System.ArgumentOutOfRangeException: 索引和長度必須引用該字符串內的位置。 參數名: length 在 System.String.Substring(Int32 startIndex, Int32 length) 在 zhuanliShow.Bind() 亚洲啪AV永久无码精品放毛片,国产日产欧洲无码视频,中文字幕人成无码免费视频 
  • 

  • 
<ul id="o6k0g"></ul>
    <ul id="o6k0g"></ul>
    

    

    
    
      
    
          
          
    
            
    
                
    
                    
    
                        
    
                            
    一種高純度外泌體原料藥的制備方法技術
    
                            
    技術編號：44140499 閱讀：10 留言：0更新日期：2025-01-29 10:17
    
                        
    
                        
    
                            
                            本發明專利技術公開了一種高純度外泌體原料藥的制備方法，包括以下步驟：S1：取新鮮血漿，置于采集管中，按每5mL血漿加20μL的比例加入溶液A，輕微顛倒混勻，并放置一段時間；S2：將S1得到的溶液進行分離，取上清即為血清，取上清置于離心管中，重復離心一次，吸取上清放置備用，S3：通過注射器吸取上述離心后的血清，濾器過濾后，轉移至新的離心管備用。本發明專利技術通過strep?tag?II的羧基和適配體上的氨基脫水縮合，將streptag?II標記到適配體上，隨后通過strep?tag?II和磁珠表面的鏈霉親和素的特異性結合作用，生成外泌體捕獲工具—CD63適配體?磁珠偶聯物，相比于現有免疫磁珠法中繁瑣的三步磁珠修飾過程，耗時約10h，本發明專利技術中磁珠修飾僅需兩步，耗時約2h，過程簡單，用時短。
    
                            
                            
    


    
                            

                            
    【技術實現步驟摘要】
    
                                
    本專利技術涉及外泌體原料藥制備，具體為一種高純度外泌體原料藥的制備方法。

    技術介紹
    1、公開該
    技術介紹
    部分的信息僅僅旨在增加對本專利技術的總體背景的理解，而不必然被視為承認或以任何形式暗示該信息構成已經成為本領域一般技術人員所公知的現有技術。
    2、隨著再生醫學的發展，外泌體的應用得到越來越多關注，外泌體是由不同類型細胞分泌的圓形的細胞外膜囊泡，具有特定的脂質和蛋白質，大小在30～120nm?之間，幾乎所有哺乳動物細胞都能分泌的囊泡，它具有脂質雙分子層膜結構，呈典型的杯狀形態，通常包含蛋白質、脂質、mrna、microrna等功能分子，廣泛存在于各種體液中，如血液、唾液、尿液、腦脊液和乳汁等，外泌體參與細胞間物質交換和信息傳遞，調節免疫反應、腫瘤侵襲、細胞增殖等生物學行為，具備成為治療相關疾病的藥物載體生物原料藥的天然優勢和巨大潛力，但是，受限于外泌體所處體液環境的成分復雜性和外泌體自身的納米級尺寸尺寸，從各種體液中分離獲取高純度和功能結構完整性的外泌體仍具有很大挑戰性。
    3、目前，常用的外泌體分離提純方法有超速離心法(uc)、免疫親和法、聚合物沉淀法、納米膜過濾法、尺寸排阻色譜法等。其中超速離心法(uc)是外泌體分離提純的黃金標準，但是該方法耗時長、產量低，依賴于昂貴的精密儀器設備，同時多次的超速濃縮可能會損壞外泌體的結構完整性，不利于外泌體的下游分析應用。基于外泌體尺寸、密度、溶解度等物理特性的其它分離技術也存在產量低、純度低、耗時較長等問題。

