【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于蛋白質提取方法，尤其涉及一種高效的植物dna結合蛋白提取方法。
技術介紹
1、dna結合蛋白包括組蛋白修飾因子、染色質重塑因子和非組蛋白等。dna結合蛋白在調節基因表達、表觀遺傳學調控、維護染色質結構和保持基因組完整性方面起關鍵作用，也為dna包裝提供支架，并構成表觀遺傳調控與基因組保持的基礎。例如，組蛋白修飾因子在組蛋白的翻譯后修飾(ptm)中發揮重要作用，對表觀遺傳修飾至關重要。近期研究表明，gcn5等組蛋白乙酰轉移酶參與調控植物的應激反應基因，從而增強植物對環境脅迫的適應性。染色質重塑復合體，例如swi/snf復合體，利用atp水解重新定位或重組核小體，從而提高dna轉錄的可及性。在擬南芥中，swi/snf復合體參與開花時間的調節和對環境刺激的反應。非組蛋白dna結合蛋白，如轉錄因子和結構蛋白，在染色質動力學中也發揮重要作用。例如，myb轉錄因子家族已被證明能與染色質相互作用，并在紫外線下調節類黃酮生物合成相關基因的表達。在植物中，這些蛋白質參與多種生物過程，包括發育、應激反應和表觀遺傳調控。dna結合蛋白在植物的各種發育過程中至關重要。例如，polycomb組(pcg)蛋白參與抑制特定發育基因的表達。最近的研究顯示，pcg復合體通過表觀遺傳沉默調節基因表達模式，從而影響擬南芥莖和根的發育。除了發育作用外，dna結合蛋白還介導植物對生物和非生物脅迫的反應。組蛋白變體h2a.z與促使干旱條件下應激反應基因的表達相關，表明其在植物抗逆性中起到關鍵作用。
2、鑒定dna結合蛋白的完整清單將有助于深化對基
3、因此，分離dna結合蛋白在生命科學研究中非常重要，然而目前分離dna結合蛋白的方法并不理想。經典的方法都是先分離細胞核，再提取dna結合蛋白。然而，經典方法不僅提取過程復雜，還有很高的背景，尤其是細胞質蛋白的含量很高，一般獲得的蛋白中核蛋白僅占25％左右，此外，在液氮研磨過程中，大量的細胞核會被研磨破碎，導致細胞核的產量降低，從而降低了核蛋白的得率。而最重要的問題是經典的方法是提取核蛋白，并非直接提取dna結合蛋白，而核蛋白中有大量的非dna結合蛋白，給后續分析帶來影響，因此亟需建立能夠直接提取dna結合蛋白的方法。
技術實現思路
1、為解決現有方法只能提取核蛋白，無法直接提取dna結合蛋白的問題，本專利技術提供了一種高效的植物dna結合蛋白提取方法。
2、本專利技術的技術方案：
3、一種高效的植物dna結合蛋白提取方法，包括如下步驟：
4、步驟一、將植物材料用液氮研磨成粉末；
5、步驟二、將步驟一所得植物粉末加入到溶液1中旋渦震蕩處理，將充分震蕩后的混合體系過濾收集濾液，將所得濾液離心收集沉淀；
6、步驟三、將步驟二所得沉淀用nacl溶液重新懸浮后旋渦震蕩并進行超聲處理；
7、步驟四、向步驟三超聲處理后的體系中加入超純水，將nacl濃度稀釋到0.14mol/l，離心收集沉淀，得到dna-蛋白復合物；
8、步驟五、從步驟四得到的dna-蛋白復合物中提取純化蛋白，即得到植物dna結合蛋白。
9、進一步的，步驟一還包括將植物材料浸泡到甲醛溶液中進行dna與蛋白質交聯的步驟，然后將所得dna蛋白交聯材料用液氮研磨成粉末。
10、進一步的，步驟二所述溶液1為含有0.4m?sucrose、1.5mm?mgcl2和1mm?dtt的ph為8.0的10mm?tris-hcl緩沖溶液。
11、進一步的，步驟二中所述植物粉末與溶液1的質量體積比為1g:10ml，所述旋渦震蕩時間為10～20min。
12、進一步的，步驟二所述過濾采用2層300目的尼龍布過濾或2-4層miracloth濾布過濾。
13、進一步的，步驟二所述離心的具體條件為4℃，1000～1200rpm離心10～20min。
14、進一步的，步驟三所述nacl溶液的濃度為1mol/l。
15、進一步的，步驟三所述超聲處理在冰浴條件下進行，超聲輸出功率為100～200w，工作時間3s，間隔時間12s，操作總時長20～30min。
16、進一步的，步驟四所述離心的具體條件為4℃，10000～25000rpm離心5～30min。
17、進一步的，步驟五需要獲得有活性的植物dna結合蛋白時，用微球菌核酸酶處理所述dna-蛋白復合物并提取純化植物dna結合蛋白；不需要獲得有活性的植物dna結合蛋白時，采用常規提取蛋白的方法從所述dna-蛋白復合物中提取純化植物dna結合蛋白。
