶向遞送藥物的研究尚屬于起步階段。
3、紅細胞正常數量的維持，是不斷生產與破壞達到動態平衡的結果。紅細胞在循環過程中逐漸衰老，而衰老的紅細胞最終歸宿就是在肝、脾內被特異性識別、截留、破壞直至分解。因此，基于衰老紅細胞被肝特異性清除的生理規律，可將衰老紅細胞作為藥物傳輸載體，對肝定向輸送藥物。
4、在一定生理病
5、正常紅細胞的細胞膜具有很強的流動性和柔軟性，可以通過形變等方式來抵御高剪切力的影響。與正常紅細胞相比，血影的細胞膜變薄、脆性增加，當遇到高剪切力作用時，血影的細胞膜會被迫暫時開放。微流控(microfluidic,mf)是一種能夠在微米級尺寸內精確控制和操作液體流動的新技術。基于微流控技術，微粒控儀可以通過微流控芯片以高速物理方式擠壓血影，使其暫時打開細胞膜，將藥物在血影的細胞膜重新閉合前擴散到血影內，從而完成載藥過程。與滲透壓調節載藥法相比，微粒控載藥法操作簡單、耗時少、效率高，更適合血影等衰老紅細胞的載藥。
6、在先前的研究中，申請人針對使用老化紅細胞膜作為載體，運載二巰丁二酸以治療肝臟鉻中毒的課題進行了深入探索("aging?erythrocyte?membranes?as?biomimeticnanometer?carriers?of?liver-targeting?chromium?poisoning?treatment.drugdelivery.2021,28(1):1455-1465.if6.8")。該研究成功證實了利用老化紅細胞作為肝臟脾臟靶向遞送平臺的潛力與可行性。然而，在設計實現過程中也暴露出了一些亟待解決的問題：首先，從血液中分離得到的自然老化紅細胞存在老化程度不一致、數量有限的問題，這難以滿足作為藥物輸送平臺的需求，因此亟需解決老化紅細胞的來源及其質量標準的統一問題。其次，與正常紅細胞相比，老化紅細胞在形態、比重及細胞膜等方面均發生了顯著變化，這導致原本適用于正常紅細胞的滲透壓梯度載藥方法不再適用于老化紅細胞，因此需要開發新的載藥技術以適應老化紅細胞的特性。現有技術的實現方案如圖1所示。
7、肝臟靶向藥物遞送是一個已經積累了相當研究基礎的領域。根據靶向機制的不同，肝臟靶向納米藥物遞送系統可以被劃分為主動靶向、被動靶向和物理化學靶向三大類。主動靶向系統主要依賴于“受體-配體結合”和“抗原-抗體結合”的原理，例如通過半乳糖受體介導的脂質體實現靶向；被動靶向則主要基于納米顆粒的尺寸效應，如聚乳酸-羥基乙酸共聚物(plga)納米粒；物理化學靶向則利用磁場、超聲波等技術，例如fe3o4磁性納米粒。
8、盡管這些基于納米材料的肝臟靶向納米藥物遞送系統在實現肝臟靶向遞送方面取得了一定的進展，但它們仍存在一些局限性，包括載藥量較低、化學修飾導致的復雜制備工藝，以及長期使用的安全性尚待進一步驗證。由于這些挑戰，目前這些系統大多仍處于概念研究階段，尚未廣泛應用于臨床實踐。未來的研究需要解決這些關鍵問題，以推動肝臟靶向納米藥物遞送系統的發展和應用。
9、目前，將藥物封裝在老化的紅細胞膜中以實現對肝臟的靶向治療通常依賴于過氧化氫等化學試劑來加速紅細胞的老化過程。然而，長期接觸過氧化氫可能增加個體罹患癌癥、心血管疾病以及神經退行性疾病的風險，并對免疫系統的功能造成不利影響。本專利技術提出了一種創新方法，摒棄了化學試劑的使用，有效降低了制劑可能對人體造成的傷害，為安全的藥物遞送提供了一種更為溫和的解決方案。
10、傳統的低滲法在紅細胞中進行藥物裝載，這種方法存在載藥量有限、靶向性不高的問題。而通過微流控技術對血影進行藥物裝載，不僅可以實現更優的紅細胞老化效果，還能顯著增強對肝臟的靶向性，并大幅提升載藥量。
技術實現思路
1、本專利技術的目的在于提供一種具肝靶向性的血影制劑及其制備方法和應用，針對治療罕見病-多發性硬化癥的現實需求，利用肝臟清除血影的生理規律，設計了一種將人工血影作為肝定向藥物輸送的通用平臺。
2、為了實現上述專利技術目的，本專利技術提供以下技術方案：
3、本專利技術提供了一種具肝靶向性的血影制劑的制備方法，包括如下步驟：
4、(1)將紅細胞懸液離心，得到紅細胞沉淀；
5、(2)將紅細胞沉淀和nacl溶液混合，靜置后離心，得到沉淀物；
