【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域，涉及一種膀胱癌mirna標(biāo)志物及其應(yīng)用，具體涉及一種與膀胱癌轉(zhuǎn)移相關(guān)的mirna-12124標(biāo)志物及其應(yīng)用。
技術(shù)介紹
1、膀胱癌主要分為非肌層浸潤性膀胱癌（nmibc）和肌層浸潤性膀胱癌（mibc），其中nmibc占較大比例，但mibc的侵襲性更強，預(yù)后相對較差。根據(jù)2020年全球癌癥統(tǒng)計報告，膀胱癌每年新發(fā)病例約57.3萬，死亡病例21.3萬。膀胱癌的轉(zhuǎn)移通常首先影響到淋巴結(jié)，隨后可能轉(zhuǎn)移到遠處器官，如肺、肝和骨。轉(zhuǎn)移的發(fā)生顯著影響患者的預(yù)后和生存率。膀胱癌的早期癥狀可能不明顯或與其他泌尿系統(tǒng)疾病相似，導(dǎo)致診斷具有一定難度。常用的診斷方法包括尿液細胞學(xué)檢查、膀胱鏡檢查、影像學(xué)檢查等。
2、mirna是一類小分子rna，能夠調(diào)控基因表達。在膀胱癌中，特定的mirna表達水平異常，可能在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、侵襲和轉(zhuǎn)移中發(fā)揮作用。研究這些mirna有助于理解膀胱癌的分子機制，并可能為診斷和治療提供新的生物標(biāo)志物。在未來臨床治療中，mirna不僅可以成為新的膀胱癌早期診斷和癌癥進程相關(guān)的標(biāo)志物，而且也有望通過改變mirna的表達或者其靶基因的表達治療膀胱癌等疾病。尋找和鑒定與膀胱癌發(fā)生相關(guān)的mirna及其靶基因?qū)閙irna用于臨床治療提供基礎(chǔ)。
技術(shù)實現(xiàn)思路
1、在現(xiàn)有技術(shù)的基礎(chǔ)上，本專利技術(shù)的目的在于提供一種用于預(yù)判膀胱癌轉(zhuǎn)移風(fēng)險、診斷膀胱癌是否發(fā)生轉(zhuǎn)移、判斷膀胱癌轉(zhuǎn)移是否復(fù)發(fā)的膀胱癌mirna標(biāo)志物，以及膀胱癌mirna標(biāo)志物的具體應(yīng)用。p>
2、為了實現(xiàn)上述目的，本專利技術(shù)采用了如下技術(shù)方案：
3、本專利技術(shù)提供了一種膀胱癌mirna標(biāo)志物，其特征在于，膀胱癌mirna標(biāo)志物為mirna-12124，所述mirna-12124在膀胱癌轉(zhuǎn)移組織中顯著過表達，其核苷酸序列如seq?idno：1所示；所述mirna-12124選自以下至少一種mirna：mirna-12124初始mirna、mirna-12124前體mirna、成熟mirna-12124；所述mirna-12124初始mirna能在人細胞內(nèi)被剪切并表達成熟mirna-12124；所述mirna-12124前體mirna能在人細胞內(nèi)被剪切并表達成熟mirna-12124。
4、應(yīng)當(dāng)知道，本專利技術(shù)所述的mirna-12124包括組成型核酸分子的功能等同物，即變體，其顯示完整mirna-12124核酸分子相同的功能，盡管它們通過核苷酸殘基的缺失、置換或者插入而突變。
5、本領(lǐng)域人員熟知，為了保證mirna的穩(wěn)定性，可以在mirna的一端或者兩端增加保護性堿基，如tt，也可對mirna堿基進行修飾，但是不影響mirna的功能。因此，本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知，在不影響mirna-12124功能的條件下，對mirna-12124進行堿基修飾或者在兩端增加堿基獲得的序列同樣包含在本專利技術(shù)的保護范圍之內(nèi)。
6、在本專利技術(shù)提供的具體實施例中，所述mirna-12124采用的是成熟mirna-12124。雖然在某些具體實施例中所使用的是成熟mirna-12124，但是本領(lǐng)域技術(shù)人員可以預(yù)期，初始mirna（pi-mirna-12124）、前體mirna（pre-mirna-12124）將可以獲得與成熟mirna-12124同樣的技術(shù)效果，因為細胞有能力進一步將初始mirna（pi-mirna-12124）、前體mirna?（pre-mirna-12124）加工為成熟mirna-12124。
7、本專利技術(shù)的mirna-12124核酸分子可以以單鏈或雙鏈的形式存在。成熟的mirna-12124主要呈單鏈形式，而mirna-12124前體是部分自互補的，以形成雙鏈結(jié)構(gòu)。本專利技術(shù)的核酸分子可以是rna、dna、pna、lna的形式。
