【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及生物，尤其是涉及一種葡萄糖脫氫酶突變體ptrc99a-9及其制備方法、應用和血糖檢測試紙。
技術介紹
1、葡萄糖脫氫酶(glucose?dehydrogenase，gdh)是一種氧化還原酶，能催化葡萄糖發生脫氫氧化反應，生成葡萄糖酸內酯。在該反應過程中，葡萄糖失去電子，傳遞給gdh的輔酶或輔基，生成的還原型輔基或輔酶的含量與葡萄糖的濃度成正相關，據此可以用于血糖的檢測，且該檢測不受一般濃度的抗凝劑、防腐劑、尿酸、膽紅素等的干擾。相對于傳統的god法和hk法而言，gdh法操作更簡便，只需一種酶參與反應即可實現，并且既可以進行連續監測(λ＝340nm)，又可以進行終點分析，因此常用于血糖測定。
2、gdh根據所結合輔基或輔酶的不同，可以分為pqq依賴的gdh(pqq-gdh)、nad依賴的gdh(nad-gdh)和fad依賴的gdh(fad-gdh)三種。可溶表達的spqq-gdh底物專一性很差，底物譜太寬；膜結合型的mpqq-gdh系膜蛋白，表達和分離純化都很困難，這些都嚴重限制了其在血糖測定方面的應用。nad-gdh由于輔基結合不牢固，需要不斷添加輔基來維持其活性，也不利于血糖檢測。而fad-gdh輔基結合緊密不易脫落，其次反應過程中不需要氧氣的參與，因此不管是檢測的準確性還是保存的長久性都優于葡萄糖氧化酶和其他輔基依賴性gdh，并且市面主流的血糖儀的使用的核心酶也是fad-依賴的葡萄糖脫氫酶，一般自開封起可使用到有效期結束。
3、不同來源的野生型fad-gdh大都存在多種底物活性，對麥芽糖
4、有鑒于此，特提出本專利技術。
技術實現思路
1、本專利技術的第一目的在于提供一種葡萄糖脫氫酶(fad-gdh)突變體ptrc99a-9，該突變體穩定性好，底物特異性專一，以解決上述技術問題。
2、本專利技術的第二目的在于提供一種核苷酸。
3、本專利技術的第三目的在于提供一種載體。
4、本專利技術的第四目的在于提供一種細胞。
5、本專利技術的第五目的在于提供一種葡萄糖脫氫酶突變體ptrc99a-9的制備方法。
6、本專利技術的第六目的在于提供上述葡萄糖脫氫酶突變體ptrc99a-9在制備血糖檢測產品中的應用。
7、本專利技術的第七目的在于提供一種血糖檢測試紙。
8、為了實現上述目的，提出以下技術方案：
9、第一方面，本專利技術提供了一種葡萄糖脫氫酶突變體ptrc99a-9，所述葡萄糖脫氫酶突變體ptrc99a-9的氨基酸序列如seq?id?no.1所示。
10、第二方面，本專利技術提供了一種核苷酸，所述核苷酸包括編碼上述葡萄糖脫氫酶突變體ptrc99a-9的核苷酸序列。
11、作為進一步技術方案，所述核苷酸的序列如seq?id?no.2所示。
12、第三方面，本專利技術提供了一種載體，所述載體攜帶所述的核苷酸。
13、作為進一步技術方案，所述載體包括質粒。
14、第四方面，本專利技術提供了一種細胞，所述細胞攜帶所述的核苷酸，或者含有所述的載體，或者表達所述的葡萄糖脫氫酶突變體ptrc99a-9。
15、作為進一步技術方案，所述細胞包括大腸桿菌和畢赤酵母。
16、第五方面，本專利技術提供了一種葡萄糖脫氫酶突變體ptrc99a-9的制備方法，采用上述細胞發酵得到。
17、第六方面，本專利技術提供了上述葡萄糖脫氫酶突變體ptrc99a-9在制備血糖檢測產品中的應用。
18、第七方面，本專利技術提供了一種血糖檢測試紙，采用葡萄糖脫氫酶法檢測血糖；所述血糖檢測試紙的葡萄糖脫氫酶為所述的葡萄糖脫氫酶突變體ptrc99a-9。
19、與現有技術相比，本專利技術具有如下有益效果：
20、本專利技術提供的葡萄糖脫氫酶突變體ptrc99a-9，相較于野生型具有更好的穩定性，底物特異性更加專一，能夠用于制備血糖檢測產品。
本文檔來自技高網...【技術保護點】
1.一種葡萄糖脫氫酶突變體pTrc99A-9，其特征在于，所述葡萄糖脫氫酶突變體pTrc99A-9的氨基酸序列如SEQ?ID?NO.1所示。
2.一種核苷酸，其特征在于，所述核苷酸包括編碼權利要求1所述葡萄糖脫氫酶突變體pTrc99A-9的核苷酸序列。
3.根據權利要求2所述的核苷酸，其特征在于，所述核苷酸的序列如SEQ?ID?NO.2所示。
4.一種載體，其特征在于，所述載體攜帶權利要求2或3所述的核苷酸。
5.根據權利要求4所述的載體，其特征在于，所述載體包括質粒。
6.一種細胞，其特征在于，所述細胞攜帶權利要求2或3所述的核苷酸，或者含有權利要求4或5所述的載體，或者表達權利要求1所述的葡萄糖脫氫酶突變體pTrc99A-9。
7.根據權利要求6所述的細胞，其特征在于，所述細胞包括大腸桿菌和畢赤酵母。
8.權利要求1所述葡萄糖脫氫酶突變體pTrc99A-9的制備方法，其特征在于，采用權利要求6或7所述的細胞發酵得到。
9.權利要求1所述的葡萄糖脫氫酶突變體pTrc99A-9在制備血
10.一種血糖檢測試紙，其特征在于，采用葡萄糖脫氫酶法檢測血糖；所述血糖檢測試紙的葡萄糖脫氫酶為權利要求1所述的葡萄糖脫氫酶突變體pTrc99A-9。
...【技術特征摘要】
1.一種葡萄糖脫氫酶突變體ptrc99a-9，其特征在于，所述葡萄糖脫氫酶突變體ptrc99a-9的氨基酸序列如seq?id?no.1所示。
2.一種核苷酸，其特征在于，所述核苷酸包括編碼權利要求1所述葡萄糖脫氫酶突變體ptrc99a-9的核苷酸序列。
3.根據權利要求2所述的核苷酸，其特征在于，所述核苷酸的序列如seq?id?no.2所示。
4.一種載體，其特征在于，所述載體攜帶權利要求2或3所述的核苷酸。
5.根據權利要求4所述的載體，其特征在于，所述載體包括質粒。
6.一種細胞，其特征在于，所述細胞攜帶權利要求2或3所...
【專利技術屬性】
技術研發人員：王燕萍，劉洪利，
申請(專利權)人：杭州旭科生物技術有限公司，
類型：發明
國別省市：
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