【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及人工酶合成，尤其涉及一種去磷酸人工酶的制備方法。
技術介紹
1、去磷酸酶是指將磷酸酯水解生成自由磷酸根及羥基化分子的生物酶。生物酶分為天然酶和人工酶，人工酶的概念最早由布雷斯洛提出，他的工作表明酶促功能可以通過將金屬催化基團連接到疏水性物質上來實現大分子空腔。現有技術已經有研發人員公開了去磷酸人工酶，該去磷酸人工酶為硫氮共摻雜具有模仿半胱氨酸蛋白質的磷酸酶活性的納米粒子(sn-cnp)，該去磷酸人工酶的合成方法為；第一步，制備甜菜粉：把甜菜根(beet)洗凈，去皮，打漿，然后把漿液置入真空干燥箱于60℃下烘干，然后打粉。第二步：將3g甜菜粉、2g硫粉和2g?l-半胱氨酸以及24ml乙二胺和36ml去離子水置于100ml高壓反應釜中，在200℃反應5小時合成sn-cnps。通過過濾收集液體產物并離心。收集黃色濾液作為原始產物，其濃度約50mg/ml。上述方法制備得到的去磷酸人工酶易揮發，會造成巰基的流失，而巰基正是去磷酸人工酶活性的中心，這就導致上述去磷酸人工酶的活性在三周內就會消失，抗菌性也相應大大降低。
技術實現思路
1、有鑒于此，本專利技術的目的在于提供一種去磷酸人工酶的制備方法。本專利技術提供的制備方法得到的去磷酸人工酶的活性穩定，且抗菌性穩定。
2、為了實現上述專利技術目的，本專利技術提供以下技術方案：
3、本專利技術提供了一種去磷酸人工酶的制備方法，包括以下步驟：
4、將生物質原料、二胺化合物和水混合，進行水熱反應，得到納
5、將所述納米原液和半胱氨酸混合，經稀釋，得到所述去磷酸人工酶。
6、優選地，所述生物質原料包括水果、蔬菜和多糖中的一種或多種；
7、所述水果包括蘋果、甘蔗、葡萄和梨中的一種或多種，所述水果為新鮮的水果或腐爛的水果；
8、所述蔬菜包括甜菜根；
9、所述多糖包括纖維素和/或甲殼糖；
10、所述二胺化合物包括乙二胺或鄰苯二胺。
11、所述二胺化合物包括乙二胺或鄰苯二胺。
12、優選地，當所述二胺化合物為乙二胺時，所述生物質原料和乙二胺的料液比為1g:5ml～1g:30ml；
13、當所述二胺化合物為鄰苯二胺時，所述生物質原料和鄰苯二胺的料液比為1g:1.25ml～1g:2ml。
14、優選地，所述生物質原料和水的料液比為1g:12ml～1g:60ml。
15、優選地，所述水熱反應的溫度為180～220℃，時間為4～5h。
16、優選地，所述水熱反應后，還包括：將所得水熱反應料液冷卻后，進行過濾，所得濾液為所述納米原液。
17、優選地，所述生物質原料和半胱氨酸的質量比為1:1～1:7.5。
18、優選地，所述納米原液和半胱氨酸混合在攪拌的條件下進行，所述攪拌的溫度為室溫，壓力為常壓，時間為5～12h。
19、優選地，所述稀釋的倍數為200～1000倍。
20、優選地，所述去磷酸人工酶以去磷酸人工酶分散液的形式使用，所述去磷酸人工酶分散液的濃度為0.25mg/ml。
21、本專利技術提供了一種去磷酸人工酶的制備方法，包括以下步驟：將生物質原料、二胺化合物和水混合，進行水熱反應，得到納米原液；將所述納米原液和半胱氨酸混合，經稀釋，得到所述去磷酸人工酶。
22、本專利技術先利用水熱反應，將生物質原料和二胺化合物反應，形成表面含有酰胺基的生物炭材料；然后再加入半胱氨酸；半胱氨酸中的羧基與氨基與生物炭材料上的主要功能基酰胺基發生氫鍵相互作用，使得半胱氨酸上的巰基分布在納米顆粒的表面，形成更多的活性位點，且因為是通過氫鍵結合在一起，使得半胱氨酸與生物炭材料結合力更強，不易脫落，使得去磷酸人工酶的活性穩定，且抗菌性穩定。
23、進一步地，所述生物質原料包括水果、蔬菜和多糖中的一種或多種；所述水果包括蘋果、甘蔗、葡萄和梨中的一種或多種，所述水果為新鮮的水果或腐爛的水果；所述蔬菜包括甜菜根；所述多糖包括纖維素和/或甲殼糖；所述二胺化合物包括乙二胺或鄰苯二胺。尤其是，選用腐爛的水果為生物質原料，可以進一步降低去磷酸人工酶的制備成本。
24、進一步地，所述納米原液和半胱氨酸混合在攪拌的條件下進行，所述攪拌的溫度優選為室溫，壓力優選為常壓，時間優選為5～12h。本專利技術加入半胱氨酸后，控制攪拌溫度為室溫，壓力為常壓，相比現有技術中半胱氨酸化學性質不穩定，在中性或弱堿性溶液中被空氣中氧氣氧化為半胱氨酸二聚體(胱氨酸，加熱條件下二聚反應加快)而導致半胱氨酸的利用率降低；本專利技術的方法不會引發大量半胱氨酸氧化產生胱氨酸。因此，本專利技術提供的方法，對半胱氨酸的利用率高，并降低成本。
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1.一種去磷酸人工酶的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：
2.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述生物質原料包括水果、蔬菜和多糖中的一種或多種；
3.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于，當所述二胺化合物為乙二胺時，所述生物質原料和乙二胺的料液比為1g:5mL～1g:30mL；
4.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述生物質原料和水的料液比為1g:12mL～1g:60mL。
5.根據權利要求1或2或3或4所述的制備方法，其特征在于，所述水熱反應的溫度為180～220℃，時間為4～5h。
6.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述水熱反應后，還包括：將所得水熱反應料液冷卻后，進行過濾，所得濾液為所述納米原液。
7.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述生物質原料和半胱氨酸的質量比為1:1～1:7.5。
8.根據權利要求1或7所述的制備方法，其特征在于，所述納米原液和半胱氨酸混合在攪拌的條件下進行，所述攪拌的溫度為室溫，壓力為常壓，時間為5～12h。
<...【技術特征摘要】
1.一種去磷酸人工酶的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：
2.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述生物質原料包括水果、蔬菜和多糖中的一種或多種；
3.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于，當所述二胺化合物為乙二胺時，所述生物質原料和乙二胺的料液比為1g:5ml～1g:30ml；
4.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述生物質原料和水的料液比為1g:12ml～1g:60ml。
5.根據權利要求1或2或3或4所述的制備方法，其特征在于，所述水熱反應的溫度為180～220℃，時間為4～5h。
6.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在...
【專利技術屬性】
技術研發人員：范海燕，恩銳扣比納西，李嘉明，
申請(專利權)人：恩慈生物科技有限公司，
類型：發明
國別省市：
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