【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)涉及生物檢測(cè)，特別是涉及一種血型快速檢測(cè)免疫層析試劑條及其制備方法。
技術(shù)介紹
1、對(duì)于血型的檢測(cè)，現(xiàn)有技術(shù)主要包括分子生物學(xué)技術(shù)、基于測(cè)序反應(yīng)的血型鑒定技術(shù)以及血清學(xué)方法。其中，分子生物學(xué)技術(shù)主要包括以下技術(shù)：（1）限制性酶切片段長(zhǎng)度多態(tài)性pcr技術(shù)，該技術(shù)對(duì)相關(guān)血型基因片段進(jìn)行檢測(cè)，由于限制性內(nèi)切酶僅針對(duì)特異性核酸酶切位點(diǎn)，所以對(duì)紅細(xì)胞血型鑒定具有高度特異性，缺點(diǎn)在于耗時(shí)較長(zhǎng)，至少需要6?h，且受酶切位點(diǎn)的限制，不適用于所有基因多態(tài)性檢測(cè)，同時(shí)內(nèi)切酶的使用也增加了檢測(cè)成本。（2）序列特異性引物pcr技術(shù)，該技術(shù)對(duì)紅細(xì)胞血型等位基因檢測(cè)不需要進(jìn)行內(nèi)切酶反應(yīng)，簡(jiǎn)化了操作程序，節(jié)約了檢測(cè)成本，檢測(cè)時(shí)間更多依賴于所擴(kuò)增紅細(xì)胞血型等位基因片段長(zhǎng)度，但在判斷純合子與雜合子方面不及限制性酶切片段長(zhǎng)度多態(tài)性pcr技術(shù)的特異度高。（3）多重pcr技術(shù)，多重pcr技術(shù)雖然具有檢測(cè)通量?jī)?yōu)勢(shì)，但同時(shí)也存在需要多對(duì)引物的退火、延伸及變性溫度要求保持較為一致而限制檢測(cè)通量，假陽(yáng)性率或假陰性率較高，多個(gè)pcr產(chǎn)物在進(jìn)行電泳分析時(shí)給結(jié)果判斷帶來(lái)困難，對(duì)分析儀器的靈敏度也要求更高，在探針引物設(shè)計(jì)時(shí)需要另加入不同長(zhǎng)度的非特異寡核苷酸片段以區(qū)別產(chǎn)物片段長(zhǎng)度，操作程序復(fù)雜、耗時(shí)較長(zhǎng)，因此多重pcr技術(shù)未能實(shí)現(xiàn)真正意義上的高通量檢測(cè)。（4）適時(shí)定量pcr技術(shù)，該技術(shù)較限制性酶切片段長(zhǎng)度多態(tài)性pcr技術(shù)及序列特異性引物pcr技術(shù)在紅細(xì)胞血型鑒定檢測(cè)時(shí)間方面具有明顯優(yōu)勢(shì)，程序更加簡(jiǎn)便，且能適時(shí)定量檢測(cè)，但在檢測(cè)通量方面不及多重pcr技術(shù)高。（5）pcr-酶聯(lián)免
2、基于測(cè)序反應(yīng)的血型鑒定技術(shù)主要包括sanger測(cè)序技術(shù)、大規(guī)模平行測(cè)序技術(shù)、焦磷酸測(cè)序技術(shù)、ion?torrent測(cè)序技術(shù)存在檢測(cè)速度不高、檢測(cè)通量方面不具有優(yōu)勢(shì)。
