【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及生物醫藥領域，具體的說，涉及抑制kcnk3基因的物質及其在調控脂肪代謝或鐵死亡中的應用。
技術介紹
1、改善畜牧動物肉質的脂肪沉積、培育低脂優質新品種，一直是育種工作者的目標。多年來，利用組學技術篩選到了一些與脂肪沉積相關的基因，但在動物體內驗證的分子育種靶標只有mstn、ucp1和mc3r。畜牧動物脂肪沉積調控機制的研究不夠深入，仍缺乏具有育種價值的基因，脂肪沉積性狀主效基因的缺乏是生物育種的主要“瓶頸”。
2、鐵死亡（ferroptosis）是鐵離子依賴的程序性細胞死亡，細胞內過量的鐵會通過芬頓反應產生ros，ros可以與脂膜上的多不飽和脂肪酸（pufas）發生反應誘導脂質過氧化，引起鐵死亡。而且，鐵死亡也與神經性疾病(亨廷頓癥、阿爾茨海默癥等)、組織缺血再灌注損傷(腦、肝、腎等)、肝肺纖維化、心臟疾病、骨關節炎、肥胖及糖尿病并發癥等多種疾病的發生和發展密切相關。因此，發掘抑制鐵死亡相關通路的新靶點不僅可以降低脂肪沉積，也被認為是治療相關疾病的潛在希望和方向。
3、另外，豬器官移植對治療人類疾病具有重要意義，豬脂肪代謝和鐵死亡調控基因的發現對于研究人類肥胖和鐵死亡并發癥將具有重要的參考價值。
4、鉀離子通道亞家族成員3（kcnk3,?potassium?channel,?subfamily?k,?member3)，21kda至24kda的跨膜蛋白，參與構成細胞膜結構微囊（caveolae），其第82-101位氨基酸殘基區域稱為腳手架結構蛋白（caveolin-scaffold
技術實現思路
1、為了解決以上至少一個問題，本公開提供了抑制kcnk3基因的rna及其在調控脂肪代謝或調控鐵死亡中的應用。
2、根據本公開的一個方面，提供了一種抑制kcnk3基因的物質在調控脂肪代謝或調控鐵死亡中的應用。
3、在一些實施方式中，所述調控脂肪代謝或調控鐵死亡中的應用包括：
4、(1)?抑制kcnk3蛋白表達；
5、(2)?抑制成脂分化和/或脂肪酸合成，和/或促進脂肪水解；
6、(3)?促進細胞鐵死亡；
7、(4)?提高多不飽和脂肪酸的豐度；
8、(5)?上調總甘油三酯、脂肪酰、固醇脂、甘油酯和/或甘油磷脂；和/或下調己糖神經酰胺、單半乳糖脂甘油二酯和/或鞘脂類；
9、(6)?減少脂肪沉積；和/或促進脂質過氧化；
10、(7)?抑制谷胱甘肽代謝，和/或降低細胞內總谷胱甘肽生成，包括還原型谷胱甘肽和氧化性谷胱甘肽；
11、(8)?提高細胞ros水平；
12、(9)?制備kcnk3抑制劑；
13、(10)?制備調控脂代謝的藥物或調控鐵死亡的藥物，和/或制備預防、緩解和/或治療肥胖及其并發癥的藥物；
14、(11)?制備調控鐵死亡的藥物，和/或制備預防、緩解和/或治療與鐵死亡相關疾病的藥物；
15、(12)?制備脂代謝疾病或鐵死亡相關疾病的模式細胞；
16、(13)?制備用于構建脂代謝疾病或鐵死亡相關疾病的模式細胞的試劑盒；
17、(14)?制備脂代謝疾病或鐵死亡相關疾病的動物模型；
18、(15)?制備用于構建脂代謝疾病或鐵死亡相關疾病的動物模型的試劑盒；
19、(16)?用于畜牧動物的育種或培育。
20、在一些實施方式中，所述鐵死亡相關疾病包括但不限于神經性疾病、組織缺血再灌注損傷、肝肺纖維化、心臟疾病、骨關節炎及糖尿病等。
21、在一些實施方式中，所述神經退行性疾病包括亨廷頓癥、帕金森癥和阿爾茨海默癥中的一種或多種。
22、在一些實施方式中，所述畜牧動物包括鹿、山羊、綿羊、牛和/或豬中的一種或多種。
23、在一些實施方式中，所述抑制kcnk3基因的物質包括抑制kcnk3活性的物質、降解kcnk3的物質、降低kcnk3表達水平的物質中的至少一種。
24、在一些實施方式中，所述降低kcnk3表達水平的物質包含（a1）-（a3）中的至少一種：
25、（a1）靶向kcnk3的sirna、dsrna、mirna、核酶、sgrna或shrna；
26、（a2）表達（a1）的核酸分子；
27、（a3）包含（a2）的表達盒、載體、轉基因細胞系、或微生物。