6、(3)將沉淀物和高滲溶液混合，孵育后離心，得到血影沉淀，重懸后得到血影細胞懸液；
7、(4)將mog35-55和生理鹽水混合，得到mog35-55溶液；
8、(5)將血影細胞懸液和mog35-55溶液混合，得到血影制劑ghost-mog35-55。
9、作為優選，步驟(1)中所述的紅細胞懸液為小鼠紅細胞懸液，所述小鼠紅細胞懸液采用濃度為0.8～1％nacl溶液和小鼠紅細胞混合得到；
10、步驟(1)中所述離心的條件為1200～1400×g、2～6℃，所述離心的時間為4～6min。
11、作為優選，步驟(2)中所述紅細胞沉淀和nacl溶液的體積比為1：2～10，所述nacl溶液的濃度為0.10～0.50％；
12、作為優選，步驟(2)中所述靜置的時間為2～本文檔來自技高網...
【技術保護點】
1.一種具肝靶向性的血影制劑的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：
2.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟(1)中所述的紅細胞懸液為小鼠紅細胞懸液，所述小鼠紅細胞懸液采用濃度為0.8～1％NaCl溶液和小鼠紅細胞混合得到；
3.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于，步驟(2)中所述紅細胞沉淀和NaCl溶液的體積比為1：2～10，所述NaCl溶液的濃度為0.10～0.50％。
4.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于，步驟(2)中所述靜置的時間為2～8min，所述離心的條件為4000～8000×g、2～6℃，所述離心的時間為8～12min。
5.根據權利要求3所述的制備方法，其特征在于，步驟(3)中所述高滲溶液為8～10％的NaCl溶液，所述高滲溶液的用量為紅細胞沉淀體積的8～12倍，所述孵育的時間為10～60min，所述離心的條件為4000～8000×g、2～6℃，所述離心的時間為8～12min；
6.根據權利要求4所述的制備方法，其特征在于，步驟(4)中所述MOG35-55溶液中MOG35-55的濃
7.根據權利要求1～6任意一項所述的制備方法，其特征在于，步驟(5)中所述混合時將血影細胞懸液和MOG35-55溶液分別用泵進行輸送混合，所述輸送時的流速為0.2～0.8mL/min，所述血影細胞懸液和MOG35-55溶液的體積比為1：0.5～1.5。
8.權利要求1～7任意一項所述的制備方法制備得到的血影制劑。
9.權利要求8所述的血影制劑在制備肝臟靶向藥物遞送的載體中的應用。
...【技術特征摘要】
1.一種具肝靶向性的血影制劑的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：
2.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟(1)中所述的紅細胞懸液為小鼠紅細胞懸液，所述小鼠紅細胞懸液采用濃度為0.8～1％nacl溶液和小鼠紅細胞混合得到；
3.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于，步驟(2)中所述紅細胞沉淀和nacl溶液的體積比為1：2～10，所述nacl溶液的濃度為0.10～0.50％。
4.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于，步驟(2)中所述靜置的時間為2～8min，所述離心的條件為4000～8000×g、2～6℃，所述離心的時間為8～12min。
5.根據權利要求3所述的制備方法，其特征在于，步驟(3)中所述高滲溶液為8～10％的nacl溶液，所述高滲溶...
【專利技術屬性】
技術研發人員：高春生，楊陽，李逸，劉航兵，辛欣，張立瀛，王玉麗，龔偉，楊美燕，
申請(專利權)人：中國人民解放軍軍事科學院軍事醫學研究院，
類型：發明
國別省市：
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