【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】
【國外來華專利技術(shù)】
本披露涉及與蛋白l和/或kappaselect色譜材料的結(jié)合降低的多價結(jié)合蛋白、產(chǎn)生此類多價結(jié)合蛋白的方法，以及從包含多價結(jié)合蛋白和雜質(zhì)(例如，錯配的多肽)的組合物中純化此類多價結(jié)合蛋白的方法。
技術(shù)介紹
1、多價結(jié)合蛋白(例如，多價和/或多特異性抗體和抗體構(gòu)建體)作為人疾病的治療劑的發(fā)展具有巨大的臨床潛力。然而，igg形式的多價結(jié)合蛋白的生產(chǎn)一直具有挑戰(zhàn)性，因為抗體重鏈已經(jīng)進(jìn)化為以相對混雜的方式結(jié)合抗體輕鏈。由于此類雜亂式配對，包含例如兩個或更多個抗體重鏈(或重鏈構(gòu)建體)和/或兩個或更多個抗體輕鏈(或輕鏈構(gòu)建體)的多價結(jié)合蛋白的產(chǎn)生可能導(dǎo)致形成包含重鏈同二聚體和/或混雜的重鏈/輕鏈對的不期望種類。由于在結(jié)構(gòu)和分子質(zhì)量上的相似性，從這種不期望的錯配種類中色譜分離正確組裝的多價結(jié)合蛋白可能是困難的。此外，復(fù)雜的體外組裝反應(yīng)和/或純化方法限制了許多多價結(jié)合蛋白平臺的適用性，特別是它們在許多治療藥物管線所必需的高通量篩選中的用途。
2、本領(lǐng)域需要改善的蛋白質(zhì)純化方法，其去除錯配的重鏈/輕鏈副產(chǎn)物并增加多價結(jié)合蛋白產(chǎn)率。
技術(shù)實現(xiàn)思路
1、在一些實施例中，提供了包含形成兩個抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域的四個多肽鏈的多價結(jié)合蛋白；其中，該四個多肽鏈包含：
2、包含由下式表示的結(jié)構(gòu)的第一重鏈多肽：
3、vh1-ch1?[i]，
4、包含由下式表示的結(jié)構(gòu)的第一輕鏈多肽鏈：
5、vl1-cl1?[ii]，
6、包含由下式表示的結(jié)構(gòu)的第二重鏈
7、vh2-ch1?[iii]，
8、以及包含由下式表示的結(jié)構(gòu)的第二輕鏈多肽鏈：
9、vl2-cl2?[iv]；
10、其中：vl1是第一免疫球蛋白輕鏈可變結(jié)構(gòu)域；vl2是第二免疫球蛋白輕鏈可變結(jié)構(gòu)域，其中vl2是κ1、κ3、或κ4亞型輕鏈可變結(jié)構(gòu)域，cl1是第一免疫球蛋白輕鏈恒定結(jié)構(gòu)域，其中cl1是cκ亞型輕鏈恒定結(jié)構(gòu)域；cl2是第二免疫球蛋白輕鏈恒定結(jié)構(gòu)域；vh1是第一免疫球蛋白重鏈可變結(jié)構(gòu)域；vh2是第二免疫球蛋白重鏈可變結(jié)構(gòu)域；ch1是免疫球蛋白重鏈恒定結(jié)構(gòu)域；其中cl1包含與沒有一個或多個氨基酸置換的cl1相比降低與kappaselect色譜材料的結(jié)合的該一個或多個氨基酸置換，其中vl2包含與沒有一個或多個氨基酸置換的vl2相比降低與蛋白l色譜材料的結(jié)合的該一個或多個氨基酸置換，并且其中vh1與vl1相關(guān)聯(lián)形成第一抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域，并且vh2與vl2相關(guān)聯(lián)形成第二抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域。
11、在一些實施例中，提供了包含形成兩個抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域的四個多肽鏈的多價結(jié)合蛋白；其中，該四個多肽鏈包含：
12、包含由下式表示的結(jié)構(gòu)的第一重鏈多肽：
13、vh1-ch1-ch2-ch3?[i]，
14、包含由下式表示的結(jié)構(gòu)的第一輕鏈多肽：
15、vl1-cl1???????????[ii]，
16、包含由下式表示的結(jié)構(gòu)的第二重鏈多肽：
17、vh2-ch1-ch2-ch3?[iii]，
18、以及包含由下式表示的結(jié)構(gòu)的第二輕鏈多肽：
