【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)涉及一種黃孢原毛平革菌sx-7-2及其在秸稈降解中的應(yīng)用，屬于生物技術(shù)和固體廢棄物處理領(lǐng)域。
技術(shù)介紹
1、隨著農(nóng)業(yè)的發(fā)展，農(nóng)作物秸稈產(chǎn)量巨大。大量的秸稈如果處理不當(dāng)，不僅會造成資源浪費，還會對環(huán)境產(chǎn)生負(fù)面影響，例如在田間焚燒會導(dǎo)致空氣污染、土壤質(zhì)量下降等問題。目前，秸稈的處理方法包括直接還田、飼料化、能源化等，但這些方法在實施過程中都面臨一些局限。利用微生物降解秸稈具有環(huán)保、高效等優(yōu)勢，但現(xiàn)有用于秸稈降解的微生物菌株在降解效率、對不同類型秸稈的適應(yīng)性等方面仍有待提高，無法滿足秸稈資源化利用的需求。因此，尋找一種高效的秸稈降解微生物，具有重要意義。
技術(shù)實現(xiàn)思路
1、針對上述現(xiàn)有技術(shù)存在的問題，本專利技術(shù)提供了一種黃孢原毛平革菌sx-7-2及其在秸稈降解中的應(yīng)用。本專利技術(shù)黃孢原毛平革菌來源于安徽省六安市金寨縣白馬峰腐木，從中篩選可分解纖維素的菌株命名為sx-7-2，通過對該菌株的形態(tài)學(xué)觀察，其菌絲呈白色，有隔膜；通過發(fā)酵培養(yǎng)檢測產(chǎn)纖維素酶；利用分子生物學(xué)方法，對其18s序列進(jìn)行測序分析，與已知的黃孢原毛平革菌序列相似度高達(dá)99%，確定其為黃孢原毛平革菌的一個新菌株，并具有秸稈降解能力，可促進(jìn)農(nóng)作物秸稈的資源化利用。
2、本專利技術(shù)黃孢原毛平革菌sx-7-2，分類命名為黃孢原毛平革菌phanerodontiachrysosporium，送保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號為cgmcc?no.41406，保藏日期為2024年7月9日。p>
3、本專利技術(shù)黃孢原毛平革菌sx-7-2的篩選方法，包括如下步驟：
4、步驟1：初篩
5、稱取10?g來源于安徽省六安市金寨縣白馬峰腐木樣品，置于250?ml三角瓶中，加90?ml無菌水，混勻過夜。以梯度稀釋法處理樣品，使用無菌水將樣本溶液濃度依次依稀至10-1~10-7，涂布于篩選培養(yǎng)基（cmc培養(yǎng)基）平板中，于20~30℃下倒置培養(yǎng)，按照篩選平板中菌落的形狀、顏色、濕潤度、凹凸度、透明度和菌落數(shù)量及大小來對菌落進(jìn)行初步的鑒別，通過菌落大小和水解圈初步篩選纖維素降解能力強(qiáng)的菌株，并將待選菌株于篩選培養(yǎng)基平板劃線一次純化，重復(fù)劃線進(jìn)行二次純化后編號并于4℃冰箱暫存。
6、步驟2：復(fù)篩
7、將初篩獲得的菌株接種于10?ml?ypd培養(yǎng)基中，于20~30℃、100~200?rpm擴(kuò)大培養(yǎng)2~3天，將擴(kuò)大培養(yǎng)的種子液以1~5%的接種量接種于100?ml的發(fā)酵產(chǎn)酶培養(yǎng)基（ce培養(yǎng)基）中，20~30℃、100~200?rpm培養(yǎng)，測定纖維素酶活力。
8、步驟3：鑒定
9、形態(tài)學(xué)鑒定：挑取復(fù)篩后的單克隆菌株，接種于ypd液體培養(yǎng)基中，發(fā)酵1-3天后，在無菌載玻片上取少量菌體溶于1滴無菌水中，干燥后經(jīng)結(jié)晶紫初染、路哥氏碘液媒染、95%乙醇脫色、水洗、沙皇復(fù)染、水洗、干燥后，在40倍顯微鏡下觀察菌體形態(tài)。
10、分子生物學(xué)鑒定：以axyprep真菌基因組提取試劑盒提取菌株基因組，以its1和its4引物擴(kuò)增菌株18s基因，并將pcr產(chǎn)物送至上海生工生物工程有限公司進(jìn)行序列檢測，所測得的序列在ncbi上進(jìn)行blast比對。
11、本專利技術(shù)所用培養(yǎng)基：
12、篩選培養(yǎng)基（cmc培養(yǎng)基）：稱取2?g?(nh4)2so4，0.5?g?mgso4，1?g?k2hpo4·3h2o，0.5?g?nacl，5?g?cmc至燒杯中，加去離子水定容到1?l，調(diào)ph至7.0，在121℃滅菌20?min。
13、擴(kuò)大培養(yǎng)基（ypd）：10?g酵母膏（yeast?extract），20?g蛋白胨（peptone），20?g葡萄糖（dextrose?glucose），加去離子水定容到1?l，115℃滅菌30?min。
14、發(fā)酵產(chǎn)酶培養(yǎng)基（ce培養(yǎng)基）：3?g蛋白胨（peptone）；2?g(nh4)2so4；0.3?gcacl2·2h2o；0.3?gmgso4；4?g?kh2po4；1%?吐溫-80；40?g微晶纖維素；加去離子水定容到1?l，調(diào)節(jié)ph至5.5，在121℃滅菌20?min。
