【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及化學生物學，尤其涉及一種多巴胺衍生物、偶聯化合物及其制備方法和應用。
技術介紹
1、多巴胺修飾(dopmainylation)是指將多巴胺分子(dopamine)作為一種修飾單體(modifier)，在催化酶谷氨酰胺轉胺酶(tgm)的作用下，共價加成到蛋白質的氨基酸殘基谷氨酰胺(glutamine，q)上。多巴胺修飾早在60年前就已經被發現，但是到目前為止只有有限的多巴胺修飾蛋白底物被鑒定，這是因為蛋白質翻譯后修飾的水平通常不高，故多巴胺修飾蛋白底物的鑒定一般要借助于多巴胺修飾抗體的富集或者化學生物學方法。目前現有技術中特異性富集多巴胺修飾蛋白底物的探針尚未有報道。
技術實現思路
1、本專利技術的目的在于提供一種多巴胺衍生物、偶聯化合物及其制備方法和應用，本專利技術提供的多巴胺衍生物含有炔基，不需要依賴于多巴胺修飾抗體，通過所述炔基便于引入可以特異性富集多巴胺修飾蛋白底物的功能性化合物(如生物素)，之后結合質譜方法，可以鑒定多巴胺修飾的蛋白質底物和修飾位點。
2、為了實現上述專利技術目的，本專利技術提供以下技術方案：
3、本專利技術提供了一種多巴胺衍生物，具有式i所示結構：
4、
5、本專利技術提供了上述技術方案所述多巴胺衍生物的制備方法，包括以下步驟：
6、將多巴胺、boc2o、第一堿試劑、第一有機溶劑與水混合，進行氨基保護反應，得到氨基保護中間體；
7、將所述氨基保護中間體、鹵代丙炔、第二堿試
8、將所述取代中間體進行脫保護反應，得到具有式i所示結構的多巴胺衍生物；
9、所述氨基保護中間體與取代中間體的結構式依次如下所示：
10、
11、優選地，所述氨基保護反應的溫度為10～20℃，時間為10～15h；
12、所述取代反應的溫度為15～25℃，時間為10～15h；
13、所述脫保護反應在酸試劑存在條件下進行；所述脫保護反應的溫度為20～30℃，時間為30～40h。
14、本專利技術提供了上述技術方案所述多巴胺衍生物在制備富集多巴胺修飾蛋白底物的制劑、鑒定多巴胺修飾蛋白底物的制劑或鑒定多巴胺修飾蛋白底物的修飾位點的制劑中的應用，所述多巴胺修飾蛋白底物由蛋白質經所述多巴胺衍生物修飾得到。
15、優選地，所述修飾在生物體內或生物體外進行；所述修飾在谷氨酰胺轉胺酶存在條件下進行。
16、優選地，所述生物體包括細胞、組織或動物。
17、本專利技術提供了一種偶聯化合物，包括基體物質、多巴胺衍生物與功能性物質，所述基體物質、多巴胺衍生物與功能性物質依次共價連接；
18、所述基體物質包括蛋白質或多肽，所述多巴胺衍生物為上述技術方案所述多巴胺衍生物，所述功能性物質包括含有疊氮基團的生物素或含有疊氮基團的熒光探針；
19、其中所述基體物質與多巴胺衍生物通過酰胺鍵連接，所述多巴胺衍生物與功能性物質通過炔基與疊氮基團經點擊化學反應形成的基團連接。
20、本專利技術提供了上述技術方案所述偶聯化合物的制備方法，包括以下步驟：
21、將基體物質、多巴胺衍生物與第一溶劑混合，進行酰胺化反應，得到中間體；
22、將所述中間體、功能性物質、銅催化劑、三[(1-芐基-1h-1,2,3-三唑-4-基)甲基]胺、三(2-羧乙基)膦鹽酸鹽與第二溶劑混合，進行點擊化學反應，得到所述偶聯化合物。
23、優選地，所述酰胺化反應的溫度為15～25℃，時間為1～3h；
24、所述點擊化學反應的溫度為15～25℃，時間為0.5～1.5h。
25、本專利技術提供了上述技術方案所述偶聯化合物在制備富集多巴胺修飾蛋白底物的制劑、鑒定多巴胺修飾蛋白底物的制劑或鑒定多巴胺修飾蛋白底物的修飾位點的制劑中的應用。
26、本專利技術提供了具有式i所示結構的多巴胺衍生物。本專利技術提供的多巴胺衍生物可以作為特異性富集多巴胺修飾蛋白底物的小分子探針，不需要依賴于多巴胺修飾抗體富集多巴胺修飾蛋白底物，結合質譜方法，可以鑒定多巴胺修飾的蛋白質底物和修飾位點，尤其適用于鑒定任意種類細胞或組織這類生物體中可以發生多巴胺修飾的蛋白質底物和修飾位點，為初步探索多巴胺修飾的生物學功能奠定了基礎，有助于解析與多巴胺修飾相關的疾病的發病機制和研發干預多巴胺修飾的藥物。
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1.一種多巴胺衍生物，其特征在于，具有式I所示結構：
2.權利要求1所述多巴胺衍生物的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：
3.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于，所述氨基保護反應的溫度為10～20℃，時間為10～15h；
4.權利要求1所述多巴胺衍生物在制備富集多巴胺修飾蛋白底物的制劑、鑒定多巴胺修飾蛋白底物的制劑或鑒定多巴胺修飾蛋白底物的修飾位點的制劑中的應用，所述多巴胺修飾蛋白底物由蛋白質經所述多巴胺衍生物修飾得到。
5.根據權利要求4所述的應用，其特征在于，所述修飾在生物體內或生物體外進行；所述修飾在谷氨酰胺轉胺酶存在條件下進行。
6.根據權利要求5所述的應用，其特征在于，所述生物體包括細胞、組織或動物。
7.一種偶聯化合物，包括基體物質、多巴胺衍生物與功能性物質，所述基體物質、多巴胺衍生物與功能性物質依次共價連接；
8.權利要求7所述偶聯化合物的制備方法，包括以下步驟：
9.根據權利要求8所述的制備方法，其特征在于，所述酰胺化反應的溫度為15～25℃，時間為1～3h；<...
【技術特征摘要】
1.一種多巴胺衍生物，其特征在于，具有式i所示結構：
2.權利要求1所述多巴胺衍生物的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：
3.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于，所述氨基保護反應的溫度為10～20℃，時間為10～15h；
4.權利要求1所述多巴胺衍生物在制備富集多巴胺修飾蛋白底物的制劑、鑒定多巴胺修飾蛋白底物的制劑或鑒定多巴胺修飾蛋白底物的修飾位點的制劑中的應用，所述多巴胺修飾蛋白底物由蛋白質經所述多巴胺衍生物修飾得到。
5.根據權利要求4所述的應用，其特征在于，所述修飾在生物體內或生物體外進行；所述修飾在谷氨酰胺...
【專利技術屬性】
技術研發人員：張銀鳳，莫茜，楊雅琪，沈楠，
申請(專利權)人：上海交通大學醫學院附屬上海兒童醫學中心，
類型：發明
國別省市：
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