【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及生物醫藥，具體涉及一種抗體偶聯物及其在smacab文庫構建、抗體或smacab篩選中的應用。
技術介紹
1、噬菌體展示技術是將外源蛋白或多肽的dna序列插入到噬菌體外殼蛋白結構基因的適當位置，使外源基因隨外殼蛋白的表達而表達，同時，外源蛋白隨噬菌體的重新組裝而展示到噬菌體表面的生物技術。
2、通過噬菌體展示技術可以篩選全人源抗體用于治療各種疾病，例如專利cn112851814a通過多輪淘選、elisa篩選出結合能力強且親和力高的bcma特異性抗體。
3、但是，對于結合能力不強的抗體，噬菌體展示技術很難將其篩選出來，因此，本申請將小分子化合物共價結合到抗體的特定位點上，以進一步增強抗體與靶抗原的結合能力，從而將功能性抗體篩選出來。
技術實現思路
1、本專利技術的第一方面，提供了一種抗體偶聯物(smacab)，所述的抗體偶聯物包括抗體或其抗原結合片段與小分子化合物通過位點特異性偶聯形成的共價偶聯物，其中，小分子化合物與抗體或其抗原結合片段共同參與和靶抗原的結合。
2、所述的小分子化合物可以結合靶抗原。
3、所述的抗體或其抗原結合片段與小分子化合物可以與同一種或同一類靶抗原結合。
4、所述抗體或其抗原結合片段可以偶聯一個或更多個(例如2、3、4、5、6、7、8、9、10個或以上)小分子化合物，其中，當結合兩個小分子化合物時，小分子化合物可以相同或不同，當結合三個或以上個小分子化合物時，小分子化合物可以全部相同，或者
5、所述的小分子化合物偶聯在抗體或其抗原結合片段的互補決定區(cdr)；優選的，所述的小分子化合物偶聯在抗體或其抗原結合片段的重鏈cdr或輕鏈cdr，例如重鏈cdr1、cdr2或cdr3或輕鏈cdr1、cdr2或cdr3。
6、優選的，所述的小分子化合物偶聯在抗體或其抗原結合片段的重鏈cdr3或輕鏈cdr3，進一步優選的，所述的小分子化合物偶聯在抗體或其抗原結合片段的輕鏈cdr3。
7、所述的cdr長度可以為3-20個aa，例如3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20個氨基酸。
8、所述的偶聯位置可以為cdr上的第1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20個氨基酸。
9、在本專利技術的一個具體實施方式中，所述的小分子化合物偶聯在抗體或其抗原結合片段的輕鏈cdr3。
10、所述的輕鏈cdr3長度為3-20個aa，例如3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20個氨基酸。
11、所述的小分子化合物偶聯在抗體或其抗原結合片段的輕鏈cdr3的任一氨基酸殘基上，優選第1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20位。
12、所述的輕鏈cdr3包括qq*yttppt(seq?id?no：5)、cqq*yttppt(seq?id?no：6)、ycqq*yttppt(seq?id?no：7)、yycqq*yttppt(seq?id?no：8)、tyycqq*yttppt(seq?id?no：9)、qq*yttpptf(seq?id?no：10)、qq*yttpptfg(seq?id?no：11)、qq*yttpptfgq(seq?id?no：12)、qq*yttpptfgqg(seq?id?no：13)、cqq*yttpptf(seq?id?no：14)、cqq*yttpptfg(seq?idno：15)、cqq*yttpptfgq(seq?id?no：16)、cqq*yttpptfgqg(seq?id?no：17)、ycqq*yttpptf(seq?id?no：18)、ycqq*yttpptfg(seq?id?no：19)、ycqq*yttpptfgq(seq?id?no：20)、ycqq*yttpptfgqg(seq?id?no：21)、yycqq*yttpptf(seq?id?no：22)、yycqq*yttpptfg(seq?idno：23)、yycqq*yttpptfgq(seq?id?no：24)、yycqq*yttpptfgqg(seq?id?no：25)、tyycqq*yttpptf(seq?id?no：26)、tyycqq*yttpptfg(seq?id?no：27)、tyycqq*yttpptfgq(seq?idno：28)或tyycqq*yttpptfgqg(seq?id?no：29)，或與seq?id?no：5-29中任一所示序列具有70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或99.9％的同一性，其中，*為天然氨基酸或非天然氨基酸，且為小分子化合物偶聯在抗體或其抗原結合片段的位點。
13、所述的偶聯位置可以突變或者不突變。
14、所述的抗體或其抗原結合片段與小分子化合物通過生物正交反應偶聯。優選的，所述的生物正交反應包括邁克爾加成反應或huisgen反應。
15、優選的，所述的邁克爾加成反應包括：在抗體或其抗原結合片段的位點上引入半胱氨酸cys，在小分子化合物上修飾馬來酰亞胺端基，進行邁克爾加成反應。例如將偶聯位置的氨基酸殘基突變為半胱氨酸cys，然后在小分子化合物上修飾馬來酰亞胺端基，進行邁克爾加成反應。當然也可以包括cdr區本身包含半胱氨酸，則直接與修飾馬來酰亞胺端基的小分子化合物，進行邁克爾加成反應。
16、優選的，所述的huisgen反應包括：在抗體或其抗原結合片段的位點上引入uaa-n3(通過非天然氨基酸引入疊氮基團)，在小分子化合物上修飾環辛炔端基或其衍生物，進行huisgen反應；所述的環辛炔端基或其衍生物選自difo、bcn、dibac、dibo、adibo或dbco中的任一種。
17、所述的小分子化合物與抗體或其抗原結合片段之間還包括linker基團。優選的，所述的linker基團可以為連接肽、peg基團、
18、
19、
20、
21、優選的，所述的連接肽可以包括lltppppplfpppff(seq?id?no：240，j?molbiol.2013；425:2100–32)、(eaaak)n(n＝2–5，其中，n＝2、3、4、5分別為seq?id?no：241、242、243、244，proteins.2004；57:829–38)、e4k4(seq?id?no：245，j?biol?chem.2014；289:25460–7)、(e4r4)2(seq?id?no：246，j?biol?chem.2014；289:25460–7)、(e4k4)2(seq?id?no：148，j?biol?chem.20本文檔來自技高網...
