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    一種降糖肽及其應用制造技術

    技術編號:44074625 閱讀:4 留言:0更新日期:2025-01-17 16:10
    本發明專利技術公開了一種降糖肽及其應用,屬于活性肽技術領域。所述降糖肽包含序列分別為DSVF(Asp?Ser?Val?Phe)和/或TLAE(Thr?Leu?Ala?Glu)的肽。經動物實驗證明本發明專利技術所述降糖肽可以輔助降血糖,并改善改善糖尿病認知功能障礙,因此所述降糖肽可用于制備降血糖和改善糖尿病認知功能障礙藥品的制備。

    【技術實現步驟摘要】

    本專利技術涉及一種降糖肽及其應用,屬于活性肽。


    技術介紹

    1、糖尿病是胰島素分泌不足或利用缺陷以高血糖為特征的代謝性疾病。流行病學數據顯示,截至2021全球糖尿病患病人數約5.37億,預計到2030年將上升到6.43億。糖尿病患者長期的高血糖狀態可導致如糖尿病腎病、糖尿病足、視網膜病變和認知功能障礙等多種并發癥的發生發展。認知功能障礙是指記憶、語言、視空間、執行、計算和理解判斷等方面一項或多項受損,其臨床表現包括記憶力減退、學習能力下降、語言、判斷和感知運動等能力受損,它是糖尿病患者中發病率較高的嚴重并發癥。糖尿病病程越長,認知功能越差,認知功能障礙會加劇病人自我管理能力降低,形成惡性循環,給社會、家庭和患者帶來沉重負擔。當前針對糖尿病認知功能障礙的治療方法主要使用控制血糖藥物、腦循環改善劑、腦代謝改善劑等藥物,臨床治療以控制血糖水平和減輕胰島素抵抗為主。其中,控制血糖的藥物主要有阿卡波糖、伏格列酮和二甲雙胍等,但是不可避免的會引起低血糖、體重增加、腹瀉或惡心等不良反應,嚴重時還會引發患者肝腎功能損傷,對患有基礎疾病的老年人長期用藥存在較高的安全隱患。因此需要開發安全、有效的輔助降血糖、改善糖尿病患者記憶功能的保健食品和干預糖尿病患者認知功能障礙的藥品。

    2、公開號cn118271398a的專利公開了一種豬膠原蛋白源降糖肽,以豬皮為原料,通過超聲輔助酸法提取膠原蛋白,再經胃蛋白酶酶解制得降糖肽,可以促進min6細胞分泌胰島素,提高胰島β細胞對葡萄糖的吸收發揮降糖作用。公開號cn111607628a的專利通過蛋白酶酶解、膜分離、活性炭脫色、脫腥和噴霧干燥技術分別制備海地瓜降糖混合肽及駝血降糖混合肽,將二者按1-1.5:1的比例配比制備出一種海地瓜和駝血降糖混合肽。海地瓜和駝血降糖混合肽對α-淀粉酶抑制ic50=0.5mg/ml,對α-葡萄糖苷酶抑制的ic50為51μg/ml,對dpp-iv抑制的ic50為43μg/ml,具有較好的體外降血糖活性。目前主要通過提取蛋白后外加蛋白酶水解原料,再經過系列分離純化獲得降糖活性混合肽,操作過程相對復雜,肽序列不明確,以體外活性評價為主,是否具備體內降糖活性不明確。公開號cn117778511a的專利公開了一種王漿蛋白降糖肽粉的制備方法及其應用,以新鮮王漿中的蛋白質為原料,堿性蛋白酶、胃蛋白酶和胰蛋白酶三次酶解、凍干獲得王漿混合肽粉,采用計算酶解肽段,結合糖苷酶肽庫和lbspeppredictor工具對關鍵功效肽段進行鑒定得到gsr、lw、iw、tw、if、pr和cl7個高活性肽段,其中pr顯示強的α-葡萄糖苷酶抑制活性(19.79μmol/l)。該專利技術制備步驟復雜,需經三次酶解再凍干獲得降糖活性混合肽,并且以體外降糖活性評價為主,是否有體內降糖活性尚不明確。當前報道的降糖肽主要以α-葡萄糖苷酶抑制活性的輔助降血糖為主,缺乏具有調控血糖,干預、改善糖尿病認知功能障礙的降糖肽。


