【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
本公開(kāi)涉及生物醫(yī)學(xué)，尤其涉及一種改善真皮層組織衰老的藥物及其應(yīng)用。
技術(shù)介紹
1、真皮成纖維細(xì)胞(fibroblast，fb)是皮膚真皮層的主要細(xì)胞類(lèi)型，負(fù)責(zé)合成膠原蛋白、彈性蛋白和其他細(xì)胞外基質(zhì)(ecm)蛋白，這些蛋白對(duì)于維持皮膚的結(jié)構(gòu)和功能至關(guān)重要。隨著年齡的增長(zhǎng)，真皮成纖維細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)衰老現(xiàn)象，這通常被稱(chēng)為細(xì)胞衰老或復(fù)制性衰老，這一過(guò)程與皮膚的整體衰老密切相關(guān)。細(xì)胞衰老的特征包括細(xì)胞增殖能力的下降、細(xì)胞形態(tài)和功能的變化、細(xì)胞周期的停滯以及細(xì)胞分泌表型的改變。在真皮成纖維細(xì)胞中，衰老會(huì)導(dǎo)致膠原蛋白和彈性蛋白的合成減少，同時(shí)增加基質(zhì)金屬蛋白酶(mmps)的表達(dá)，這些酶可以降解ecm蛋白，導(dǎo)致皮膚彈性和緊致度的下降。此外，衰老的成纖維細(xì)胞還會(huì)產(chǎn)生更多的促炎細(xì)胞因子和自由基，如白細(xì)胞介素(ils)、腫瘤壞死因子α(tnf-α)和活性氧物種(ros)，這些分子可以引發(fā)或加劇炎癥反應(yīng)，損害周?chē)慕】导?xì)胞，并加速皮膚老化過(guò)程。皮膚衰老的另一個(gè)重要特征是dna損傷的積累，這會(huì)影響到真皮成纖維細(xì)胞的正常功能。隨著時(shí)間的推移，dna損傷的修復(fù)能力下降，導(dǎo)致基因穩(wěn)定性和細(xì)胞功能的進(jìn)一步惡化。總的來(lái)說(shuō)，真皮成纖維細(xì)胞的衰老與皮膚衰老有著密切的聯(lián)系。隨著成纖維細(xì)胞功能的下降，皮膚的再生能力和修復(fù)能力減弱，最終導(dǎo)致皮膚的外觀和功能發(fā)生明顯的衰老變化。因此，研究如何延緩或逆轉(zhuǎn)成纖維細(xì)胞的衰老過(guò)程，對(duì)于開(kāi)發(fā)抗衰老治療策略具有重要意義。
2、micrornas(mirnas)是一類(lèi)在轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控基因表達(dá)的短非編碼rna分子。它們通過(guò)與目標(biāo)mrn
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
1、為克服相關(guān)技術(shù)中存在的問(wèn)題，本說(shuō)明書(shū)提供了一種改善真皮層組織衰老的藥物及其應(yīng)用，在對(duì)成纖維細(xì)胞衰老機(jī)制的深入研究、衰老標(biāo)志物的發(fā)現(xiàn)、以及潛在的抗衰老治療手段方面均具有重要意義。
2、根據(jù)本公開(kāi)第一方面，提供一種改善真皮層組織衰老的藥物，包括：
3、mir-940抑制劑，用于下調(diào)衰老成纖維細(xì)胞中mir-940的表達(dá)量，所述mir-940的核苷酸序列如seq?id?no:1所示。
4、在一些示例性實(shí)施例中，所述mir-940抑制劑能夠提升衰老成纖維細(xì)胞的活率。
5、根據(jù)本公開(kāi)的第二方面，提供一種生物標(biāo)志物在制備診斷、輔助診斷、治療真皮層組織衰老的產(chǎn)品中的應(yīng)用，所述生物標(biāo)志物為成纖維細(xì)胞衰老生物標(biāo)志物，包括：
6、mir-940，核苷酸序列如seq?id?no:1所示。
7、在一些示例性實(shí)施例中，所述mir-940在衰老成纖維細(xì)胞中的表達(dá)量高于在年輕成纖維細(xì)胞中的表達(dá)量。
8、根據(jù)本公開(kāi)的第三方面，提供一種用于檢測(cè)體外真皮層組織的試劑盒組，包括rna逆轉(zhuǎn)錄試劑盒和pcr擴(kuò)增試劑盒，所述rna逆轉(zhuǎn)錄試劑盒用于將包含成纖維細(xì)胞衰老生物標(biāo)志物的rna進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄合成cdna，所述pcr擴(kuò)增試劑盒用于將逆轉(zhuǎn)錄合成的cdna進(jìn)行擴(kuò)增；