19、vl2-cl2???????[iv]；
20、其中：vl1是第一免疫球蛋白輕鏈可變結(jié)構(gòu)域；vl2是第二免疫球蛋白輕鏈可變結(jié)構(gòu)域；cl1是第一免疫球蛋白輕鏈恒定結(jié)構(gòu)域；cl2是第二免疫球蛋白輕鏈恒定結(jié)構(gòu)域；vh1是第一免疫球蛋白重鏈可變結(jié)構(gòu)域；vh2是第二免疫球蛋白重鏈可變結(jié)構(gòu)域；ch1、ch2和ch3是免疫球蛋白重鏈恒定結(jié)構(gòu)域；其中cl1包含與沒有一個或多個氨基酸置換的cl1相比降低與kappaselect色譜材料的結(jié)合的該一個或多個氨基酸置換，其中vl2包含與沒有一個或多個氨基酸置換的vl2相比降低與蛋白l色譜材料的結(jié)合的該一個或多個氨基酸置換，并且其中vh1與vl1相關(guān)聯(lián)形成第一抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域，并且vh2與vl2相關(guān)聯(lián)形成第二抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域。
21、在根據(jù)(或如適用于)本文的任何實施例的一些實施例中，包含一個或多個置換的cl1與kappaselect的結(jié)合與沒有該一個或多個氨基酸置換的cl1相比降低約90％。在根據(jù)(或如適用于)本文的任何實施例的一些實施例中，包含一個或多個置換的vl2與蛋白l色譜材料的結(jié)合與沒有該一個或多個氨基酸置換的vl2相比降低約90％。在根據(jù)(或如適用于)本文的任何實施例的一些實施例中，包含一個或多個置換的cl1中的一個或多個氨基酸置換處于對應(yīng)于109、110或199的位置，其中編號根據(jù)eu索引。在根據(jù)(或如適用于)本文的任何實施例的一些實施例中，包含一個或多個置換的cl1中的一個或多個氨基酸置換是t109a置換、v110d置換、q199k置換、t109a-v110d置換、或t109a-v110d-q199k置換，其中氨基酸編號根據(jù)eu索引。在根據(jù)(或如適用于)本文的任何實施例的一些實施例中，包含一個或多個置換的cl1中的一個或多個氨基酸置換處于對應(yīng)于109，198、199或202的位置，其中編號根據(jù)eu索引。在根據(jù)(或如適用于)本文的任何實施例的一些實施例中，包含一個或多個置換的cl1中的一個或多個氨基酸置換是h198r置換、q199w置換、或t109a-s202r置換，其中氨基酸編號根據(jù)eu索引。在根據(jù)(或如適用于)本文的任何實施例的一些實施例中，包含一個或多個置換的vl2中的一個或多個氨基酸置換是框架氨基酸的置換。在根據(jù)(或如適用于)本文的任何實施例的一些實施例中，包含一個或多個置換的vl2中的一個或多個氨基酸置換處于對應(yīng)于12或18的位置，其中編號根據(jù)kabat。在根據(jù)(或如適用于)本文的任何實施例的一些實施例中，包含一個或多個置換的vl2中的一個或多個氨基酸置換是s12p置換、r18p置換、r18q置換、s12p-r18p置換、或s12p-r18q置換，其中編號根據(jù)kabat。在根據(jù)(或如適用于)本文的任何實施例的一些實施例中，第一重鏈多肽的ch3結(jié)構(gòu)域和/或第二重鏈多肽的ch3結(jié)構(gòu)域是人igg1或igg4?ch3結(jié)構(gòu)域。在根據(jù)(或如適用于)本文的任何實施例的一些實施例中，第一重鏈多肽的ch3結(jié)構(gòu)域在對應(yīng)于人igg1的位置354和位置366的位置處包含氨基酸置換，其中編號根據(jù)eu索引，其中這些氨基酸置換是s354c和t366w；其中該第二重鏈多肽的ch3結(jié)構(gòu)域在對應(yīng)于人igg1的位置349、位置366、位置368、位置407、位置435和位置436的位置處包含氨基酸置換，其中編號根據(jù)eu索引，其中這些氨基酸置換是y349c、t366s、l368a和y407v。在根據(jù)(或如適用于)本文的任何實施例的一些實施例中，第一重鏈多肽的ch3結(jié)構(gòu)域在對應(yīng)于人igg1的位置349、位置366、位置368、位置407、位置435和位置436的位置處包含氨基酸置換，其中編號根據(jù)eu索引，其中這些氨基酸置換是y349c、t366s、l368a和y407v；其中該第二重鏈多肽的ch3結(jié)構(gòu)域在對應(yīng)于人igg1的本文檔來自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護(hù)點】
