【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)屬于化學分析，具體涉及一種cpg1018佐劑的純度檢測方法。
技術(shù)介紹
1、cpg1018佐劑是一種全硫代修飾的、具有22個核苷酸長度的寡核苷酸，這些寡聚脫氧核苷酸單元由磷酸二酯鍵連接在一起，形成了一個線性的多聚體結(jié)構(gòu)。在cpg佐劑結(jié)構(gòu)中，寡聚脫氧核苷酸單元的順序和數(shù)量可以根據(jù)需要進行調(diào)整，以實現(xiàn)對免疫系統(tǒng)的特定調(diào)控作用。因此，cpg1018佐劑被廣泛應用于各種免疫治療方案中，如疫苗的研發(fā)、腫瘤治療和傳染病防控等領(lǐng)域。
2、cpg1018佐劑的dna骨架進行了硫代修飾，即磷酸二酯鍵中的氧被硫取代，形成硫代磷酸酯骨架。這種硫代修飾增強了佐劑的穩(wěn)定性。合成cpg1018佐劑的過程中其結(jié)構(gòu)中的磷酸骨架上的非橋氧原子被硫原子替換，這種硫代磷酸酯骨架增強了cpg1018對核酸酶的抵抗力，從而延長了其在體內(nèi)的半衰期。全硫代cpg1018相比于天然磷酸二酯鍵的核苷酸，具有更強的穩(wěn)定性和更長的體內(nèi)留存時間，這使得它們在免疫刺激方面更為有效。
3、在硫代修飾過程中，新加上的核苷酸通過亞磷酯鍵(三價磷)與cpg上的寡核苷酸鏈相連。這個亞磷酯鍵需要被氧化成穩(wěn)定的五價磷，以形成硫代磷酸酯鍵。硫代不完全會導致磷酸二酯鍵無法形成硫代磷酸酯鍵，從而產(chǎn)生磷氧(p＝o)雜質(zhì)，磷氧(p＝o)雜質(zhì)與cpg1018的性質(zhì)比較接近，常規(guī)的檢測方法難以使其與cpg1018分離。
技術(shù)實現(xiàn)思路
1、本專利技術(shù)的目的在于提供一種cpg1018佐劑的純度檢測方法，以解決檢測cpg1018佐劑時難以
2、本專利技術(shù)的目的可以通過以下技術(shù)方案實現(xiàn)：
3、一種cpg1018佐劑的純度檢測方法，檢測步驟包括：(1)溶液配制：溶液包括流動相a、流動相b、稀釋劑、空白溶液、對照品溶液、靈敏度溶液和供試品溶液；(2)設置色譜條件；(3)進行系統(tǒng)適用性測試；(4)根據(jù)系統(tǒng)適用性的接受標準判斷系統(tǒng)適用性測試是否通過；(5)系統(tǒng)適用性測試通過后進行分析及計算cpg1018佐劑的樣品純度；
4、所測cpg1018佐劑的序列為：tsgsas?cstsgs?tsgsas?ascsgs?tstscs?gsasgsastsgs?as。
5、檢測儀器采用thermo?vanquish?flex液相色譜儀或等效儀器。
6、進一步的，所述流動相a為色譜級或更高級別的乙腈、六氟異丙醇和三乙胺配制的含有3％的乙腈、0.2％的三乙胺和1.0％的六氟異丙醇的水溶液，記作3％acn+0.2％tea+1.0％hfip水溶液；
7、所述流動相b為色譜級或更高級別的乙腈、六氟異丙醇和三乙胺配制的含有12％的乙腈、0.2％的三乙胺和1.0％的六氟異丙醇的水溶液，記作12％acn+0.2％tea+1.0％hfip水溶液。
8、進一步的，用色譜級或更高級別的乙腈、六氟異丙醇和三乙胺。
9、進一步的，所述稀釋劑為超純水；
10、所述空白溶液為稀釋劑溶液，即超純水溶液。
11、進一步的，所述對照品溶液為cpg1018佐劑的標準品配制的1mg/ml的cpg1018佐劑的標準品溶液；
12、所述靈敏度溶液為cpg1018佐劑的標準品配制的0.002mg/ml的cpg1018佐劑的標準品溶液。
13、進一步的，所述供試品溶液為cpg1018佐劑的樣品配制的1mg/ml的溶液；平行配制2份，分別標記為供試品1和供試品2。
14、進一步的，設置色譜條件如下：
15、色譜柱：waters?acquitytm?premier?oligonucleotide?beh?c181.7μm,2.1×150mm，p/n：186009486；
16、波長：260nm；
17、柱溫：65-75℃；
18、流速：0.30-0.40ml/min；
19、進樣盤溫度：10℃；
20、進樣體積：5-10μl；
21、流動相a：3％acn+0.2％tea+1.0％hfip水溶液；
22、流動相b：12％acn+0.2％tea+1.0％hfip水溶液；
23、稀釋劑：超純水；
24、梯度洗脫的程序為：
25、 時間(min) 流動相a(％) 流動相b(％) 0 90 10 25 30 70 27 0 100 30 0 100 30.1 90 10 35 90 10
26、數(shù)據(jù)采集時間：35min；
27、運行時間：35min；
28、洗針溶劑：10％甲醇。