8、本專利技術(shù)的mirna-12124可以是天然的或是人工合成的，或者使用可以表達mirna-12124的dna片段的載體轉(zhuǎn)染細胞獲得；所述載體包括病毒載體、真核載體。
9、病毒載體可以是任何適當(dāng)?shù)妮d體，包括但不限于反轉(zhuǎn)錄病毒載體、皰疹病毒（例如單純皰疹病毒、痘苗病毒及eb病毒）載體、腺病毒載體、腺病毒相關(guān)病毒載體、甲病毒載體。
10、真核表達載體可以是任何適當(dāng)?shù)谋磉_載體，包括但不限于pcmv-myc表達載體、pegfp表達載體、pcdna3.0表達載體、ptet表達載體、ptre表達載體、pef?bos表達載體，或者在公知表達載體的基礎(chǔ)上經(jīng)改造的載體，比如pet-21a、pcambia1301等。
11、可以表達mirna-12124的dna片段可以通過如下方式獲取：從mirna數(shù)據(jù)庫中（https://www.ncbi.nlm.nih.gov/gene/）尋找mirna-12124在基因組上的位置及具體序列信息，根據(jù)基因組序列確定mirna-12124初始mirna的位置，在mirna-12124初始mirna位置的上下游500-800bp區(qū)間內(nèi)設(shè)計特異性引物，擴增引物中間的序列即可獲得表達mirna-12124的dna片段。
12、本專利技術(shù)提供了膀胱癌mirna標(biāo)志物mirna-12124在制備膀胱癌檢測試劑中的應(yīng)用，所述的膀胱癌檢測試劑包括加尾反轉(zhuǎn)錄試劑和qpcr反應(yīng)試劑，所述加尾反轉(zhuǎn)錄試劑中含有核苷酸序列如seq?id?no：2所示的mirna-12124反轉(zhuǎn)錄特異引物；所述qpcr反應(yīng)試劑中含有標(biāo)志物mirna-12124的正、反向引物和探針，用于定量檢測樣本中標(biāo)志物mirna-12124的表達水平，mirna-12124正向引物的核苷酸序列如seq?id?no：3所示，mirna-12124反向引物的核苷酸序列如seq?id?no：4所示，?mir-12124探針的核苷酸序列如seq?id?no：5所示。
13、本專利技術(shù)還提供了膀胱癌mirna標(biāo)志物mirna-12124在制備膀胱癌檢測試劑盒中的應(yīng)用，其特征在于，試劑盒內(nèi)含有加尾反轉(zhuǎn)錄試劑和qpcr反應(yīng)試劑，所述加尾反轉(zhuǎn)錄試劑包括：polya聚合酶、atp、dntps、反轉(zhuǎn)錄酶、mirna-12124反轉(zhuǎn)錄特異引物和無酶水，其中mirna-12124反轉(zhuǎn)錄特異引物的核苷酸序列如seq?id?no：2所示；
14、所述qpcr反應(yīng)試劑包括：10×buffer、dntps、mgcl2、dna?taq聚合酶、無酶水、mirna-12124的正、反向引物和探針以及內(nèi)參基因的正、反向引物和探針，其中mirna-12124正向引物的核苷酸序列如seq?id?no：3所示，mirna-12124反向引物的核苷酸序列如seq?idno：4所示，?mir-12124探針的核苷酸序列如seq?id?no：5所示。
15、本專利技術(shù)mirna-12124在制備預(yù)判膀胱癌轉(zhuǎn)移風(fēng)險、診斷膀胱癌是否發(fā)生轉(zhuǎn)移、判斷膀胱癌轉(zhuǎn)移是否復(fù)發(fā)的芯片的應(yīng)用，其特征在于，所述芯片包括固相載體，以及固定在所述固相載體上的寡核苷酸探針，所述寡核苷酸探針特異性地對應(yīng)于mi本文檔來自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護點】
1.一種膀胱癌miRNA標(biāo)志物，其特征在于，膀胱癌miRNA標(biāo)志物為miRNA-12124，所述miRNA-12124在膀胱癌轉(zhuǎn)移組織中顯著過表達，其核苷酸序列如SEQ?ID?NO：1所示；所述miRNA-12124選自以下至少一種miRNA：miRNA-12124初始miRNA、miRNA-12124前體miRNA、成熟miRNA-12124；所述miRNA-12124初始miRNA能在人細胞內(nèi)被剪切并表達成熟miRNA-12124；所述miRNA-12124前體miRNA能在人細胞內(nèi)被剪切并表達成熟miRNA-12124。
2.?標(biāo)志物miRNA-12124在制備膀胱癌檢測試劑中的應(yīng)用，其特征在于，所述的膀胱癌檢測試劑包括加尾反轉(zhuǎn)錄試劑和QPCR反應(yīng)試劑，所述的加尾反轉(zhuǎn)錄試劑中含有核苷酸序列如SEQ?ID?NO：2所示的miRNA-12124反轉(zhuǎn)錄特異引物；