1.一種多價結(jié)合蛋白，其包含形成兩個抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域的四個多肽鏈；其中，該四個多肽鏈包含：
2.一種多價結(jié)合蛋白，其包含形成兩個抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域的四個多肽鏈；其中，該四個多肽鏈包含：
3.如權(quán)利要求1或權(quán)利要求2所述的多價結(jié)合蛋白，其中包含該一個或多個置換的CL1與KappaSelect的結(jié)合與沒有該一個或多個氨基酸置換的CL1相比降低約90％。
4.如權(quán)利要求1-3中任一項所述的多價結(jié)合蛋白，其中包含該一個或多個置換的VL2與該蛋白L色譜材料的結(jié)合與沒有該一個或多個氨基酸置換的VL2相比降低約90％。
5.如權(quán)利要求1-4中任一項所述的多價結(jié)合蛋白，其中包含該一個或多個置換的CL1中的該一個或多個氨基酸置換處于對應(yīng)于109、110或199的位置，其中編號根據(jù)EU索引。
6.如權(quán)利要求5所述的多價結(jié)合蛋白，其中包含該一個或多個置換的CL1中的該一個或多個氨基酸置換是T109A置換、V110D置換、Q199K置換、T109A-V110D置換、或T109A-V110D-Q199K置換，其中氨基酸編號根據(jù)EU索引。
7
8.如權(quán)利要求7所述的多價結(jié)合蛋白，其中包含該一個或多個置換的CL1中的一個或多個氨基酸置換是H198R置換、Q199W置換、或T109A-S202R置換，其中氨基酸編號根據(jù)EU索引。
9.如權(quán)利要求1-8中任一項所述的多價結(jié)合蛋白，其中包含該一個或多個置換的VL2中的一個或多個氨基酸置換是框架氨基酸的置換。
10.如權(quán)利要求1-9中任一項所述的多價結(jié)合蛋白，其中包含該一個或多個置換的VL2中的該一個或多個氨基酸置換處于對應(yīng)于12或18的位置，其中編號根據(jù)Kabat。
11.如權(quán)利要求10所述的多價結(jié)合蛋白，其中包含該一個或多個置換的VL2中的一個或多個氨基酸置換是S12P置換、R18P置換、R18Q置換、S12P-R18P置換、或S12P-R18Q置換，其中編號根據(jù)Kabat。
12.如權(quán)利要求2-11中任一項所述的多價結(jié)合蛋白，其中該第一重鏈多肽的CH3結(jié)構(gòu)域和/或該第二重鏈多肽的CH3結(jié)構(gòu)域是人IgG1或IgG4CH3結(jié)構(gòu)域。
13.如權(quán)利要求2-12中任一項所述的多價結(jié)合蛋白，其中該第一重鏈多肽的CH3結(jié)構(gòu)域在對應(yīng)于人IgG1的位置354和位置366的位置處包含氨基酸置換，其中編號根據(jù)EU索引，其中這些氨基酸置換是S354C和T366W；其中該第二重鏈多肽的CH3結(jié)構(gòu)域在對應(yīng)于人IgG1的位置349、位置366、位置368、位置407、位置435和位置436的位置處包含氨基酸置換，其中編號根據(jù)EU索引，其中這些氨基酸置換是Y349C、T366S、L368A和Y407V。
14.如權(quán)利要求2-13中任一項所述的多價結(jié)合蛋白，其中該第一重鏈多肽的CH3結(jié)構(gòu)域在對應(yīng)于人IgG1的位置349、位置366、位置368、位置407、位置435和位置436的位置處包含氨基酸置換，其中編號根據(jù)EU索引，其中這些氨基酸置換是Y349C、T366S、L368A和Y407V；其中該第二重鏈多肽的CH3結(jié)構(gòu)域在對應(yīng)于人IgG1的位置354和位置366的位置處包含氨基酸置換，其中編號根據(jù)EU索引，其中這些氨基酸置換是S354C和T366W。