3、血清學(xué)方法主要包括以下技術(shù)：（1）玻片法，玻片法屬于直接血凝試驗(yàn)，是將血清與待檢血液樣品滴加在玻片上，通過(guò)觀察紅細(xì)胞凝集情況，對(duì)紅細(xì)胞血型進(jìn)行判定，該方法鑒定紅細(xì)胞血型的優(yōu)點(diǎn)在于操作簡(jiǎn)便、快速，但該方法靈敏度欠佳，可應(yīng)用于紅細(xì)胞血型初檢，最終紅細(xì)胞血型鑒定需要借助其他方法或進(jìn)行復(fù)檢。（2）試管法，試管法的血凝試驗(yàn)是在試管中進(jìn)行，操作上不及玻片法簡(jiǎn)便，需要對(duì)血液樣品進(jìn)行離心，對(duì)于不易識(shí)別的凝集血液樣品還需要進(jìn)行顯微觀察，試管法采用鹽水凝集鑒定紅細(xì)胞血型時(shí)，易存在非特異性干擾，導(dǎo)致正、反定型不符。（3）微柱凝膠法，微柱凝膠法通過(guò)觀察待檢血液樣品能否通過(guò)凝膠顆粒構(gòu)成的分子篩，判斷血液樣品凝集情況，進(jìn)而鑒定紅細(xì)胞血型，該方法樣品用量少、自動(dòng)化程度高且具有更高的靈敏度和特異度，但是在操作上，該方法結(jié)果容易判斷，易于保存，但檢測(cè)耗時(shí)相對(duì)較長(zhǎng)，不適宜應(yīng)用于急診對(duì)紅細(xì)胞血型的鑒定。
4、可見，現(xiàn)有技術(shù)中的分子生物學(xué)方法和基因測(cè)序方法檢測(cè)時(shí)間長(zhǎng)且成本高，在緊急需要輸血的情況下有局限性，血清學(xué)方法的玻片法靈敏度欠佳，試管法操作難度相對(duì)較大，微柱凝膠法檢測(cè)耗時(shí)相對(duì)較長(zhǎng)，不適宜應(yīng)用于急診對(duì)紅細(xì)胞血型的鑒定。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
1、基于此，有必要提供一種血型快速檢測(cè)免疫層析試劑條。本專利技術(shù)的血型快速檢測(cè)免疫層析試劑條能夠?qū)崿F(xiàn)血型的快速檢測(cè)，特異性強(qiáng)，操作步驟簡(jiǎn)單，所需樣本量極少，檢測(cè)速度快，檢測(cè)結(jié)果直觀。
2、本申請(qǐng)一實(shí)施例提供了一種血型快速檢測(cè)免疫層析試劑條。
3、一種血型快速檢測(cè)免疫層析試劑條，包括試紙條，所述試紙條包括底板、樣品墊、硝酸纖維素膜以及吸水紙，其中，所述樣品墊、所述硝酸纖維素膜以及所述吸水紙依次重疊設(shè)置在所述底板上，所述硝酸纖維素膜上設(shè)有間隔設(shè)置的第一檢測(cè)線、第二檢測(cè)線以及質(zhì)控線，所述第一檢測(cè)線包被有抗a型血抗體，所述第二檢測(cè)線包被有抗b型血抗體，所述質(zhì)控線包被有抗紅細(xì)胞抗體。
4、在其中一些實(shí)施例中，所述硝酸纖維素膜上的所述第一檢測(cè)線、所述第二檢測(cè)線以及所述質(zhì)控線依次順序分布，其中所述第一檢測(cè)線最靠近于所述樣品墊。
5、在其中一些實(shí)施例中，所述底板呈長(zhǎng)條形結(jié)構(gòu)，所述樣品墊、所述硝酸纖維素膜以及所述吸水紙均沿著所述底板的長(zhǎng)度方向延伸。
6、在其中一些實(shí)施例中，所述底板為p?vc板。
7、在其中一些實(shí)施例中，所述血型快速檢測(cè)免疫層析試劑條還包括殼體，所述殼體上設(shè)置有檢測(cè)窗口、加樣孔以及沖洗孔，所述試紙條裝配于所述殼體內(nèi)，所述硝酸纖維素膜上的所述第一檢測(cè)線、所述第二檢測(cè)線以及所述質(zhì)控線對(duì)應(yīng)位于所述檢測(cè)窗口位置，所述加樣孔對(duì)應(yīng)于硝酸纖維素膜，所述沖洗孔對(duì)應(yīng)于所述樣品墊。
8、在其中一些實(shí)施例中，所述沖洗孔的尺寸由位于所述殼體外表面的一側(cè)至位于所述殼體內(nèi)部的一側(cè)逐漸減小。
9、在其中一些實(shí)施例中，所述檢測(cè)窗口呈長(zhǎng)條形形狀，所述第一檢測(cè)線、所述第二檢測(cè)線以及所述質(zhì)控線均位于所述檢測(cè)窗口的中部位置。