3.標(biāo)志物miRNA-12124在制備膀胱癌檢測試劑盒中的應(yīng)用，其特征在于，試劑盒內(nèi)含有加尾反轉(zhuǎn)錄試劑和QPCR反應(yīng)試劑，所述加尾反轉(zhuǎn)錄試劑包括：PolyA聚合酶、ATP、dNTPs、反轉(zhuǎn)錄酶、m
4.標(biāo)志物miRNA-12124在制備預(yù)判膀胱癌轉(zhuǎn)移風(fēng)險、診斷膀胱癌是否發(fā)生轉(zhuǎn)移、判斷膀胱癌轉(zhuǎn)移是否復(fù)發(fā)的芯片的應(yīng)用，其特征在于，所述芯片包括固相載體，以及固定在所述固相載體上的寡核苷酸探針，所述寡核苷酸探針特異性地對應(yīng)于miRNA-12124的部分或全部序列。
5.標(biāo)志物miRNA-12124在制備抑制膀胱癌轉(zhuǎn)移的藥物中的應(yīng)用，其特征在于，藥物中含有miRNA-12124抑制劑，所述miRNA-12124抑制劑能夠抑制miRNA-12124的表達或者抑制miRNA-12124的功能，從而抑制膀胱癌發(fā)生轉(zhuǎn)移和侵襲，所述miRNA-12124抑制劑的抑制靶標(biāo)不限于miRNA-12124本身，還包括miRNA-12124的上下游，包括編碼miRNA-12124的基因組序列，miRNA-12124靶基因、調(diào)控miRNA-12124的蛋白或者基因。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的標(biāo)志物miRNA-12124在制備抑制膀胱癌轉(zhuǎn)移的藥物中的應(yīng)用，其特征在于，所述miRNA-12124抑制劑選自：能降低miRNA-12124表達量的siRNA、dsRNA、shRNA、miRNA、反義核苷酸；或者能表達或形成上述降低miRNA-12124表達量的siRNA、dsRNA、shRNA、miRNA、反義核苷酸的構(gòu)建物或小分子化合物。
7.一種抑制膀胱癌轉(zhuǎn)移的藥物中，其特征在于，藥物中含有miRNA-12124抑制劑和藥物學(xué)上可以接受的載體。
...【技術(shù)特征摘要】
1.一種膀胱癌mirna標(biāo)志物，其特征在于，膀胱癌mirna標(biāo)志物為mirna-12124，所述mirna-12124在膀胱癌轉(zhuǎn)移組織中顯著過表達，其核苷酸序列如seq?id?no：1所示；所述mirna-12124選自以下至少一種mirna：mirna-12124初始mirna、mirna-12124前體mirna、成熟mirna-12124；所述mirna-12124初始mirna能在人細胞內(nèi)被剪切并表達成熟mirna-12124；所述mirna-12124前體mirna能在人細胞內(nèi)被剪切并表達成熟mirna-12124。
2.?標(biāo)志物mirna-12124在制備膀胱癌檢測試劑中的應(yīng)用，其特征在于，所述的膀胱癌檢測試劑包括加尾反轉(zhuǎn)錄試劑和qpcr反應(yīng)試劑，所述的加尾反轉(zhuǎn)錄試劑中含有核苷酸序列如seq?id?no：2所示的mirna-12124反轉(zhuǎn)錄特異引物；
3.標(biāo)志物mirna-12124在制備膀胱癌檢測試劑盒中的應(yīng)用，其特征在于，試劑盒內(nèi)含有加尾反轉(zhuǎn)錄試劑和qpcr反應(yīng)試劑，所述加尾反轉(zhuǎn)錄試劑包括：polya聚合酶、atp、dntps、反轉(zhuǎn)錄酶、mirna-12124反轉(zhuǎn)錄特異引物和無酶水，其中mirna-12124反轉(zhuǎn)錄特異引物的核苷酸序列如seq?id?no：2所示；所述qpcr反應(yīng)試劑包括：10×buffer、dntps、mgcl2、dna?taq聚合酶、無酶水、mirna-12124的正、反向引物和探針以及內(nèi)參基因的正、反向引物和探針，其中mirna-12124正向引物的核苷酸序列如seq?id?no：3所示，mirna-12124反...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：陳夢夢，張冰，朱柏揚，欒延松，張炳強，于俊梅，孫國龍，馬永超，米哈伊爾·文尼阿米諾維奇·烏格柳莫夫，
申請(專利權(quán))人：青島瑞思德醫(yī)學(xué)檢驗實驗室有限公司，
類型：發(fā)明
國別省市：
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