【技術保護點】
1.一種抗體偶聯物，其特征在于，所述的抗體偶聯物包括抗體或其抗原結合片段與小分子化合物通過位點特異性偶聯形成的共價偶聯物，其中，小分子化合物與抗體或其抗原結合片段共同參與和靶抗原的結合。
2.一種CD73抗體或其抗原結合片段，其特征在于，所述的CD73抗體或其抗原結合片段包含重鏈可變區和/或輕鏈可變區，所述的輕鏈可變區包含VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3，所述的重鏈可變區包含VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3；
3.一種Nav1.2抗體或其抗原結合片段，其特征在于，所述的Nav1.2抗體或其抗原結合片段包含重鏈可變區和/或輕鏈可變區，所述的輕鏈可變區包含VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3，所述的重鏈可變區包含VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3；
4.一種Nav1.6抗體或其抗原結合片段，其特征在于，所述的Nav1.6抗體或其抗原結合片段包含重鏈可變區和/或輕鏈可變區，所述的輕鏈可變區包含VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3，所述的重鏈可變區包含VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3；
5.一種Nav1
6.一種核酸分子，其特征在于，所述的核酸分子編碼權利要求2所述的CD73抗體或其抗原結合片段、權利要求3所述的Nav1.2抗體或其抗原結合片段、權利要求4所述的Nav1.6抗體或其抗原結合片段或權利要求5所述的Nav1.7抗體或其抗原結合片段。
7.小分子化合物的應用，其特征在于，所述的應用包括：
8.一種smacAb文庫，其特征在于，所述的smacAb文庫包括將小分子化合物與抗體或其抗原結合片段文庫中的抗體或其抗原結合片段通過位點特異性偶聯形成共價偶聯物。
9.一種權利要求8所述的smacAb文庫在抗體或smacAb篩選中的應用。
10.一種權利要求1所述的抗體偶聯物、權利要求2-5任一所述的抗體或其抗原結合片段、權利要求6所述的核酸分子或權利要求8所述的smacAb文庫在制備診斷和/或治療疾病的產品中的應用。
...【技術特征摘要】
1.一種抗體偶聯物，其特征在于，所述的抗體偶聯物包括抗體或其抗原結合片段與小分子化合物通過位點特異性偶聯形成的共價偶聯物，其中，小分子化合物與抗體或其抗原結合片段共同參與和靶抗原的結合。
2.一種cd73抗體或其抗原結合片段，其特征在于，所述的cd73抗體或其抗原結合片段包含重鏈可變區和/或輕鏈可變區，所述的輕鏈可變區包含vlcdr1、vlcdr2和vlcdr3，所述的重鏈可變區包含vhcdr1、vhcdr2和vhcdr3；
3.一種nav1.2抗體或其抗原結合片段，其特征在于，所述的nav1.2抗體或其抗原結合片段包含重鏈可變區和/或輕鏈可變區，所述的輕鏈可變區包含vlcdr1、vlcdr2和vlcdr3，所述的重鏈可變區包含vhcdr1、vhcdr2和vhcdr3；
4.一種nav1.6抗體或其抗原結合片段，其特征在于，所述的nav1.6抗體或其抗原結合片段包含重鏈可變區和/或輕鏈可變區，所述的輕鏈可變區包含vlcdr1、vlcdr2和vlcdr3，所述的重鏈可變區包含vhcdr1、vhcdr2和vhcdr3；
5.一種nav1.7抗體或其...
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