10、本申請(qǐng)一實(shí)施例還提供了一種血型快速檢測(cè)免疫層析試劑條的制備方法。
11、一種血型快速檢測(cè)免疫層析試劑條的制備方法，包括如步驟：
12、制備第一檢測(cè)線工作液、第二檢測(cè)線工作液以及質(zhì)控線工作液；
13、利用第一檢測(cè)線工作液、第二檢測(cè)線工作液以及質(zhì)控線工作液分別在所述硝酸纖維素膜上劃設(shè)第一檢測(cè)線、第二檢測(cè)線和質(zhì)控線，將所述硝酸纖維素膜放置在50℃~60℃干燥箱中干燥24h~48h；
14、將樣品墊、硝酸纖維素膜以及吸水紙裝配連接于底板上，將裝配后的中間品切成預(yù)定寬度的試紙條。
15、在其中一些實(shí)施例中，所述制備方法包括下述條件中的至少一種：
16、（1）用含3~5％海藻糖、ph8的0.01m的tris緩沖液將抗a型血抗體稀釋到0.5mg/ml~1mg/ml，得到所述第一檢測(cè)線工作液；
17、（2）用含3~5％海藻糖、ph8的0.01m的tris緩沖液將抗b型血抗體稀釋到0.1mg/ml~0.2mg/ml，得到所述第二檢測(cè)線工作液；
18、（3）用含3~5％海藻糖、ph8的0.01m的tris緩沖液將抗紅細(xì)胞抗體稀釋到0.01mg/ml~0.05mg/ml，得到所述質(zhì)控線工作液。
19、在其中一些實(shí)施例中，所述制備方法包括下述條件中的至少一種：
20、（1）所述硝酸纖維素膜上劃設(shè)的所述第一檢測(cè)線的劃線量為0.2μl/cm~2μl/cm；
21、（2）所述硝酸纖維素膜上劃設(shè)的所述第二檢測(cè)線的劃線量為0.2μl/cm~2μl/cm；
22、（3）所述硝酸纖維素膜上劃設(shè)的所述質(zhì)控線的劃線量為0.2μl/cm~2μl/cm。
23、在其中一些實(shí)施例中，所述制備方法包括下述條件中的至少一種：
24、（1）干燥后的所述硝酸纖維素膜裁切成長(zhǎng)條狀，所述硝酸纖維素膜的長(zhǎng)度為30cm~40cm，所述硝酸纖維素膜的寬度為2.2cm~3cm；
25、（2）所述吸水紙的長(zhǎng)度為30cm~40cm，所述吸水紙的寬度為1本文檔來(lái)自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
1.一種血型快速檢測(cè)免疫層析試劑條，其特征在于，包括試紙條，所述試紙條包括底板、樣品墊、硝酸纖維素膜以及吸水紙，其中，所述樣品墊、所述硝酸纖維素膜以及所述吸水紙依次重疊設(shè)置在所述底板上，所述硝酸纖維素膜上設(shè)有間隔設(shè)置的第一檢測(cè)線、第二檢測(cè)線以及質(zhì)控線，所述第一檢測(cè)線包被有抗A型血抗體，所述第二檢測(cè)線包被有抗B型血抗體，所述質(zhì)控線包被有抗紅細(xì)胞抗體。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的血型快速檢測(cè)免疫層析試劑條，其特征在于，所述硝酸纖維素膜上的所述第一檢測(cè)線、所述第二檢測(cè)線以及所述質(zhì)控線依次順序分布，其中所述第一檢測(cè)線最靠近于所述樣品墊。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的血型快速檢測(cè)免疫層析試劑條，其特征在于，所述血型快速檢測(cè)免疫層析試劑條滿足下述條件中的至少一種：
