【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于生物，具體地，本專利技術涉及一種含人工改造的nel結構域的重組蛋白的構建及實際應用。
技術介紹
1、傳統的藥物分子多為識別并調節靶蛋白活性的化學小分子，這類小分子藥物通過與靶蛋白結合并占據相應的結合口袋從而抑制靶蛋白的生理功能。這種策略對于許多含有活性催化空腔或變構口袋的酶或受體來說具有明顯優勢，然而對于大多數蛋白質使用這一策略并不能取得很好的效果。由于缺乏可用的結合口袋，導致目前約80％的人源蛋白是“不可靶向成藥”的。目前，protacs(proteolysis-targeting?chimeras，蛋白水解靶向嵌合體)由于其具有靶向功能、低劑量起作用等優點，而成為了新藥研發領域的熱點。與傳統的小分子藥物不同，protacs是雙功能化的嵌合體，其利用細胞內天然的蛋白降解體系，即泛素-蛋白酶體途徑，一端靶向目標蛋白，另一端劫持內源性的e3泛素連接酶，形成三元復合物，并對目標蛋白進行泛素化標記，從而使目標蛋白被蛋白酶體識別并降解。目標蛋白水解后，protacs可以被釋放并進入下一個循環過程，因此當其具有較低的劑量時即可發揮作用。鑒于proctacs具有上述優勢特征，已有多種靶向不同基因的protacs進入了臨床開發階段，適應證包括多種癌癥、炎癥等。
2、盡管如此，protacs的出現使人類攻破了眾多“不可成藥”的靶點，但其依舊具有脫靶效應并存在引起副作用的風險。同時，目前絕大部分的蛋白都缺乏有效特異靶向的小分子，因此嚴重限制了protacs可靶向的蛋白范圍。
3、基于此，本領域迫切需要一種降低
技術實現思路
1、本專利技術的目的在于提供一種人工改造的nel結構域重組蛋白的構建及其應用。
2、本專利技術的第一方面，提供了一種重組蛋白，所述的重組蛋白具有式i或式ii所示結構：
3、z0-z1-l-z2(i)；
4、z0-z2-l-z1(ii)
5、式中，
6、z0選自下組：無、標簽、酶切位點、或其組合；
7、z1為目標蛋白特異性識別模塊；
8、z2為nel結構域；
9、l為無或連接序列；
10、“-”表示連接上述各序列的肽鍵；
11、其中，所述z1特異性識別目標蛋白，所述z2對目標蛋白進行泛素化修飾。
12、在另一優選例中，所述標簽選自下組：trx、trx6×his、或ha。
13、在另一優選例中，所述酶切位點為hrv?3c酶切位點。
14、在另一優選例中，所述hrv?3c酶切位點的氨基酸序列如seq?id?no:9所示。
15、在另一優選例中，所述的z1選自下組：抗體、蛋白質基序、或蛋白質結構域。
16、在另一優選例中，所述z1中含有人為引入的突變。
17、在另一優選例中，所述突變的用途選自下組：
18、(u1)改變所述z1對目標蛋白的親和力；
19、(u2)減少所述重組蛋白自身的泛素化修飾；
20、或其組合。
21、在另一優選例中，所述抗體為納米抗體。
22、在另一優選例中，所述納米抗體的氨基酸序列如seq?id?no:1所示。
23、在另一優選例中，所述納米抗體特異性識別綠色熒光蛋白。
24、在另一優選例中，所述納米抗體中含有人為引入的突變。
25、在另一優選例中，引入突變的所述納米抗體的氨基酸序列選自下組：
26、(1)如seq?id?no:1所示的氨基酸序列并且在seq?id?no:1中有以下突變：r35f、f102r和將序列中所有賴氨酸突變為精氨酸；
27、(2)如seq?id?no:1所示的氨基酸序列并且在seq?id?no:1中有以下突變：r35f；
28、(3)如seq?id?no:1所示的氨基酸序列并且在seq?id?no:1中有以下突變：r35f和f102r。
29、(4)如seq?id?no:1所示的氨基酸序列并且在seq?id?no:1中有以下突變：n99f、f102r和e103r；
30、(5)如seq?id?no:1所示的氨基酸序列并且在seq?id?no:1中有以下突變：r35f、n99f、f102r和e103r；
31、(6)如seq?id?no:1所示的氨基酸序列并且在seq?id?no:1中有以下突變：將序列中所有賴氨酸突變為精氨酸；
32、或其組合。
33、在另一優選例中，引入突變的所述納米抗體的氨基酸序列為：氨基酸序列如seqid?no:1所示并且在seq?id?no:1中有以下突變：r35f、f102r和將序列中所有賴氨酸突變為精氨酸。
34、在另一優選例中，所述的蛋白質基序為atg16l1的wbs1基序。
35、在另一優選例中，所述atg16l1的wbs1基序的氨基酸序列如seq?id?no:2所示。