28、在一些實施方式中，所述抑制kcnk3活性的物質包含（b1）-（b3）中的至少一種：
29、（b1）特異性結合kcnk3的抗體；
30、（b2）特異性結合kcnk3的配體蛋白或多肽；
31、（b3）特異性結合kcnk3的非蛋白類化合物。
32、在一些實施方式中，所述sirna具有如seq?id?no：3和4所示的核苷酸序列，或與其反向互補或與其具有85%序列同一性的核苷酸序列。
33、在一些實施方式中，所述sirna的3’端還修飾有2-6個dt、da、dc、dg或u組成的懸垂核苷酸。
34、在一些實施方式中，所述sgrna基于crispr/cas9進行基因敲除/敲降，且所述sgrna靶向序列具有如seq?id?no：13或14所示的核苷酸序列，或與其反向互補或與其具有85%序列同一性的核苷酸序列。
35、在一些實施方式中，所述sgrna具有如seq?id?no：15~18所示的核苷酸序列，或與其反向互補或與其具有85%序列同一性的核苷酸序列。
36、在一些實施方式中，所述抑制kcnk3基因的物質包括含有所述sgrna的載體。
37、在一些實施方式中，所述抑制kcnk3基因的物質包括敲除kcnk3基因的crispr/cas系統，所述crispr/cas系統包含所述sgrna和cas蛋白。
38、在一些實施方式中，所述cas蛋白包括cas9、cas12、cas13、cas14中的一種或多種。
39、所述應用不包括疾病的診斷和治療。
40、根據本公開的又一方面，提供了一種制備kcnk3基因表達被抑制的細胞的方法。
41、在一些實施方式中，所述方法包括使用所述sirna轉染細胞的步驟。
42、在一些實施方式中，所述方法包括使用包含編碼所述sgrna的核酸分子的載體轉染細胞的步驟。
43、在一些實施方式中，所述方法包括使用包含編碼所述sgrna的核酸分子的載體轉染細胞的步驟。
44、在一些實施方式中，使用基因編輯技術制備kcnk3基因表達被抑制的細胞本文檔來自技高網...
【技術保護點】
1.抑制KCNK3基因表達的物質在制備調控脂肪代謝或調控鐵死亡的試劑中的應用，
2.根據權利要求1所述的應用，其特征在于，所述試劑用于以下中的一項或多項用途：
3.根據權利要求2所述的應用，其特征在于，所述鐵死亡相關疾病包括神經退行性疾病、組織缺血再灌注損傷、肺纖維化，心臟疾病，骨關節炎及糖尿病中的一種或多種。
4.根據權利要求3所述的應用，其特征在于，所述神經退行性疾病包括亨廷頓癥、帕金森癥和阿爾茨海默癥中的一種或多種。
5.根據權利要求1所述的應用，其特征在于，所述抑制KCNK3基因的物質還包括以下中的至少一種：表達所述靶向KCNK3的siRNA、sgRNA的核酸分子；包含所述靶向KCNK3的siRNA、sgRNA的表達盒、載體、轉基因細胞系、或微生物。
6.根據權利要求1所述的應用，其特征在于，所述抑制KCNK3基因的物質為CRISPR/Cas系統，所述系統包括所述sgRNA和Cas9蛋白。
7.一種制備KCNK3基因表達被抑制的細胞的方法。
8.根據權利要求7所述的方法，其特征在于，所述方
9.一種由權利要求7或8所述的方法獲得的KCNK3基因被抑制的細胞。
...【技術特征摘要】
1.抑制kcnk3基因表達的物質在制備調控脂肪代謝或調控鐵死亡的試劑中的應用，
2.根據權利要求1所述的應用，其特征在于，所述試劑用于以下中的一項或多項用途：
3.根據權利要求2所述的應用，其特征在于，所述鐵死亡相關疾病包括神經退行性疾病、組織缺血再灌注損傷、肺纖維化，心臟疾病，骨關節炎及糖尿病中的一種或多種。
4.根據權利要求3所述的應用，其特征在于，所述神經退行性疾病包括亨廷頓癥、帕金森癥和阿爾茨海默癥中的一種或多種。
5.根據權利要求1所述的應用，其特征在于，所述抑制kcnk3基因的物質還包括以下中的至少一種：表達所述靶向kcnk3的sirna、sgrna的...
【專利技術屬性】
技術研發人員：張立蘭，吳森，杜旭光，高菲，余卓營，侯乃鵬，王曉哲，
申請(專利權)人：中國農業大學三亞研究院，
類型：發明
國別省市：
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