15.如權(quán)利要求13所述的多價結(jié)合蛋白，其中該第二重鏈多肽的CH3包含降低與蛋白A的結(jié)合的一個或多個氨基酸置換。
16.如權(quán)利要求14所述的多價結(jié)合蛋白，其中該第一重鏈多肽的CH3包含降低與蛋白A的結(jié)合的一個或多個氨基酸置換。
17.如權(quán)利要求15或16所述的多價結(jié)合蛋白，其中降低與蛋白A的結(jié)合的一個或多個氨基酸置換是在對應(yīng)于人IgG1的位置435和位置436的位置處的氨基酸置換，其中編號根據(jù)EU索引。
18.如權(quán)利要求17所述的多價結(jié)合蛋白，其中這些氨基酸置換是H435R和Y436F，其中氨基酸編號根據(jù)EU索引。
19.如權(quán)利要求2-18中任一項所述的多價結(jié)合蛋白，其中該第一重鏈多肽的CH1、CH2和CH3結(jié)構(gòu)域不同于該第二重鏈多肽的CH1、CH2和CH3結(jié)構(gòu)域。
20.如權(quán)利要求2-19中任一項所述的多價結(jié)合蛋白，其中該第一重鏈多肽衍生自與該第二重鏈多肽不同的物種。
21.如權(quán)利要求2-11、19或20中任一項所述的多價結(jié)合蛋白，其中該第一重鏈多肽和該第一輕鏈多肽衍生自小鼠重鏈免疫球蛋...
【技術(shù)特征摘要】
【國外來華專利技術(shù)】
1.一種多價結(jié)合蛋白，其包含形成兩個抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域的四個多肽鏈；其中，該四個多肽鏈包含：
2.一種多價結(jié)合蛋白，其包含形成兩個抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域的四個多肽鏈；其中，該四個多肽鏈包含：
3.如權(quán)利要求1或權(quán)利要求2所述的多價結(jié)合蛋白，其中包含該一個或多個置換的cl1與kappaselect的結(jié)合與沒有該一個或多個氨基酸置換的cl1相比降低約90％。
4.如權(quán)利要求1-3中任一項所述的多價結(jié)合蛋白，其中包含該一個或多個置換的vl2與該蛋白l色譜材料的結(jié)合與沒有該一個或多個氨基酸置換的vl2相比降低約90％。
5.如權(quán)利要求1-4中任一項所述的多價結(jié)合蛋白，其中包含該一個或多個置換的cl1中的該一個或多個氨基酸置換處于對應(yīng)于109、110或199的位置，其中編號根據(jù)eu索引。
6.如權(quán)利要求5所述的多價結(jié)合蛋白，其中包含該一個或多個置換的cl1中的該一個或多個氨基酸置換是t109a置換、v110d置換、q199k置換、t109a-v110d置換、或t109a-v110d-q199k置換，其中氨基酸編號根據(jù)eu索引。
7.如權(quán)利要求1-4中任一項所述的多價結(jié)合蛋白，其中包含該一個或多個置換的cl1中的該一個或多個氨基酸置換處于對應(yīng)于109、198、199或202的位置，其中編號根據(jù)eu索引。
8.如權(quán)利要求7所述的多價結(jié)合蛋白，其中包含該一個或多個置換的cl1中的一個或多個氨基酸置換是h198r置換、q199w置換、或t109a-s202r置換，其中氨基酸編號根據(jù)eu索引。
9.如權(quán)利要求1-8中任一項所述的多價結(jié)合蛋白，其中包含該一個或多個置換的vl2中的一個或多個氨基酸置換是框架氨基酸的置換。
10.如權(quán)利要求1-9中任一項所述的多價結(jié)合蛋白，其中包含該一個或多個置換的vl2中的該一個或多個氨基酸置換處于對應(yīng)于12或18的位置，其中編號根據(jù)kabat。
11.如權(quán)利要求10所述的多價結(jié)合蛋白，其中包含該一個或多個置換的vl2中的一個或多個氨基酸置換是s12p置換、r18p置換、r18q置換、s12p-r18p置換、或s12p-r18q置換，其中編號根據(jù)kabat。
12.如權(quán)利要求2-11中任一項所述的多價結(jié)合蛋白，其中該第一重鏈多肽的ch3結(jié)構(gòu)域和/或該第二重鏈多肽的ch3結(jié)構(gòu)域是人igg1或igg4ch3結(jié)構(gòu)域。