36、在另一優選例中，所述atg16l1的wbs1基序特異性識別wipi2b。
37、在另一優選例中，所述atg16l1的wbs1基序中含有人為引入的突變。
38、在另一優選例中，引入突變的所述atg16l1的wbs1基序的氨基酸序列包括：如seqid?no:2所示的氨基酸序列并且在seq?id?no:2中有以下突變：將序列中所有賴氨酸突變為精氨酸。
39、在另一優選例中，所述的目標蛋白選自下組：蛋白標簽、蛋白質結構域、或氨基酸序列。
40、在另一優選例中，所述的蛋白標簽包括綠色熒光蛋白。
41、在另一優選例中，所述的氨基酸序列為人源wipi2b的序列。
42、在另一優選例中，所述z2中含有人為引入的突變。
43、在另一優選例中，所述突變的用途為減少所述重組蛋白自身的泛素化修飾。
44、在另一優選例中，所述z2為福氏志賀菌(shigella?flexneri)ipah1.4的第274位氨基酸殘基至第575位氨基酸殘基。
45、在另一優選例中，所述福氏志賀菌ipah1.4的第274位氨基酸殘基至第575位氨基酸殘基的氨基酸序列如seq?id?no:3所示。
46、在另一優選例中，所述福氏志賀菌ipah1.4的第274位氨基酸殘基至第575位氨基酸殘基中含有人為引入的突變。
47、在另一優選例中，引入突變的所述福氏志賀菌ipah1.4的第274位氨基酸殘基至第575位氨基酸殘基的氨基酸序列選自下組：
48、(a)如seq?id?no:3所示的氨基酸序列并且在seq?id?no:3中有以下突變：將序列中的所有賴氨酸突變為精氨酸；
49、(b)如seq?id?no:3所示的氨基酸序列并且在seq?id?no:3中有以下突變：將序列中的所有絲氨酸突變為丙氨酸；...
【技術保護點】
1.一種重組蛋白，其特征在于，所述的重組蛋白具有式I或式II所示結構：
2.如權利要求1所述的重組蛋白，其特征在于，所述的Z1選自下組：抗體、蛋白質基序、蛋白質結構域、或其組合。
3.如權利要求2所述的重組蛋白，其特征在于，所述的抗體為納米抗體，所述納米抗體為未突變或突變的納米抗體；所述突變的納米抗體的氨基酸序列選自下組：
4.如權利要求2所述的重組蛋白，其特征在于，所述的蛋白質基序為未突變或突變的ATG16L1的WBS1基序；所述突變的ATG16L1的WBS1基序的氨基酸序列包括：如SEQ?ID?NO:2所示的氨基酸序列并且在SEQ?ID?NO:2中有以下突變：將序列中所有賴氨酸突變為精氨酸。
5.如權利要求1所述的重組蛋白，其特征在于，所述Z2為未突變或突變的福氏志賀菌IpaH1.4的第274位氨基酸殘基至第575位氨基酸殘基；所述突變的福氏志賀菌IpaH1.4的第274位氨基酸殘基至第575位氨基酸殘基的氨基酸序列選自下組：
6.一種多核苷酸，其特征在于，所述的多核苷酸編碼權利要求1所述的重組蛋白。
7
8.如權利要求7所述的表達載體，其特征在于，所述表達載體選自下組：質粒載體、病毒載體、或其組合，其中，所述病毒載體選自下組：慢病毒載體、腺病毒載體、腺相關病毒載體、或其組合。
9.一種細胞株，其特征在于，所述的細胞株含有權利要求7所述的表達載體或基因組中整合有權利要求6所述的多核苷酸。
10.一種權利要求1所述的重組蛋白、權利要求6所述的多核苷酸或權利要求7所述的表達載體的用途，其特征在于，用于制備一種藥物或藥物組合物，所述藥物或藥物組合物用于降解目標蛋白。
...【技術特征摘要】
1.一種重組蛋白，其特征在于，所述的重組蛋白具有式i或式ii所示結構：
2.如權利要求1所述的重組蛋白，其特征在于，所述的z1選自下組：抗體、蛋白質基序、蛋白質結構域、或其組合。
3.如權利要求2所述的重組蛋白，其特征在于，所述的抗體為納米抗體，所述納米抗體為未突變或突變的納米抗體；所述突變的納米抗體的氨基酸序列選自下組：
4.如權利要求2所述的重組蛋白，其特征在于，所述的蛋白質基序為未突變或突變的atg16l1的wbs1基序；所述突變的atg16l1的wbs1基序的氨基酸序列包括：如seq?id?no:2所示的氨基酸序列并且在seq?id?no:2中有以下突變：將序列中所有賴氨酸突變為精氨酸。
5.如權利要求1所述的重組蛋白，其特征在于，所述z2為未突變或突變的福氏志賀菌ipah1.4的第274位氨基酸殘基至第575位氨基酸...
【專利技術屬性】
技術研發人員：潘李鋒，周鑫頔，
申請(專利權)人：中國科學院上海有機化學研究所，
類型：發明
國別省市：
還沒有人留言評論。發表了對其他瀏覽者有用的留言會獲得科技券。