【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)屬于環(huán)境微生物，尤其涉及一種高效降解草甘膦的嗜氨基氨基桿菌及其菌劑的制備方法。
技術(shù)介紹
1、草甘膦(n-(膦酸甲基)甘氨酸)是一種具有滅生性、廣譜性、系統(tǒng)性和傳導(dǎo)性的除草劑。隨著轉(zhuǎn)基因作物的廣泛種植、以及經(jīng)濟(jì)作物收獲期的植物滅生、牧場改良、免耕農(nóng)業(yè)等的盛行，草甘膦目前已成為世界上使用最廣泛、生產(chǎn)量和年銷售額最高的除草劑之一，約占全球除草劑市場的25％。然而，由于草甘膦潛在的生物毒性，過量或長期攝入被草甘膦污染的食物等會損害動物或人體健康。由于過度使用和生物累積作用，已在一些環(huán)境樣本中檢測到草甘膦的存在，其濃度范圍為1μg/l～10mg/kg。此外，草甘膦及其主要代謝物氨甲基膦酸殘留也會對土壤動物、非目標(biāo)植物和微生物造成一定的負(fù)面影響。因此，采用必要措施降低草甘膦在環(huán)境中的殘留尤為必要。
2、微生物修復(fù)技術(shù)是一種高效、綠色的消減土壤中草甘膦的方法，研究人員已從多種環(huán)境樣品中分離得到不同特性的草甘膦降解微生物，然而，其中有一些草甘膦降解微生物在復(fù)雜的自然環(huán)境中存活和保留能力較差，有效性大打折扣。因此，挖掘高效降解菌是消除草甘膦造成的環(huán)境危害的關(guān)鍵，在草甘膦污染環(huán)境治理中具有重要的應(yīng)用價(jià)值。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
1、針對上述
技術(shù)介紹
中指出的不足，本專利技術(shù)提供了一種高效降解草甘膦的嗜氨基氨基桿菌及其菌劑的制備方法，旨在解決上述
技術(shù)介紹
中現(xiàn)有技術(shù)存在的問題。
2、為實(shí)現(xiàn)上述目的，本專利技術(shù)采用的技術(shù)方案是：
3、一種嗜氨基氨基桿菌aminobact
4、本專利技術(shù)進(jìn)一步提供了一種嗜氨基氨基桿菌菌劑，其活性成分為上述嗜氨基氨基桿菌aminobacter?aminovorans?k2。
5、本專利技術(shù)進(jìn)一步提供了一種嗜氨基氨基桿菌菌劑的制備方法，包括以下步驟：
6、(1)培養(yǎng)基配制
7、(a)固體斜面保藏培養(yǎng)基各成份及其終濃度：蛋白胨5g/l，牛肉膏10g/l，nacl?5g/l，酵母提取物5g/l，葡萄糖5g/l，瓊脂20g/l，定容至1l，ph?7.0，121℃高壓蒸汽滅菌20min；
8、(b)液體培養(yǎng)基各成份及其終濃度：(nh4)2so4?2g/l，mgso4·7h2o?0.2g/l，feso4·7h2o?0.001g/l，na2hpo4?1.5g/l，kh2po4?1.5g/l，cacl2?0.01g/l，蔗糖5g/l，酵母提取物5g/l，蛋白胨5g/l，定容至1l，ph?7.0-7.2，121℃高壓蒸汽滅菌20min；
9、(2)種子液及菌劑制備：將上述嗜氨基氨基桿菌aminobacter?aminovorans?k2從固體斜面保藏培養(yǎng)基接入液體培養(yǎng)基中，放入30℃培養(yǎng)箱，150rpm，培養(yǎng)24h；制備蠟狀芽孢桿菌種子液并接入液體培養(yǎng)基中，放入30℃培養(yǎng)箱，150rpm，進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)24～36h獲得菌劑。
10、優(yōu)選地，所述種子液的接種量為5％。
11、優(yōu)選地，所述嗜氨基氨基桿菌aminobacter?aminovorans?k2能夠在以草甘膦為唯一碳源的無機(jī)鹽培養(yǎng)基中生長，所述無機(jī)鹽培養(yǎng)基的組成：(nh4)2so4?2.0g/l，mgso4·7h2o0.2g/l，feso4·7h2o?0.001g/l，na2hpo4?1.5g/l，kh2po4?1.5g/l，cacl2?0.01g/l，用蒸餾水定容至1l，ph?7.0-7.2，121℃高壓蒸汽滅菌20min。在無機(jī)鹽培養(yǎng)基中，培養(yǎng)43h后菌株k2在不同草甘膦濃度中(50～1000mg/l)的生長均可達(dá)到穩(wěn)定期，且均對草甘膦降解率達(dá)到97％以上；培養(yǎng)溫度在20～35℃范圍內(nèi)，菌株k2能夠在48h內(nèi)完全降解草甘膦；在ph為5.5～8.5范圍內(nèi)能將600mg/l草甘膦完全降解。
12、優(yōu)選地，所述嗜氨基氨基桿菌aminobacter?aminovorans?k2能夠在草甘膦、蔗糖、葡萄糖、蛋白胨、酵母提取物同時(shí)存在的無機(jī)鹽培養(yǎng)基中生長，所述蔗糖、葡萄糖、蛋白胨、酵母提取物的濃度為5g/l。在含600mg/l草甘膦的無機(jī)鹽培養(yǎng)基中，同時(shí)添加5g/l的蔗糖、葡萄糖、蛋白胨、酵母提取物時(shí)(即給予充足的外源營養(yǎng)物質(zhì))，菌株k2能夠在66h內(nèi)完全降解草甘膦。
