【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于生物醫藥，尤其是涉及一種干燥綜合征小鼠模型的建立方法。
技術介紹
1、原發性干燥綜合征(primary?sj?gren′s?syndrome，pss)是一種以侵犯外分泌腺（主要是唾液腺和淚腺）為主的慢性自身免疫性疾病，腺體的淋巴細胞浸潤和由此產生的自身免疫性上皮性炎損害了唾液腺和淚腺的分泌物，其主要臨床表現為口干以及眼干，此外，30%-40%的患者具有全身性表現，累及如腎臟、肺、關節和皮膚以及神經系統等器官的結構和功能，而且多種自身抗體如抗ro/ssa、抗la/ssb、抗α-fodrin（胞襯蛋白）抗體存在于患者的血清中并與疾病的發展顯著相關。pss主要影響中年婦女，但也可在兒童、男子和老年人中觀察到，該疾病的患病率差異很大，在總人口的0.01%到3%以上的范圍內不等，而且女性與男性的發病率比例為9：1，且女性患者絕經后風險增加。此外，原發性干燥綜合征是發生在沒有其他自身免疫性疾病的情況下，而繼發性干燥綜合征(secondary?sj?gren′ssyndrome，sss)則是在其他潛在的自身免疫性疾病的基礎上，如系統性紅斑狼瘡(sle)、類風濕性關節炎(ra)和系統性硬化病(ssc)，合并有干燥綜合征。pss的診斷是基于口腔和眼部干燥癥狀及其評估（如schirmer試驗）、唇部活檢顯示局灶性淋巴細胞浸潤以及血清中檢測自身抗體（如抗ro/ssa）等方面進行綜合判斷。
2、干燥綜合征的病因是多因素的，在遺傳、激素、環境和免疫危險因素之間存在復雜的相互作用。盡管當前對pss發病機制的認識有了一定的進展，包括
技術實現思路
1、為解決上述技術問題，本專利技術提供一種干燥綜合征小鼠模型的建立方法。
2、本專利技術采用的技術方案是：一種干燥綜合征小鼠模型的建立方法，取正常小鼠胸腺，提取胸腺蛋白后與titermax佐劑混勻得到胸腺蛋白-titermax乳化液，將胸腺蛋白-titermax乳化液注射到小鼠體內，構建得到干燥綜合征小鼠模型。
3、優選地，具體步驟如下：
4、步驟一：取正常小鼠胸腺，剪碎后充分勻漿，離心后取上清，用pbs將胸腺蛋白濃度調整至2mg／ml；
5、步驟二：將2mg／ml的胸腺蛋白與等量的titermax佐劑混合制備乳化液，得到1mg／ml胸腺蛋白-titermax乳化液；
6、步驟三：在第0天于小鼠的腳掌正中線偏腳腕處注射制備得到的1mg／ml胸腺蛋白—titermax乳劑，注射量為0.1ml／只，造模12周后通過檢測指標篩選造模成功的小鼠。
7、優選地，步驟一中，取正常c57bl/6小鼠脫頸處死，取小鼠胸腺置入預冷的pbs緩沖液中，剝離包膜及結締組織，將胸腺剪碎，在冰浴中充分勻漿，12000g／4℃的條件離心30s，3000g／4℃的條件離心15min，取上清液，采用bca蛋白定量法測量胸腺蛋白濃度，用pbs將胸腺蛋白濃度調整至2mg／ml。
8、優選地，步驟三中檢測指標包括飲水量檢測、唾液量檢測、淚液量檢測、角膜熒光素染色檢測、組織病理學檢測和血清免疫學檢測中的一種或多種的組合。
9、優選地，檢測步驟如下：
10、所述飲水量檢測：方法是先對裝滿水的飲水瓶進行稱重，一周后再次稱量飲水瓶剩余水的重量，二者之差即為小鼠一周飲水量；
11、唾液量檢測：方法是測量前小鼠禁食16個小時，使用動物麻醉機進行深度麻醉，以呼吸平穩，眼角膜反射消失，四肢肌群松弛為麻醉標準；完全麻醉后小鼠腹腔注射0.5mg／kg體重毛果蕓香堿溶液并將事先稱好的棉花小球塞入小鼠口中，20min后取出，用濕重法求出小鼠唾液量；
12、淚液量檢測：方法是測量前小鼠禁食16個小時，使用動物麻醉機進行深度麻醉，以呼吸平穩，眼角膜反射消失，四肢肌群松弛為麻醉標準；完全麻醉后小鼠腹腔注射0.5mg／kg體重毛果蕓香堿溶液，等待10min，將schirmer試紙放于小鼠外眥部，10min后取出，試紙變色部分長度即為淚液量；