13.如權(quán)利要求2-12中任一項所述的多價結(jié)合蛋白，其中該第一重鏈多肽的ch3結(jié)構(gòu)域在對應(yīng)于人igg1的位置354和位置366的位置處包含氨基酸置換，其中編號根據(jù)eu索引，其中這些氨基酸置換是s354c和t366w；其中該第二重鏈多肽的ch3結(jié)構(gòu)域在對應(yīng)于人igg1的位置349、位置366、位置368、位置407、位置435和位置436的位置處包含氨基酸置換，其中編號根據(jù)eu索引，其中這些氨基酸置換是y349c、t366s、l368a和y407v。
14.如權(quán)利要求2-13中任一項所述的多價結(jié)合蛋白，其中該第一重鏈多肽的ch3結(jié)構(gòu)域在對應(yīng)于人igg1的位置349、位置366、位置368、位置407、位置435和位置436的位置處包含氨基酸置換，其中編號根據(jù)eu索引，其中這些氨基酸置換是y349c、t366s、l368a和y407v；其中該第二重鏈多肽的ch3結(jié)構(gòu)域在對應(yīng)于人igg1的位置354和位置366的位置處包含氨基酸置換，其中編號根據(jù)eu索引，其中這些氨基酸置換是s354c和t366w。
15.如權(quán)利要求13所述的多價結(jié)合蛋白，其中該第二重鏈多肽的ch3包含降低與蛋白a的結(jié)合的一個或多個氨基酸置換。
16.如權(quán)利要求14所述的多價結(jié)合蛋白，其中該第一重鏈多肽的ch3包含降低與蛋白a的結(jié)合的一個或多個氨基酸置換。
17.如權(quán)利要求15或16所述的多價結(jié)合蛋白，其中降低與蛋白a的結(jié)合的一個或多個氨基酸置換是在對應(yīng)于人igg1的位置435和位置436的位置處的氨基酸置換，其中編號根據(jù)eu索引。
18.如權(quán)利要求17所述的多價結(jié)合蛋白，其中這些氨基酸置換是h435r和y436f，其中氨基酸編號根據(jù)eu索引。
19.如權(quán)利要求2-18中任一項所述的多價結(jié)合蛋白，其中該第一重鏈多肽的ch1、ch2和ch3結(jié)構(gòu)域不同于該第二重鏈多肽的ch1、ch2和ch3結(jié)構(gòu)域。
20.如權(quán)利要求2-19中任一項所述的多價結(jié)合蛋白，其中該第一重鏈多肽衍生自與該第二重鏈多肽不同的物種。
21.如權(quán)利要求2-11、19或20中任一項所述的多價結(jié)合蛋白，其中該第一重鏈多肽和該第一輕鏈多肽衍生自小鼠重鏈免疫球蛋白和小鼠輕鏈免疫球蛋白，并且該第二重鏈多肽和該第二輕鏈多肽衍生自大鼠重鏈免疫球蛋白和大鼠輕鏈免疫球蛋白。
22.如權(quán)利要求2-11中任一項所述的多價結(jié)合蛋白，其中該第一重鏈多肽和該第二重鏈多肽各自包含igg4?ch3結(jié)構(gòu)域。
23.如權(quán)利要求22所述的多價結(jié)合蛋白，其中該第一重鏈多肽包含k409r氨基酸置換并且該第二重鏈多肽包含f405l氨基酸置換，其中編號根據(jù)eu索引。
24.如權(quán)利要求1-23中任一項所述的多價結(jié)合蛋白，其中該多價結(jié)合蛋白是雙特異性抗原結(jié)合蛋白。
25.如權(quán)利要求1-24中任一項所述的多價結(jié)合蛋白，其中該第一抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域和該第二抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域結(jié)合不同的抗原。
26.如權(quán)利要求2-18中任一項所述的多價結(jié)合蛋白，
27.如權(quán)利要求2-18中任一項所述的多價結(jié)合蛋白，
28.如權(quán)利要求26所述的多價結(jié)合蛋白，其中vl3包含與沒有一個或多個氨基酸置換的vl3相比降低與該蛋白l色譜材料的結(jié)合的該一個或多個氨基酸置換。
29.如權(quán)利要求26所述的多價結(jié)合蛋白，其中vl3是λ亞型免疫球蛋白輕鏈可變結(jié)構(gòu)域或κ2免疫球蛋白輕鏈可變結(jié)構(gòu)域。
30.如權(quán)利要求26-29中任一項所述的多價結(jié)合蛋白，其中該多價結(jié)合蛋白是雙特異性的或三特異性的。