9、其中，所述成纖維細(xì)胞衰老生物標(biāo)志物包括mir-940，核苷酸序列如seq?id?no:1所示。
10、在一些示例性實(shí)施例中，所述rna逆轉(zhuǎn)錄試劑盒包括：
11、反轉(zhuǎn)錄引物，核苷酸序列如seq?id?no:2所示。
12、在一些示例性實(shí)施例中，所述pcr擴(kuò)增試劑盒包括：
13、正向引物，核苷酸序列如seq?id?no:3所示；
14、反向引物，核苷酸序列如seq?id?no:4所示。
15、根據(jù)本公開(kāi)第四方面，提供一種檢測(cè)體外真皮層組織的方法，采用如第三方面所述的用于體外真皮層組織樣本檢測(cè)的試劑盒組進(jìn)行檢測(cè)。
16、在一些示例性實(shí)施例中，檢測(cè)體外真皮層組織的方法包括：
17、提取真皮層組織中的rna，采用所述rna逆轉(zhuǎn)錄試劑盒逆轉(zhuǎn)錄合成cdna；
18、采用所述pcr擴(kuò)增試劑盒將逆轉(zhuǎn)錄合成的cdna進(jìn)行擴(kuò)增；
19、測(cè)定所述mir-940的表達(dá)量。
20、根據(jù)本公開(kāi)第五方面，提供如第一方面所述的改善真皮層組織衰老的藥物、如第二方面所述的用于檢測(cè)體外真皮層組織的試劑盒組、如第三方面所述的檢測(cè)體外真皮層組織的方法在制備診斷、輔助診斷、治療真皮層組織衰老的產(chǎn)品中的應(yīng)用。
21、本公開(kāi)提供的技術(shù)方案可以包括以下有益效果：
22、本公開(kāi)采集了20-30歲之間人群(年輕組，y組)和50-70歲之間的人群(衰老組，s組)的真皮層組織樣本，利用rt-pcr技術(shù)檢測(cè)兩組人群真皮層組織內(nèi)mir-940的表達(dá)量差異。結(jié)果顯示，衰老組內(nèi)mir-940的表達(dá)量明顯高于年輕組，說(shuō)明mir-940可能是一種潛在的真皮層組織衰老的標(biāo)志物。
23、本公開(kāi)利用自然傳代的方式體外誘導(dǎo)成纖維細(xì)胞衰老，構(gòu)建了fb細(xì)胞衰老模型(將4代fb細(xì)胞設(shè)置為年輕組，20代細(xì)胞設(shè)置為衰老組)，并利用rt-pcr技術(shù)檢測(cè)兩組人群真皮層組織內(nèi)mir-940的表達(dá)量差異。結(jié)果顯示，衰老組內(nèi)mir-940的表達(dá)量明顯高于年輕組，進(jìn)一步說(shuō)明mir-940可能是一種潛在的真皮層組織衰老的標(biāo)志物。
24、本公開(kāi)對(duì)mir-940抑制劑在fb細(xì)胞上的抗衰效果進(jìn)行驗(yàn)證，將年輕fb細(xì)胞和衰老fb細(xì)胞分別作為對(duì)照組中的年輕組和衰老組，用轉(zhuǎn)染mir-940抑制劑(mir-940inhibitor)的衰老fb細(xì)胞作為藥物處理組(mir-940-in)。結(jié)果顯示，采用c12fdg染色法，相對(duì)于年輕組，衰老組中c12fdg染色的平均熒光強(qiáng)度顯著增加，而相對(duì)于衰老組，藥物處理組組平均熒光強(qiáng)度顯著降低。采用cck8試劑盒，相較于年輕組，衰老組的衰老fb細(xì)胞活率有明顯的下降，而相較于衰老組，藥物處理組的fb細(xì)胞活率明顯上升。以上說(shuō)明mir-940-in可以恢復(fù)衰老fb細(xì)胞的細(xì)胞活率。
25、本公開(kāi)通過(guò)一系列實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)mir-940在年輕與衰老人群中的表達(dá)存在顯著差異，這一結(jié)果為識(shí)別和監(jiān)測(cè)皮膚衰老提供了一個(gè)新的特異性的生物標(biāo)志物。該生物標(biāo)志物的發(fā)現(xiàn)，提供了一種可能改善皮膚健康、增強(qiáng)皮膚再生能力和延緩衰老過(guò)程的新方法。
26、綜上，本公開(kāi)在對(duì)成纖維細(xì)胞衰老機(jī)制的深入研究、衰老標(biāo)志物的發(fā)現(xiàn)、以及潛在的抗衰老治療手段方面均具有重要意義。