13、上述嗜氨基氨基桿菌aminobacter?aminovorans?k2既能夠以草甘膦為唯一碳源進(jìn)行生長和繁殖；當(dāng)面對自然環(huán)境中存在的復(fù)雜基質(zhì)時(shí)，菌株k2也可以持續(xù)穩(wěn)定的發(fā)揮作用。菌株k2屬革蘭氏陰性菌，且同時(shí)含有抗/降解草甘膦有關(guān)的酶系基因aro、gat、phn基因簇等，不僅表現(xiàn)出高效的草甘膦降解效率，還具有一定的無機(jī)磷降解能力。
14、一種嗜氨基氨基桿菌菌劑在降解草甘膦方面的應(yīng)用，其中的嗜氨基氨基桿菌aminobacter?aminovorans?k2具有高效的草甘膦降解特性和良好的環(huán)境適應(yīng)性，并能在復(fù)雜底物的條件下實(shí)現(xiàn)對草甘膦的高效降解，菌株k2具有修復(fù)被草甘膦污染環(huán)境的廣泛應(yīng)用前景。
15、相比于現(xiàn)有技術(shù)的缺點(diǎn)和不足，本專利技術(shù)具有以下有益效果：
16、本專利技術(shù)提供了一種嗜氨基氨基桿菌，具有高效的草甘膦降解特性和良好的環(huán)境適應(yīng)性，并能在復(fù)雜底物的條件下實(shí)現(xiàn)對草甘膦的高效降解，菌株k2具有修復(fù)被草甘膦污染環(huán)境的廣泛應(yīng)用前景。
本文檔來自技高網(wǎng)...【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
1.一種嗜氨基氨基桿菌，其特征在于，所述嗜氨基氨基桿菌分類命名為嗜氨基氨基桿菌Aminobacter?aminovorans?K2，保藏于中國工業(yè)微生物菌種保藏管理中心甘肅分中心，保藏編號為GSICC30126，所述嗜氨基氨基桿菌Aminobacter?aminovorans?K2包含SEQ?IDNO：1的基因序列。
2.一種嗜氨基氨基桿菌菌劑，其特征在于，所述菌劑的活性成分為權(quán)利要求1所述的嗜氨基氨基桿菌Aminobacter?aminovorans?K2。
3.一種如權(quán)利要求2所述的嗜氨基氨基桿菌菌劑的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：
4.如權(quán)利要求3所述的嗜氨基氨基桿菌菌劑的制備方法，其特征在于，所述種子液的接種量為5％。
5.如權(quán)利要求3所述的嗜氨基氨基桿菌菌劑的制備方法，其特征在于，所述嗜氨基氨基桿菌Aminobacter?aminovorans?K2能夠在以草甘膦為唯一碳源的無機(jī)鹽培養(yǎng)基中生長，所述無機(jī)鹽培養(yǎng)基的組成：(NH4)2SO4?2.0g/L，MgSO4·7H2O?0.2g/L，F(xiàn)eSO4·7H2O?0.00
6.如權(quán)利要求5所述的嗜氨基氨基桿菌菌劑的制備方法，其特征在于，所述無機(jī)鹽培養(yǎng)基中，草甘膦濃度為50～1000mg/L。
7.如權(quán)利要求5所述的嗜氨基氨基桿菌菌劑的制備方法，其特征在于，所述無機(jī)鹽培養(yǎng)基中，培養(yǎng)溫度為20～35℃。
8.如權(quán)利要求5所述的嗜氨基氨基桿菌菌劑的制備方法，其特征在于，所述無機(jī)鹽培養(yǎng)基中，pH為5.5～8.5。
9.如權(quán)利要求3所述的嗜氨基氨基桿菌菌劑的制備方法，其特征在于，所述嗜氨基氨基桿菌Aminobacter?aminovorans?K2能夠在草甘膦、蔗糖、葡萄糖、蛋白胨、酵母提取物存在的無機(jī)鹽培養(yǎng)基中生長，且兼具降解草甘膦的功能，所述蔗糖、葡萄糖、蛋白胨、酵母提取物的濃度為5g/L。
10.一種如權(quán)利要求2所述的嗜氨基氨基桿菌菌劑在降解草甘膦方面的應(yīng)用。
...【技術(shù)特征摘要】
1.一種嗜氨基氨基桿菌，其特征在于，所述嗜氨基氨基桿菌分類命名為嗜氨基氨基桿菌aminobacter?aminovorans?k2，保藏于中國工業(yè)微生物菌種保藏管理中心甘肅分中心，保藏編號為gsicc30126，所述嗜氨基氨基桿菌aminobacter?aminovorans?k2包含seq?idno：1的基因序列。
2.一種嗜氨基氨基桿菌菌劑，其特征在于，所述菌劑的活性成分為權(quán)利要求1所述的嗜氨基氨基桿菌aminobacter?aminovorans?k2。
3.一種如權(quán)利要求2所述的嗜氨基氨基桿菌菌劑的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：
4.如權(quán)利要求3所述的嗜氨基氨基桿菌菌劑的制備方法，其特征在于，所述種子液的接種量為5％。
5.如權(quán)利要求3所述的嗜氨基氨基桿菌菌劑的制備方法，其特征在于，所述嗜氨基氨基桿菌aminobacter?aminovorans?k2能夠在以草甘膦為唯一碳源的無機(jī)鹽培養(yǎng)基中生長，所述無機(jī)鹽培養(yǎng)基的組成：(nh4)2so4?2.0g/l，mgso4·7h2o?0.2g/l...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：陳玉坤，祝英，鞏曉芳，王治業(yè)，
申請(專利權(quán))人：甘肅省科學(xué)院生物研究所，
類型：發(fā)明
國別省市：
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