31.如權(quán)利要求26-30中任一項所述的多價結(jié)合蛋白，其中該第一抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域、該第二抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域和該第三抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域結(jié)合兩個或三個不同的抗原。
32.如權(quán)利要求26-30中任一項所述的多價結(jié)合蛋白，其中該第一抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域結(jié)合第一抗原，該第二抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域結(jié)合第二抗原，并且該第三抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域結(jié)合第三抗原。
33.如權(quán)利要求26-30中任一項所述的多價結(jié)合蛋白，其中該第一抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域和該第二抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域結(jié)合第一抗原并且該第三抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域結(jié)合第二抗原。
34.一種多價結(jié)合蛋白，其包含形成三個抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域的四個多肽鏈；其中，該四個多肽鏈包含：
35.一種多價結(jié)合蛋白，其包含形成三個抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域的四個多肽鏈；其中，該四個多肽鏈包含：
36.如權(quán)利要求34或35所述的多價結(jié)合蛋白，其中該結(jié)合蛋白是三特異性的，并且能夠特異性結(jié)合三個不同的抗原靶標(biāo)。
37.如權(quán)利要求34-36中任一項所述的多價結(jié)合蛋白，其中l(wèi)1、l2、l3和/或l4中的至少一個各自獨立地長度是0個氨基酸。
38.如權(quán)利要求34-36中任一項所述的多價結(jié)合蛋白，其中l(wèi)1、l2、l3和/或l4各自獨立地長度是至少一個氨基酸。
39.如權(quán)利要求34或35所述的多價結(jié)合蛋白，其中：
40.如權(quán)利要求39所述的多價結(jié)合蛋白，其中：
41.如權(quán)利要求39或40所述的多價結(jié)合蛋白，其中該結(jié)合蛋白是四特異性的并且能夠特異性結(jié)合四個不同的抗原靶標(biāo)。
42.如權(quán)利要求39-41中任一項所述的多價結(jié)合蛋白，其中l(wèi)1、l2、l3、l4、l5、l6、l7和/或l8中的至少一個各自獨立地長度是0個氨基酸。
43.如權(quán)利要求39-41中任一項所述的多價結(jié)合蛋白，其中l(wèi)1、l2、l3、l4、l5、l6、l7和/或l8各自獨立地長度是至少一個氨基酸。
44.如權(quán)利要求34-43中任一項所述的多價結(jié)合蛋白，其中包含該一個或多個氨基酸置換的cl1或cl2與該kappaselect色譜材料的結(jié)合與沒有該一個或多個氨基酸置換的cl1或cl2相比降低約90％。
45.如權(quán)利要求34-44中任一項所述的多價結(jié)合蛋白，其中包含該一個或多個置換的vl1、vl2、vl3和/或vl4與該蛋白l色譜材料的結(jié)合與沒有該一個或多個氨基酸置換的vl1、vl2、vl3和/或vl4相比降低約90％。
46.如權(quán)利要求34-45中任一項所述的多價結(jié)合蛋白，其中該cl1或cl2中的一個或多個氨基酸置換處于對應(yīng)于109、110或199的位置，其中編號根據(jù)eu索引。