13、角膜熒光素染色：第0天、第12周進行，方法是使用微量加液器在無表面麻醉的c57bl/6小鼠下方結膜囊內滴入生理鹽水進行沖洗，接著再使用微量加液器滴入1μl?1％熒光素鈉溶液，3min后在裂隙燈顯微鏡下采用鈷藍光檢查并照相記錄，造模第12周后小鼠角膜表面出現點狀或片狀著色；
14、組織病理學檢測，第13周進行，方法是分別從實驗組和對照組中取出2～3只小鼠，眼球取血后脫頸處死，取淚腺和唾液腺做病理檢查，淚腺和唾液腺的處理應先放入4%多聚甲醛溶液固定24h，然后經過水洗、脫水、包埋、切片和撈片等步驟，進行h＆e染色；實驗組淚腺和唾液腺存在明顯的淋巴細胞浸潤，而對照組無明顯浸潤；
15、血清免疫學檢測，第13周進行，方法是分別從實驗組和對照組小鼠中收集血清，使用酶聯免疫吸附測定法（elisa）檢測自身抗體，血清的制備為通過小鼠摘眼球取血，然后將已收集好的血液放置4°過夜后，釆用500g離心20min，分離血清，將上層血清轉移至新的離心管，放入-20℃備用；實驗組血清出現大量的自身抗體，而對照組未出現自身抗體；
16、優選地，小鼠為c57bl/6小鼠，優選為3-4周齡的雌性c57bl／6小鼠。
17、干燥綜合征小鼠模型的建立方法構建得到的小鼠模型在篩選用于治療和/或預防干燥綜合征藥物中的應用。
18、優選地，將待測試藥物施用于權利要求1-6中任一項所述的構建方法構建得到的小鼠模型中；分析待測試藥物的治療效果并進行評價，選擇能夠明顯改善小鼠模型干燥綜合征癥狀的測試藥物。
19、一種評價干燥綜合征小鼠模型的方法，建立小鼠模型后，對小鼠模型進行飲水量檢測、唾液量檢測、淚液量檢測、角膜熒光素染色檢測、組織病理學檢測和血清免疫學檢測；
20、其中，從造模第10-13周后進行組織病理學檢本文檔來自技高網...
【技術保護點】
1.一種干燥綜合征小鼠模型的建立方法，其特征在于：取正常小鼠胸腺，提取胸腺蛋白后與Titermax佐劑混勻得到胸腺蛋白-Titermax乳化液，將胸腺蛋白-Titermax乳化液注射到小鼠體內，構建得到干燥綜合征小鼠模型。
2.根據權利要求1所述的干燥綜合征小鼠模型的建立方法，其特征在于：具體步驟如下：
3.根據權利要求2所述的干燥綜合征小鼠模型的建立方法，其特征在于：步驟一中，取正常C57BL/6小鼠脫頸處死，取小鼠胸腺置入預冷的PBS緩沖液中，剝離包膜及結締組織，將胸腺剪碎，在冰浴中充分勻漿，12000g／4℃的條件離心30s，3000g／4℃的條件離心15min，取上清液，采用BCA蛋白定量法測量胸腺蛋白濃度，用PBS將胸腺蛋白濃度調整至2mg／ml。
4.根據權利要求2所述的干燥綜合征小鼠模型的建立方法，其特征在于：步驟三中檢測指標包括飲水量檢測、唾液量檢測、淚液量檢測、角膜熒光素染色檢測、組織病理學檢測和血清免疫學檢測中的一種或多種的組合。
5.根據權利要求4所述的干燥綜合征小鼠模型的建立方法，其特征在于：檢測步驟如下：<...
【技術特征摘要】
1.一種干燥綜合征小鼠模型的建立方法，其特征在于：取正常小鼠胸腺，提取胸腺蛋白后與titermax佐劑混勻得到胸腺蛋白-titermax乳化液，將胸腺蛋白-titermax乳化液注射到小鼠體內，構建得到干燥綜合征小鼠模型。
2.根據權利要求1所述的干燥綜合征小鼠模型的建立方法，其特征在于：具體步驟如下：
3.根據權利要求2所述的干燥綜合征小鼠模型的建立方法，其特征在于：步驟一中，取正常c57bl/6小鼠脫頸處死，取小鼠胸腺置入預冷的pbs緩沖液中，剝離包膜及結締組織，將胸腺剪碎，在冰浴中充分勻漿，12000g／4℃的條件離心30s，3000g／4℃的條件離心15min，取上清液，采用bca蛋白定量法測量胸腺蛋白濃度，用pbs將胸腺蛋白濃度調整至2mg／ml。
4.根據權利要求2所述的干燥綜合征小鼠模型的建立方法，其特征在于：步驟三中檢測指標包括飲水量檢測、唾液量檢測、淚液量檢測、角膜熒光素染色檢測、組織病理學檢測和血清免疫學檢測中的...
【專利技術屬性】
技術研發人員：張鵬，熊楷，張鵬，孟飛，張皓喆，
申請(專利權)人：天津醫科大學總醫院空港醫院，
類型：發明
國別省市：
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