29、進一步的，系統(tǒng)適用性測試的進樣順序如下：
30、1)空白溶液：≥1針；
31、2)靈敏度溶液：1針；
32、3)對照品溶液：6針；
33、4)供試品溶液1：1針；
34、5)供試品溶液2：1針；
35、6)對照品溶液：1針。
36、進一步的，系統(tǒng)適用性的接受標準如下：
37、空白溶液譜圖接受標準：確保系統(tǒng)干凈穩(wěn)定，空白溶液的譜圖在目標峰保留時間處沒有明顯干擾的峰；若出現(xiàn)干擾峰，則干擾峰的峰面積應小于靈敏度測試溶液峰面積的一半；
38、分離度接受標準：對照品溶液中，主峰與磷氧雜質(zhì)峰的分離度≥0.5；
39、靈敏度接受標準：靈敏度溶液中主峰的信噪比s/n應≥10；
40、精密度接受標準：
41、1)連續(xù)6針對照品溶液中主峰峰面積的rsd≤2.0％；
42、2)連續(xù)6針對照品溶液中主峰保留時間的rsd≤1.0％；
43、3)所有對照品溶液中主峰峰面積的rsd≤2.0％。
本文檔來自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護點】
1.一種CpG1018佐劑的純度檢測方法，其特征在于，檢測步驟包括：(1)溶液配制：溶液包括流動相A、流動相B、稀釋劑、空白溶液、對照品溶液、靈敏度溶液和供試品溶液；(2)設置色譜條件；(3)進行系統(tǒng)適用性測試；(4)根據(jù)系統(tǒng)適用性的接受標準判斷系統(tǒng)適用性測試是否通過；(5)系統(tǒng)適用性測試通過后進行分析及計算CpG1018佐劑的樣品純度；
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種CpG1018佐劑的純度檢測方法，其特征在于，所述流動相A為含有3％的乙腈、0.2％的三乙胺和1.0％的六氟異丙醇的水溶液，記作3％ACN+0.2％TEA+1.0％HFIP水溶液；
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種CpG1018佐劑的純度檢測方法，其特征在于，所述稀釋劑為超純水；
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種CpG1018佐劑的純度檢測方法，其特征在于，所述對照品溶液為CpG1018佐劑的標準品配制的1mg/mL的CpG1018佐劑的標準品溶液；
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種CpG1018佐劑的純度檢測方法，其特征在于，所述供試品溶液為CpG1018佐劑的樣品配制的1mg/
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種CpG1018佐劑的純度檢測方法，其特征在于，設置色譜條件如下：
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種CpG1018佐劑的純度檢測方法，其特征在于，系統(tǒng)適用性測試的進樣順序如下：
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種CpG1018佐劑的純度檢測方法，其特征在于，系統(tǒng)適用性的接受標準如下：
...【技術(shù)特征摘要】
1.一種cpg1018佐劑的純度檢測方法，其特征在于，檢測步驟包括：(1)溶液配制：溶液包括流動相a、流動相b、稀釋劑、空白溶液、對照品溶液、靈敏度溶液和供試品溶液；(2)設置色譜條件；(3)進行系統(tǒng)適用性測試；(4)根據(jù)系統(tǒng)適用性的接受標準判斷系統(tǒng)適用性測試是否通過；(5)系統(tǒng)適用性測試通過后進行分析及計算cpg1018佐劑的樣品純度；
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種cpg1018佐劑的純度檢測方法，其特征在于，所述流動相a為含有3％的乙腈、0.2％的三乙胺和1.0％的六氟異丙醇的水溶液，記作3％acn+0.2％tea+1.0％hfip水溶液；
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種cpg1018佐劑的純度檢測方法，其特征在于，所述稀釋劑為超純水；<...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：雍金貴，劉奇，高恩，劉祝兵，王成，王楚橋，
申請(專利權(quán))人：安徽瑞拜藥業(yè)有限公司，
類型：發(fā)明
國別省市：
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