47.如權(quán)利要求46所述的多價結(jié)合蛋白，其中包含該一個或多個氨基酸置換的cl1或cl2中的一個或多個氨基酸置換是t109a置換、v110d置換、q199k置換、t109a-v110d置換、或t109a-v110d-q199k置換，其中氨基酸編號根據(jù)eu索引。
48.如權(quán)利要求34-45中任一項所述的多價結(jié)合蛋白，其中包含該一個或多個置換的cl1或cl2中的該一個或多個氨基酸置換處于對應(yīng)于109、198、199或202的位置，其中編號根據(jù)eu索引。
49.如權(quán)利要求48所述的多價結(jié)合蛋白，其中包含該一個或多個置換的cl1或cl2中的一個或多個氨基酸置換是h198r置換、q199w置換、或t109a-s202r置換，其中氨基酸編號根據(jù)eu索引。
50.如權(quán)利要求34-49中任一項所述的多價結(jié)合蛋白，其中包含該一個或多個置換的vl1、vl2、vl3和/或vl4中的一個或多個氨基酸置換是框架氨基酸的置換。
51.如權(quán)利要求34-50中任一項所述的多價結(jié)合蛋白，其中包含該一個或多個置換的vl1、vl2、vl3和/或vl4中的該一個或多個氨基酸置換處于對應(yīng)于12或18的位置，其中編號根據(jù)kabat。
52.如權(quán)利要求51所述的多價結(jié)合蛋白，其中包含該一個或多個置換的vl1、vl2、vl3和/或vl4中的一個或多個氨基酸置換是s12p置換、r18p置換、r18q置換、s12p-r18p置換、或s12p-r18q置換，其中編號根據(jù)kabat。
53.如權(quán)利要求35-38和40-52中任一項所述的多價結(jié)合蛋白，其中該第一重鏈多肽的ch3結(jié)構(gòu)域和/或該第二重鏈多肽的ch3結(jié)構(gòu)域是人igg1或igg4?ch3結(jié)構(gòu)域。
54.如權(quán)利要求35-38和40-53中任一項所述的多價結(jié)合蛋白，其中該第一重鏈多肽的ch3結(jié)構(gòu)域在對應(yīng)于人igg1的位置354和位置366的位置處包含氨基酸置換，其中編號根據(jù)eu索引，其中這些氨基酸置換是s354c和t366w；其中該第二重鏈多肽的ch3結(jié)構(gòu)域在對應(yīng)于人igg1的位置349、位置366、位置368、位置407、位置435和位置436的位置處包含氨基酸置換，其中編號根據(jù)eu索引，其中這些氨基酸置換是y349c、t366s、l368a和y407v。
55.如權(quán)利要求35-38和40-53中任一項所述的多價結(jié)合蛋白，其中該第一重鏈多肽的ch3結(jié)構(gòu)域在對應(yīng)于人igg1的位置349、位置366、位置368、位置407、位置435和位置436的位置處包含氨基酸置換，其中編號根據(jù)eu索引，其中這些氨基酸置換是y349c、t366s、l368a和y407v；其中該第二重鏈多肽的ch3結(jié)構(gòu)域在對應(yīng)于人igg1的位置354和位置366的位置處包含氨基酸置換，其中編號根據(jù)eu索引，其中這些氨基酸置換是s354c和t366w。
56.如權(quán)利要求54所述的多價結(jié)合蛋白，其中該第二重鏈多肽的ch3包含降低與蛋白a的結(jié)合的一個或多個氨基酸置換。
57.如權(quán)利要求55所述的多價結(jié)合蛋白，其中該第一重鏈多肽的ch3包含降低與蛋白a的結(jié)合的一個或多個氨基酸置換。
58.如權(quán)利要求56或57所述的多價結(jié)合蛋白，其中降低與蛋白a的結(jié)合的一個或多個氨基酸置換是在對應(yīng)于人igg1的位置435和位置436的位置處的氨基酸置換，其中編號根據(jù)eu索引。
59.如權(quán)利要求58所述的多價結(jié)合蛋白，其中這些氨基酸置換是h435r和y436f，其中氨基酸編號根據(jù)eu索引。
60.一種多價結(jié)合蛋白，其包含形成兩個抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域的四個多肽鏈；其中，該四個多肽鏈包含：
61.一種多價結(jié)合蛋白，其包含形成兩個抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域的四個多肽鏈；其中，該四個多肽鏈包含：