    技術實現思路
    <p>1、本專利技術的目的在于提供一種高純度外泌體原料藥的制備方法，以解決上述
    技術介紹
    中提出的外泌體在分離提純時成本高，耗時長，同時容易破壞外泌體的形態結構和生理功能，破壞外泌體結構的完整性，不利于外泌體下游分析的問題。本專利技術提出的一種高純度外泌體原料藥的制備方法，包括以下步驟：
    2、s1：取新鮮血漿，置于采集管中，按每5ml血漿加20μl的比例加入溶液a，輕微顛倒混勻，并放置一段時間；
    3、s2：將s1得到的溶液進行分離，取上清即為血清，取上清置于離心管中，重復離心一次，吸取上清放置備用；
    4、s3：通過注射器吸取上述離心后的血清，濾器過濾后，轉移至新的離心管備用；
    5、s4：取經活化的strep-tagii蛋白純化磁珠，加入飽合偶聯用量的抗cd63，于室溫下混合一段時間；
    6、s5：將s4得到的溶液進行分離緩沖液清洗，清洗完成后，加入氨基酸進行脫水縮合；
    7、s6：將s5得到的溶液加入適量的分離緩沖液懸浮，最終形成磁珠懸浮液；
    8、s7：將s6得到的磁珠懸浮液中加入5倍s3中得到的溶液，并進行孵育；
    9、s8：孵育完成后的體系用溶液b清洗，磁力架分離磁珠，即得到吸附有外泌體的復合物；
    10、s9：將s8得到的復合物與400μl洗脫液混合，室溫震蕩，然后進行分離，取上清，即為高純度外泌體原料藥。
    11、優選的，所述s1中，溶液a為血液促凝劑，靜置時間為30min。
    12、優選的，所述s2中，分離溫度4°c、分離因素3000g、分離時間5分鐘。
    13、優選的，所述s4中，所述抗cd63抗體與所述strep-tagii蛋白純化磁珠之間的質量比為1：5。
    14、優選的，所述s5中，所述分離緩沖液為含0.1％牛血清白蛋白的磷酸緩沖鹽溶液；優選地，所述分離緩沖液事先以0.22微米濾膜過濾除菌。
    15、優選的，所述s6中，所述分離緩沖液的用量為磁珠懸液體積的50-500倍。
    16、優選的，所述s7中，孵育溫度37°c，孵育器參數為顛倒旋轉90°，傾斜5秒，5°震動持續1秒，孵育時間2小時。
    17、優選的，所述s8中，所述溶液b為磷酸緩沖鹽溶液。
    18、優選的，所述s9中，所述洗脫液為ph2.8～3.5的甘氨酸溶液，甘氨酸濃度0.1～0.2mol/l，震蕩時間30min，分離因素3000g、分離時間5分鐘。
    19、優選的，所述s1-s9中，對于每次得到的結果進行檢測、記錄并上傳至追溯系統。
    20、與現有技術相比，本專利技術的有益效果是：
    21、本專利技術通過strep?tag?ii的羧基和適配體上的氨基脫水縮合，將streptag?ii標記到適配體上，隨后通過strep?tag?ii和磁珠表面的鏈霉親和素的特異性結合作用，生成外泌體捕獲工具—cd63適配體-磁珠偶聯物，相比于現有免疫磁珠法中繁瑣的三步磁珠修飾過程，耗時約10h，本專利技術中磁珠修飾僅需兩步，耗時約2h，過程簡單，用時短；
    22、本專利技術使用的cd63適配體可以特異性識別外泌體表面的cd63特征蛋白，有效克服常規的外泌體富集技術存在的對脂蛋白等雜質共分離的缺陷，極大提升富集外泌體的純度，并且可以保證分離外泌體的完整度；
    23、本專利技術使用脫氧核糖核酸酶dnase破壞cd63適配體結構，或基于生物素溶液、strep-tag?ii與strep-tactin間的競爭性結合作用以達到無損釋放回收磁珠表面吸附外泌體的目的，外泌體的回收率可達90％以上；
    24、本專利技術使用cd63適配體代替傳統免疫磁珠法中所使用的cd63抗體。相比于cd63抗體，cd63適配體可以在體外快速批量合成、成本低廉；而且適配體不易受外部溫度、ph等環境因素的影響，性能更加穩定可靠，因此該專利技術可以大大降低外泌體分離提純操作的經濟成本，同時提高實驗結果的穩定性和可重復性；
    25、本專利技術應用生物原料藥生產質量控制體系并結合溯源系統，確保外泌體原料藥制劑生產的安全有效可控。
    本文檔來自技高網    ...
                            
    
                            
