【技術實現步驟摘要】
本專利技術之動物源性樣品中多種獸藥殘留檢測的前處理方法屬于藥品殘留量測定。
技術介紹
1、動物源性樣品可以來自不同種類的動物，包括魚類、海鮮、蟲類、哺乳動物和鳥類等。動物源性樣品中的藥品代謝物是指藥物在動物體內經過代謝產生的副產品。?這些代謝物是藥物在動物體內經過化學變化后形成的，包括藥物的分解產物或藥物被“代謝”成為的其他物質。大多數藥物在進入動物體內后，都會經過身體各系統的化學改變，以產生更容易從體內排出的化合物，這些化合物即為藥品代謝物。
2、多種獸藥殘留的檢測對于評估動物源性食品的安全性至關重要，一般包括硝基呋喃類藥品代謝物和酰胺醇類藥物，其中硝基呋喃類藥物代謝物包括呋喃唑酮代謝物（aoz）、呋喃它酮代謝物（amoz）、呋喃西林代謝物(sem)、呋喃妥因代謝物(ahd)；酰胺醇類藥物包括氯霉素（cpa）、甲砜霉素和氟苯尼考。這些藥物常用于水產養殖中以促進生長和防治疾病。通過檢測動物源性樣品中的硝基硝基呋喃類藥品代謝物、酰胺醇類藥物等的殘留，可以了解這些藥物在動物體內的代謝情況，進而評估其對人類健康的潛在風險。另外通過前處理方法處理過的樣品采用超高效液相色譜串聯質譜法（uplc-ms/ms）等進行檢測，可以在動物源性樣品中分別測定出多種硝基呋喃類藥品代謝物和酰胺醇類藥物。
3、在現行的國家標準文件中，均采用高效液相色譜-串聯質譜法對動物源食品中的硝基呋喃類藥品代謝物和酰胺醇類藥物進行檢測，在檢測前均需從動物源食品中取樣，獲得的樣品需要經過前處理，獲得合格的待檢測物在進行檢測。在現行的國家標準文件中，
4、現有中國專利cn107677524a（申請日：2017.09.09）公開了一種含有硝基呋喃代謝物的動物源性樣品測定的前處理方法，其在前處理過程中加入衍生化試劑與內標溶液，隨后加入乙酸乙酯或者乙腈對待提取樣品進行萃取，再通過旋干、過濾，得到液體待檢測物。采用本方法對動物源性樣品進行前處理得到的液體待檢測物，僅能檢測出動物源性樣品中硝基呋喃代謝物，而對于動物源性樣品中的其它種類的代謝物使用上述前處理方法處理完成后均無法檢測出，因此本方法的前處理過程具有局限性，且前處理的效率較低，不能滿足通過前處理動物源性樣品將硝基呋喃類藥物代謝物和酰胺醇類藥物同時測出的要求。因此，針對上述問題，現亟需提出一種動物源性樣品的前處理方法。
技術實現思路
1、針對現有技術的不足，為了避免使用現行的國家標準文件對動物源性樣品做前處理的成本高、衍生化時間長及產生的有機廢液較多，同時針對多種獸藥殘留不能利用同一前處理過的動物源性樣品檢出等問題，現提出動物源性樣品中多種獸藥殘留檢測的前處理方法。
2、為實現上述目的，本專利技術提供如下技術方案：
3、動物源性樣品中多種獸藥殘留檢測的前處理方法，其特征在于，包括如下步驟：
4、s1、稱取2.0g~5.0g混合均勻的待檢測的動物源性樣品，置于50ml離心管中；
5、s2、在裝有混合均勻的待檢測的動物源性樣品的離心管中加入內標混合液，利用渦旋混合器以2500r/min的轉速將待檢測的動物源性樣品與內標混合液充分混合均勻并靜置10min；
6、s3、向上述溶液中依次加入濃度為0.05?mol/l的鄰硝基苯甲醛溶液和濃度為0.2mol/l的鹽酸溶液，利用渦旋混合器混合均勻后置于恒溫避光水浴內震蕩，取出離心管冷卻至室溫后，加入濃度為0.1?mol/l的磷酸氫二鉀溶液4.0ml~6.0ml和濃度為1?mol/l的氫氧化鈉溶液0.5ml~0.8ml，將離心管內溶液的ph值調節至7.0~7.5，然后渦旋混合均勻；
7、s4、在上述溶液中加入10.0ml乙酸乙酯，利用渦旋混合器混合均勻，在利用高速離心機以8000r/min的轉速離心5min，吸取上清液，置于氮吹管中，利用氮吹儀在35℃的水溫下氮氣吹干，獲得提取物；隨后在提取物中加入3.0ml~5.0ml水飽和正己烷和復溶液0.5ml，利用渦旋混合器混合均勻，使提取物充分溶解，再將提取物混合溶液過0.22μm的水系濾膜，獲得待測物；
8、s5、將獲得的待測物利用液相色譜-三重四級桿質譜聯用儀進行測試，利用內標法檢測動物源性樣品中藥品代謝物的含量，并計算檢測結果。
9、進一步的，在步驟s2中，所述的內標混合液包括aoz-d4、amoz-d5、ahd-13c3、sem.hcl-13c,15n2和氯霉素-d5。
10、進一步的，在步驟s2中，加入的內標混合液的質量為1.0~5.0μg/kg。
11、進一步的，在步驟s3中，加入所述的鄰硝基苯甲醛溶液的體積為0.2ml~0.4ml，加入所述的鹽酸溶液的體積為3.0ml~6.0ml。