    技術實現思路

    1、本專利技術的目的之一是提供了一種降糖肽,所述降糖肽包含氨基酸序列為asp-ser-val-phe(dsvf)和/或thr-leu-ala-glu(tlae)的肽。

    2、本專利技術所述降糖肽從火腿中提取得到。

    3、優選的,所述火腿為宣威火腿和文山火腿。

    4、優選的,一種降糖肽的制備方法,具體步驟如下所述:

    5、(1)稱取火腿,絞碎后加入磷酸鹽緩沖液,離心收集上清液,在上清中加入乙醇溶液,在4℃下靜置12h,離心,收集上清液,上清液用截留分子量為10kda的濾膜超濾,收集濾過液,得到火腿降糖粗肽。

    6、(2)用液相色譜質譜聯用技術(lc-ms/ms)對步驟(1)得到火腿降糖粗肽進行肽純化和肽氨基酸序列鑒定,得到氨基酸序列為asp-ser-val-phe(dsvf)和thr-leu-ala-glu(tlae)的兩個肽。

    7、優選的,步驟(1)中火腿與磷酸鹽緩沖液的質量體積比為:(1~3):(2~20),單位為g:ml,磷酸鹽緩沖液的ph為7.4。

    8、優選的,步驟(1)中離心條件為4℃下以12000rpm/min的轉速離心20min。

    9、優選的,步驟(1)中乙醇溶液與磷酸鹽緩沖液的體積比為(3~30):(1~10),乙醇溶液的質量濃度為40%。

    10、優選的,步驟(2)用q-exactive?lc-ms/ms進行純化、分析,用peaksstudio軟件鑒定降糖肽的氨基酸序列。用agilent?eclipse?plus?c18色譜柱(2.1mm×150mm,3.5μm)分離純化,流動相a相為水:甲酸=1000:1(v/v),b相為乙腈:甲酸=1000:1(v/v),0-5min以5%的b相洗脫,5-10min以5%-20%的b相洗脫,10-25min以20%-40%的b相洗脫,25-35min以40%-75%的b相洗脫,35-40min以5%的b相洗脫,流速為0.2ml/min,柱溫為30℃,進樣量為5μl,進樣濃度為0.1mg/ml,檢測波長為220nm,質譜分辨率為full?ms?35000,正離子模式下進行質譜檢測,質量范圍為100-2000m/z,碰撞能量為10ev,20ev,30ev。

    11、本專利技術的目的之三是提供一種所述降糖肽在制備改善糖尿病和糖尿病患者認知功能障礙藥物中的應用。

    12、本專利技術的有益效果

    13、(1)經動物實驗驗證,本專利技術所述全新的氨基酸序列的降糖肽可以降低血糖的同時能夠改善糖尿病患者的認知功能障礙。

    14、(2)本專利技術所述降糖肽可由火腿提取得到,原料來源簡單安全且通過常規方法制備得到。

    本文檔來自技高網...

    【技術保護點】

    1.一種降糖肽,其特征在于:所述降糖肽包含氨基酸序列為Asp-Ser-Val-Phe和/或Thr-Leu-Ala-Glu的肽。

    2.權利要求1所述降糖肽從火腿中提取得到。

    3.權利要求1所述降糖肽在制備改善糖尿病藥物中的應用。

    4.權利要求1所述降糖肽在制備改善糖尿病認知功能障礙藥物中的應用。

    【技術特征摘要】

    1.一種降糖肽,其特征在于:所述降糖肽包含氨基酸序列為asp-ser-val-phe和/或thr-leu-ala-glu的肽。

    2.權利要求1所述降糖肽從...

    【專利技術屬性】
    技術研發人員:李莉蓉周麗彤秦宇張貝貝黃銳李雯雯姚登杰張文文
    申請(專利權)人:昆明理工大學
    類型:發明
    國別省市:

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