27、應(yīng)當(dāng)理解的是，以上的一般描述和后文的細(xì)節(jié)描述僅是示例性和解釋性的，并不能限制本說(shuō)明書(shū)。
本文檔來(lái)自技高網(wǎng)...【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
1.一種改善真皮層組織衰老的藥物，其特征在于，包括：
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的改善真皮層組織衰老的藥物，其特征在于，所述miR-940抑制劑能夠提升衰老成纖維細(xì)胞的活率。
3.一種生物標(biāo)志物在制備診斷、輔助診斷、治療真皮層組織衰老的產(chǎn)品中的應(yīng)用，其特征在于，所述生物標(biāo)志物為成纖維細(xì)胞衰老生物標(biāo)志物，包括：
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于，所述miR-940在衰老成纖維細(xì)胞中的表達(dá)量高于在年輕成纖維細(xì)胞中的表達(dá)量。
5.一種用于檢測(cè)體外真皮層組織的試劑盒組，其特征在于，包括RNA逆轉(zhuǎn)錄試劑盒和PCR擴(kuò)增試劑盒，所述RNA逆轉(zhuǎn)錄試劑盒用于將包含成纖維細(xì)胞衰老生物標(biāo)志物的RNA進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA，所述PCR擴(kuò)增試劑盒用于將逆轉(zhuǎn)錄合成的cDNA進(jìn)行擴(kuò)增；
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的用于檢測(cè)體外真皮層組織的試劑盒組，其特征在于，所述RNA逆轉(zhuǎn)錄試劑盒包括：
7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的用于檢測(cè)體外真皮層組織的試劑盒組，其特征在于，所述PCR擴(kuò)增試劑盒包括：
8.一種檢測(cè)體外真皮層組織的方法，其特征在
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的檢測(cè)體外真皮層組織的方法，其特征在于，包括：
10.如權(quán)利要求1或2所述的改善真皮層組織衰老的藥物、如權(quán)利要求5至7任一項(xiàng)所述的用于檢測(cè)體外真皮層組織的試劑盒組或如權(quán)利要求8或9所述的檢測(cè)體外真皮層組織的方法在制備診斷、輔助診斷、治療真皮層組織衰老的產(chǎn)品中的應(yīng)用。
...【技術(shù)特征摘要】
1.一種改善真皮層組織衰老的藥物，其特征在于，包括：
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的改善真皮層組織衰老的藥物，其特征在于，所述mir-940抑制劑能夠提升衰老成纖維細(xì)胞的活率。
3.一種生物標(biāo)志物在制備診斷、輔助診斷、治療真皮層組織衰老的產(chǎn)品中的應(yīng)用，其特征在于，所述生物標(biāo)志物為成纖維細(xì)胞衰老生物標(biāo)志物，包括：
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于，所述mir-940在衰老成纖維細(xì)胞中的表達(dá)量高于在年輕成纖維細(xì)胞中的表達(dá)量。
5.一種用于檢測(cè)體外真皮層組織的試劑盒組，其特征在于，包括rna逆轉(zhuǎn)錄試劑盒和pcr擴(kuò)增試劑盒，所述rna逆轉(zhuǎn)錄試劑盒用于將包含成纖維細(xì)胞衰老生物標(biāo)志物的rna進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄合成cdna，所述pcr擴(kuò)增試劑盒用于將逆轉(zhuǎn)錄合成...
【專(zhuān)利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：李宏宇，饒翔，吳理達(dá)，高云亮，唐杰，牛萌萌，黃匯，
申請(qǐng)(專(zhuān)利權(quán))人：南京安生諾科技有限公司，
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