12、進一步的，在步驟s3中，所述的恒溫避光振蕩器的溫度為60℃~70℃。
13、更優選的，在步驟s3中，所述的恒溫避光振蕩器的溫度為70℃。
14、進一步的，在步驟s3中，所述的混合均勻的溶液在恒溫避光振蕩器中的震蕩時間為2h~4h。
15、更優選的，在步驟s3中，所述的混合均勻的溶液在恒溫避光振蕩器中的震蕩時間為3h。
16、進一步的，在步驟s4中，所述的復溶液為去離子水。
17、本專利技術的有益效果：本專利技術中，在混合均勻的待檢測的動物源性樣品中加入內標混合溶液，充分混合后，加入鄰硝基苯甲醛溶液，由于硝基呋喃類藥品代謝物分子量小、?結構簡單、?離子化效率低，導致它們在檢測過程中檢測靈敏度很低，?通過加入鄰硝基苯甲醛，將待檢測的動物源性樣品在60-70℃恒溫避光水域震蕩2-4h進行衍生化，?可以增加代謝物的分子量，?有利于其離子化，更有利于將硝基呋喃類藥品代謝物的檢測，同時提高檢測的靈敏度；通過本專利技術對動物源性樣品進行前處理獲得的待測物，能夠利用液相色譜-三重四級桿質譜聯用儀使用不同的流動相可分別檢測出硝基呋喃類藥品代謝物和酰胺醇類藥物，滿足了通過一次前處理過程就能夠將硝基呋喃類藥品代謝物和酰胺醇類藥物同時都檢出的需求，避免了在檢測過程中對動物源性樣品的多次稱量、衍生化及提取的過程，從而減少有機試劑的損耗，即安全環保，又節約時間成本，更好的滿足動物源性樣品的大批量檢測的需求，提高檢測效率；在溶液中加入鹽酸、磷酸氫二鉀和氫氧化鈉，使溶液的ph保持在合理的范圍內，同時將混合溶液置于60℃~70℃的恒溫避光振蕩器中衍生2h~4h，確保衍生化反應的高效進行，同時也極大的縮短了現有技術中的衍生時間，能夠提高檢測的靈敏度和準確性，從而提高了檢測效率；對獲得的提取物中加入水飽和正己烷和復溶液，一方面能夠去除動本文檔來自技高網...
【技術保護點】
1.動物源性樣品中多種獸藥殘留檢測的前處理方法，其特征在于，包括如下步驟：
2.根據權利要求1所述的動物源性樣品中多種獸藥殘留檢測的前處理方法，其特征在于，在步驟S2中，所述的內標混合液中包括AOZ-D4、AMOZ-D5、AHD-13C3、SEM.HCL-13C,15N2和氯霉素-D5。
3.根據權利要求1所述的動物源性樣品中多種獸藥殘留檢測的前處理方法，其特征在于，在步驟S2中，加入的內標混合液的質量為1.0~5.0μg/kg。
4.根據權利要求1所述的動物源性樣品中多種獸藥殘留檢測的前處理方法，其特征在于，在步驟S3中，加入所述的鄰硝基苯甲醛溶液的體積為0.2mL~0.4mL；加入所述的鹽酸溶液的體積為3.0mL~6.0mL。
5.根據權利要求1所述的動物源性樣品中多種獸藥殘留檢測的前處理方法，其特征在于，在步驟S3中，所述的恒溫避光振蕩器的溫度為60℃~70℃。
6.根據權利要求1所述的動物源性樣品中多種獸藥殘留檢測的前處理方法，其特征在于，在步驟S3中，所述的恒溫避光振蕩器的溫度為70℃。
7.根據權
8.根據權利要求1所述的動物源性樣品中多種獸藥殘留檢測的前處理方法，其特征在于，在步驟S3中，所述的混合均勻的溶液在恒溫避光振蕩器中的震蕩時間為3h。
9.根據權利要求1所述的動物源性樣品中多種獸藥殘留檢測的前處理方法，其特征在于，在步驟S4中，所述的復溶液為去離子水。
...【技術特征摘要】
1.動物源性樣品中多種獸藥殘留檢測的前處理方法，其特征在于，包括如下步驟：
2.根據權利要求1所述的動物源性樣品中多種獸藥殘留檢測的前處理方法，其特征在于，在步驟s2中，所述的內標混合液中包括aoz-d4、amoz-d5、ahd-13c3、sem.hcl-13c,15n2和氯霉素-d5。
3.根據權利要求1所述的動物源性樣品中多種獸藥殘留檢測的前處理方法，其特征在于，在步驟s2中，加入的內標混合液的質量為1.0~5.0μg/kg。
4.根據權利要求1所述的動物源性樣品中多種獸藥殘留檢測的前處理方法，其特征在于，在步驟s3中，加入所述的鄰硝基苯甲醛溶液的體積為0.2ml~0.4ml；加入所述的鹽酸溶液的體積為3.0ml~6.0ml。
5.根據權利要求1所述的動物源...
【專利技術屬性】
技術研發人員：樊紅軍，張睿泓，李海霞，李紹剛，張炳玨，王成艷，呂焱，
申請(專利權)人：長春市產品質量監督檢驗院國家汽車零部件產品質量監督檢驗中心，
類型：發明
國別省市：
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