18、進一步的，用微球菌核酸酶處理所述dna-蛋白復合物時，微球菌核酸酶的用量為2μl，微球菌核酸酶的活性為2000gel?units/μl。
19、本專利技術的有益效果：
20、本專利技術提供了一種高效的植物dna結合蛋白提取方法，利用dna結合蛋白在不同濃度nacl溶液中溶解度不同分離dna結合蛋白和其他污染物，能夠直接提取dna結合蛋白。本專利技術所得dna結合蛋白純度較經典方法顯著提高，組蛋白含量高，細胞質蛋白和葉綠體的污染明顯減少，dna結合蛋白的得率較經典方法提高了2～3倍。
21、本專利技術提供的dna結合蛋白提取方法無需分離細胞核，因此減少了操作步驟，使得提取dna結合蛋白實驗更簡單省時而且高效。本專利技術提取到的dna結合蛋白能夠在蛋白酶k作用下解交聯釋放出dna，便于后續實驗的操作。
22、本專利技術能夠用于正常的dna結合蛋白提取，也適用于dna和蛋白交聯材料的提取，可用于研究蛋白和dna互作，還能夠用于分離直接或間接與染色質結合的蛋白質，而無需其他核蛋白，從而為轉錄調控、表觀遺傳學和染色質結構的研究提供了更多的便利。
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1.一種高效的植物DNA結合蛋白提取方法，其特征在于，包括如下步驟：
2.根據權利要求1所述一種高效的植物DNA結合蛋白提取方法，其特征在于，步驟一還包括將植物材料浸泡到甲醛溶液中進行DNA與蛋白質交聯的步驟，然后將所得DNA蛋白交聯材料用液氮研磨成粉末。
3.根據權利要求1或2所述一種高效的植物DNA結合蛋白提取方法，其特征在于，步驟二所述溶液1為含有0.4M?sucrose、1.5mM?MgCl2和1mM?DTT的pH為8.0的10mM?Tris-HCl緩沖溶液。
4.根據權利要求3所述一種高效的植物DNA結合蛋白提取方法，其特征在于，步驟二中所述植物粉末與溶液1的質量體積比為1g:10mL，所述旋渦震蕩時間為10～20min。
5.根據權利要求4所述一種高效的植物DNA結合蛋白提取方法，其特征在于，步驟二所述過濾采用2層300目的尼龍布過濾或2-4層Miracloth濾布過濾。
6.根據權利要求5所述一種高效的植物DNA結合蛋白提取方法，其特征在于，步驟二所述離心的具體條件為4℃，1000～1200rpm離心10～
7.根據權利要求6所述一種高效的植物DNA結合蛋白提取方法，其特征在于，步驟三所述NaCl溶液的濃度為1mol/L。
8.根據權利要求7所述一種高效的植物DNA結合蛋白提取方法，其特征在于，步驟三所述超聲處理在冰浴條件下進行，超聲輸出功率為100～200W，工作時間3s，間隔時間12s，操作總時長20～30min。
9.根據權利要求8所述一種高效的植物DNA結合蛋白提取方法，其特征在于，步驟四所述離心的具體條件為4℃，10000～25000rpm離心5～30min。
10.根據權利要求9所述一種高效的植物DNA結合蛋白提取方法，其特征在于，步驟五需要獲得有活性的植物DNA結合蛋白時，用微球菌核酸酶處理所述DNA-蛋白復合物并提取純化植物DNA結合蛋白；不需要獲得有活性的植物DNA結合蛋白時，采用常規提取蛋白的方法從所述DNA-蛋白復合物中提取純化植物DNA結合蛋白。
...【技術特征摘要】
1.一種高效的植物dna結合蛋白提取方法，其特征在于，包括如下步驟：
2.根據權利要求1所述一種高效的植物dna結合蛋白提取方法，其特征在于，步驟一還包括將植物材料浸泡到甲醛溶液中進行dna與蛋白質交聯的步驟，然后將所得dna蛋白交聯材料用液氮研磨成粉末。
3.根據權利要求1或2所述一種高效的植物dna結合蛋白提取方法，其特征在于，步驟二所述溶液1為含有0.4m?sucrose、1.5mm?mgcl2和1mm?dtt的ph為8.0的10mm?tris-hcl緩沖溶液。
4.根據權利要求3所述一種高效的植物dna結合蛋白提取方法，其特征在于，步驟二中所述植物粉末與溶液1的質量體積比為1g:10ml，所述旋渦震蕩時間為10～20min。
5.根據權利要求4所述一種高效的植物dna結合蛋白提取方法，其特征在于，步驟二所述過濾采用2層300目的尼龍布過濾或2-4層miracloth濾布過濾。
6.根據權利要求5所述一種高效的植物dna結合蛋白提取方法，...
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