4.根據(jù)權(quán)利要求1~3任意一項(xiàng)所述的血型快速檢測(cè)免疫層析試劑條，其特征在于，所述血型快速檢測(cè)免疫層析試劑條還包括殼體，所述殼體上設(shè)置有檢測(cè)窗口、加樣孔以及沖洗孔，所述試紙條裝配于所述殼體內(nèi)，所述硝酸纖維素膜上的所述第一檢測(cè)線、所述第二檢測(cè)線以及所述質(zhì)控線對(duì)應(yīng)位于所述檢測(cè)窗口位置，所述加樣孔對(duì)應(yīng)于硝酸纖
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的血型快速檢測(cè)免疫層析試劑條，其特征在于，所述沖洗孔的尺寸由位于所述殼體外表面的一側(cè)至位于所述殼體內(nèi)部的一側(cè)逐漸減小。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的血型快速檢測(cè)免疫層析試劑條，其特征在于，所述檢測(cè)窗口呈長(zhǎng)條形形狀，所述第一檢測(cè)線、所述第二檢測(cè)線以及所述質(zhì)控線均位于所述檢測(cè)窗口的中部位置。
7.一種權(quán)利要求1~6任意一項(xiàng)所述的血型快速檢測(cè)免疫層析試劑條的制備方法，其特征在于，包括如步驟：
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的血型快速檢測(cè)免疫層析試劑條的制備方法，其特征在于，所述制備方法包括下述條件中的至少一種：
9.根據(jù)權(quán)利要求7或8所述的血型快速檢測(cè)免疫層析試劑條的制備方法，其特征在于，所述制備方法包括下述條件中的至少一種：
10.根據(jù)權(quán)利要求7或8所述的血型快速檢測(cè)免疫層析試劑條的制備方法，其特征在于，所述制備方法包括下述條件中的至少一種：
...【技術(shù)特征摘要】
1.一種血型快速檢測(cè)免疫層析試劑條，其特征在于，包括試紙條，所述試紙條包括底板、樣品墊、硝酸纖維素膜以及吸水紙，其中，所述樣品墊、所述硝酸纖維素膜以及所述吸水紙依次重疊設(shè)置在所述底板上，所述硝酸纖維素膜上設(shè)有間隔設(shè)置的第一檢測(cè)線、第二檢測(cè)線以及質(zhì)控線，所述第一檢測(cè)線包被有抗a型血抗體，所述第二檢測(cè)線包被有抗b型血抗體，所述質(zhì)控線包被有抗紅細(xì)胞抗體。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的血型快速檢測(cè)免疫層析試劑條，其特征在于，所述硝酸纖維素膜上的所述第一檢測(cè)線、所述第二檢測(cè)線以及所述質(zhì)控線依次順序分布，其中所述第一檢測(cè)線最靠近于所述樣品墊。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的血型快速檢測(cè)免疫層析試劑條，其特征在于，所述血型快速檢測(cè)免疫層析試劑條滿足下述條件中的至少一種：
4.根據(jù)權(quán)利要求1~3任意一項(xiàng)所述的血型快速檢測(cè)免疫層析試劑條，其特征在于，所述血型快速檢測(cè)免疫層析試劑條還包括殼體，所述殼體上設(shè)置有檢測(cè)窗口、加樣孔以及沖洗孔，所述試紙條裝配于所述殼體內(nèi)，所述硝酸纖維素膜上的所述第一檢測(cè)線、所述第二檢測(cè)線...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：蘇桂純，岑贊詢，王偉，
申請(qǐng)(專利權(quán))人：海衛(wèi)特廣州醫(yī)療科技有限公司，
類型：發(fā)明
國(guó)別省市：
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