15、本專利技術(shù)黃孢原毛平革菌sx-7-2在秸稈降解中的應(yīng)用。
16、所述秸稈包括玉米、水稻、小麥、甘蔗、棉花等農(nóng)作物中的一種或幾種。
17、將所述黃孢原毛平革菌sx-7-2的菌株保藏管劃線于ypd平板，于20~30℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)1~3天，挑取單克隆接種至100~200?ml的ypd液體培養(yǎng)基中，于20~30℃、100~200?rpm擴(kuò)大培養(yǎng)2~3天，獲得sx-7-2菌株發(fā)酵液。
18、將上述sx-7-2菌株發(fā)酵液，以體積比1~5%的比例接種至50~200?ml的秸稈培養(yǎng)基中，以添加等量無菌水為對照組，每組設(shè)置3~5個平行，于20~30℃震蕩培養(yǎng)10~20天。
19、秸稈培養(yǎng)基：5g?nacl，5g蛋白胨（peptone），1g酵母膏（yeast?extract），5gcaco3，秸稈10g，加去離子水定容到1l，121℃滅菌20?min。
20、發(fā)酵結(jié)束后，用濾紙過濾培養(yǎng)液，將濾出的秸稈殘渣用濃度為1~10%的鹽酸反復(fù)沖洗確保清除菌體，將收集的秸稈殘渣置于80~105℃烘箱4~10小時，采用減重法計算失重率。
21、計算公式：?。
22、式中：r為發(fā)酵結(jié)束后秸稈殘渣干質(zhì)量，單位g；r0為初始秸稈干質(zhì)量，單位g。
23、相比于現(xiàn)有技術(shù)，本專利技術(shù)的有益效果體現(xiàn)在：
24、本專利技術(shù)的秸稈降解功能菌株是從安徽省六安市金寨縣白馬峰腐木中篩選，通過菌株形態(tài)和序列鑒定為黃孢原毛平革菌，并送保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號為cgmcc?no.41406，保藏日期為2024年7月9日。黃孢原毛平革菌sx-7-2具有較高的水稻秸稈降解率，發(fā)酵15天后對水稻秸稈降解率達(dá)到31.2%，高于對照組的5.7%。相比其它水稻秸稈降解報道，如專利cn?118978985a提到，以暹羅芽孢桿菌2-3c47、暹羅芽孢桿菌2-3c48、暹羅芽孢桿菌2-4a51和南海芽孢桿菌2-3c312四種菌株組成的菌劑作用于水稻秸稈降解，在處理秸稈降解40天時，水稻秸稈降解率達(dá)到40%左右。本專利技術(shù)的黃孢原毛平革菌sx-7-2在處理15天時對水稻秸稈降解率即達(dá)到31.2%，即單菌表現(xiàn)出具有不弱于部分微生物菌群制劑對水稻降解的效果和潛力。
本文檔來自技高網(wǎng)...【技術(shù)保護(hù)點】
1.一種黃孢原毛平革菌SX-7-2，其特征在于：
2.權(quán)利要求1所述黃孢原毛平革菌SX-7-2在秸稈降解中的應(yīng)用。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述黃孢原毛平革菌SX-7-2在秸稈降解中的應(yīng)用，其特征在于：
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述黃孢原毛平革菌SX-7-2在秸稈降解中的應(yīng)用，其特征在于：
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述黃孢原毛平革菌SX-7-2在秸稈降解中的應(yīng)用，其特征在于：
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述黃孢原毛平革菌SX-7-2在秸稈降解中的應(yīng)用，其特征在于：
7.根據(jù)權(quán)利要求5所述黃孢原毛平革菌SX-7-2在秸稈降解中的應(yīng)用，其特征在于：
【技術(shù)特征摘要】
1.一種黃孢原毛平革菌sx-7-2，其特征在于：
2.權(quán)利要求1所述黃孢原毛平革菌sx-7-2在秸稈降解中的應(yīng)用。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述黃孢原毛平革菌sx-7-2在秸稈降解中的應(yīng)用，其特征在于：
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述黃孢原毛平革菌sx-7-2在秸稈降解中的應(yīng)...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：劉祚軍，尹強(qiáng)，方勇，章雪蘋，焦鄭同，夏麗明，穆德梅，劉姣姣，
申請(專利權(quán))人：安徽省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)機(jī)械裝備與工程研究所，
類型：發(fā)明
國別省市：
還沒有人留言評論。發(fā)表了對其他瀏覽者有用的留言會獲得科技券。