    【技術保護點】
    
                                
    1.一種高純度外泌體原料藥的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：
    2.根據權利要求1所述的一種高純度外泌體原料藥的制備方法，其特征在于：所述S1中，溶液A為血液促凝劑，靜置時間為30min。
    3.根據權利要求1所述的一種高純度外泌體原料藥的制備方法，其特征在于：所述S2中，分離溫度4°C、分離因素3000g、分離時間5分鐘。
    4.根據權利要求1所述的一種高純度外泌體原料藥的制備方法，其特征在于：所述S4中，所述抗CD63抗體與所述Strep-tagII蛋白純化磁珠之間的質量比為1：5。
    5.根據權利要求1所述的一種高純度外泌體原料藥的制備方法，其特征在于：所述S5中，所述分離緩沖液為含0.1％牛血清白蛋白的磷酸緩沖鹽溶液；優選地，所述分離緩沖液事先以0.22微米濾膜過濾除菌。
    6.根據權利要求1所述的一種高純度外泌體原料藥的制備方法，其特征在于：所述S6中，所述分離緩沖液的用量為磁珠懸液體積的50-500倍。
    7.根據權利要求1所述的一種高純度外泌體原料藥的制備方法，其特征在于：所述S7中，孵育溫度37°C，孵育器參數為顛倒旋轉90°，傾斜5秒，5°震動持續1秒，孵育時間2小時。
    8.根據權利要求1所述的一種高純度外泌體原料藥的制備方法，其特征在于：所述S8中，所述溶液B為磷酸緩沖鹽溶液。
    9.根據權利要求1所述的一種高純度外泌體原料藥的制備方法，其特征在于：所述S9中，所述洗脫液為pH2.8～3.5的甘氨酸溶液，甘氨酸濃度0.1～0.2mol/L，震蕩時間30min，分離因素3000g、分離時間5分鐘。
    10.根據權利要求1所述的一種高純度外泌體原料藥的制備方法，其特征在于：所述S1-S9中，對于每次得到的結果進行檢測、記錄并上傳至追溯系統。
    ...
                            
    
                            
    【技術特征摘要】
    
                                
    1.一種高純度外泌體原料藥的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：
    2.根據權利要求1所述的一種高純度外泌體原料藥的制備方法，其特征在于：所述s1中，溶液a為血液促凝劑，靜置時間為30min。
    3.根據權利要求1所述的一種高純度外泌體原料藥的制備方法，其特征在于：所述s2中，分離溫度4°c、分離因素3000g、分離時間5分鐘。
    4.根據權利要求1所述的一種高純度外泌體原料藥的制備方法，其特征在于：所述s4中，所述抗cd63抗體與所述strep-tagii蛋白純化磁珠之間的質量比為1：5。
    5.根據權利要求1所述的一種高純度外泌體原料藥的制備方法，其特征在于：所述s5中，所述分離緩沖液為含0.1％牛血清白蛋白的磷酸緩沖鹽溶液；優選地，所述分離緩沖液事先以0.22微米濾膜過濾除菌。
    6.根據權利要求1所述的一種高純度外泌體原...
                            
    
                            
    【專利技術屬性】
    
                                技術研發人員：花兆清，
    
        申請(專利權)人：山東宜欣醫療科技有限公司，
    
        類型：發明
    
        國別省市：
    
                            
    
                            
                        
    
                    
    
                    
                    
                     
                
    
                
                
    
                    
    
                        網友詢問留言
                        已有0條評論
                    
    
                    
    
                        
    
                            
      
                                
    • 
                                
						

      還沒有人留言評論。發表了對其他瀏覽者有用的留言會獲得科技券。
      


                              
                            
    
                            
    
                                 1 

                            
    
                        
    
                        
                        
    
                            
    
                              
                            
    
                            
                        
    
                    
    
                
    
            
    
              
             
          
    
      
    
    
    

    
    
    




  


主站蜘蛛池模板：
亚洲动漫精品无码av天堂|
精品无码国产一区二区三区AV|
人妻夜夜添夜夜无码AV|
亚洲精品无码久久久久久久|
本道久久综合无码中文字幕|
国精品无码一区二区三区左线|
亚洲VA成无码人在线观看天堂|
亚洲日韩精品无码专区加勒比
|
亚洲AV无码一区二区乱孑伦AS|
亚洲AV无码XXX麻豆艾秋|
国产亚洲精品无码成人|
免费无码午夜福利片69|
色欲AV永久无码精品无码
|
无码中文人妻视频2019|
无码专区6080yy国产电影
|
日韩精品无码区免费专区|
日韩AV高清无码|
一区二区三区无码高清视频|
亚洲中文无码av永久|
亚洲AV无码1区2区久久|
97无码人妻福利免费公开在线视频
|
亚洲成AV人片天堂网无码|
日韩专区无码人妻|
无码熟熟妇丰满人妻啪啪软件|
99国产精品无码|
色窝窝无码一区二区三区成人网站
|
久久久无码精品亚洲日韩按摩
|
无码国产精品一区二区免费式直播
|
久久久久无码精品国产不卡|
亚洲爆乳无码一区二区三区|
一本无码中文字幕在线观|
国产仑乱无码内谢|
精品无码国产自产拍在线观看蜜
|
亚洲天然素人无码专区|
白嫩少妇激情无码|
无码中文字幕乱码一区|
亚洲国产成人精品无码区花野真一|
人禽无码视频在线观看|
亚洲国产成人精品无码区在线网站
|
熟妇人妻中文a∨无码|
国产啪亚洲国产精品无码|