62.一種多價結(jié)合蛋白，其包含形成兩個抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域的四個多肽鏈；其中，該四個多肽鏈包含：
63.一種多價結(jié)合蛋白，其包含形成兩個抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域的四個多肽鏈；其中，該四個多肽鏈包含：
64.如權(quán)利要求60-63中任一項所述的多價結(jié)合蛋白，其中包含該一個或多個氨基酸置換的cl1或cl2與該kappaselect色譜材料的結(jié)合與沒有該一個或多個氨基酸置換的cl1或cl2相比降低約90％。
65.如權(quán)利要求60-64中任一項所述的多價結(jié)合蛋白，其中包含該一個或多個氨基酸置換的vl1或vl2與該蛋白l色譜材料的結(jié)合與沒有該一個或多個氨基酸置換的vl1或vl2相比降低約90％。
66.如權(quán)利要求60-65中任一項所述的多價結(jié)合蛋白，其中包含該一個或多個氨基酸置換的cl1或cl2中的該一個或多個氨基酸置換處于對應(yīng)于109、110或199的位置，其中編號根據(jù)eu索引。
67.如權(quán)利要求66所述的多價結(jié)合蛋白，其中包含該一個或多個氨基酸置換的cl1或cl2中的一個或多個氨基酸置換是t109a置換、v110d置換、q199k置換、t109a-v110d置換、或t109a-v110d-q199k置換。
68.如權(quán)利要求60-65中任一項所述的多價結(jié)合蛋白，其中包含該一個或多個置換的cl1或cl2中的該一個或多個氨基酸置換處于對應(yīng)于109、198、199或202的位置，其中編號根據(jù)eu索引。
69.如權(quán)利要求68所述的多價結(jié)合蛋白，其中包含該一個或多個置換的cl1或cl2中的一個或多個氨基酸置換是h198r置換、q199w置換、或t109a-s202r置換，其中氨基酸編號根據(jù)eu索引。
70.如權(quán)利要求60-69中任一項所述的多價結(jié)合蛋白，其中包含該一個或多個氨基酸置換的vl1或vl2中的一個或多個氨基酸置換是框架氨基酸的置換。
71.如權(quán)利要求60-70中任一項所述的多價結(jié)合蛋白，其中包含該一個或多個氨基酸置換的vl1或vl2中的該一個或多個氨基酸置換處于對應(yīng)于12或18的位置，其中編號根據(jù)kabat。
72.如權(quán)利要求71所述的多價結(jié)合蛋白，其中包含該一個或多個氨基酸置換的vl1或vl2中的一個或多個氨基酸置換是s12p置換、r18p置換、r18q置換、s12p-r18p置換、或s12p-r18q置換，其中編號根據(jù)kabat。
73.如權(quán)利要求57-66中任一項所述的多價結(jié)合蛋白，其中該第一重鏈多肽的ch3結(jié)構(gòu)域和/或該第二重鏈多肽的ch3結(jié)構(gòu)域是人igg1或igg4ch3結(jié)構(gòu)域。
74.如權(quán)利要求61-73中任一項所述的多價結(jié)合蛋白，其中該第一重鏈多肽的ch3結(jié)構(gòu)域在對應(yīng)于人igg1的位置354和位置366的位置處包含氨基酸置換，其中編號根據(jù)eu索引，其中這些氨基酸置換是s354c和t366w；其中該第二重鏈多肽的ch3結(jié)構(gòu)域在對應(yīng)于人igg1的位置349、位置366、位置368、位置407、位置435和位置436的位置處包含氨基酸置換，其中編號根據(jù)eu索引，其中這些氨基酸置換是y349c、t366s、l368a和y407v。
75.如權(quán)利要求61-74中任一項所述的多價結(jié)合蛋白，其中該第一重鏈多肽的ch3結(jié)構(gòu)域在對應(yīng)于人igg1的位置349、位置366、位置3...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：D·J·雷澤克，孫庭萬，E·勞，L·沃爾，
申請(專利權(quán))人：賽諾菲，
類型：發(fā)明
國別省市：
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