【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及化學分析方法及環境功能材料領域，具體涉及一種檢測吡咯里西啶生物堿的方法。
技術介紹
1、吡咯里西啶生物堿及其n-氧化物是全球6000多種植物產生的有毒的次級植物代謝產物，是一種天然毒素。飽和吡咯里西啶生物堿及其n-氧化物具有弱毒性和無毒性，不飽和吡咯里西啶生物堿及其n-氧化物具有肝毒性，發育毒性，遺傳毒性和致癌性。吡咯里西啶生物堿及其n-氧化物作為一種外源污染物，被發現廣泛存在于各種茶葉制品中。而茶飲料作為一種習慣性健康飲品，已成為吡咯里西啶生物堿及其n-氧化物暴露的途徑之一。對茶飲料中的吡咯里西啶生物堿及其n-氧化物含量進行準確測定是茶飲料的關鍵環節。
2、但在實際茶葉、飲料、水、蜂蜜等食品或飲料中吡咯里西啶生物堿的檢測受復雜基質及茶飲料樣品痕量濃度干擾，影響分析的靈敏度和準確性，需要對樣品進行預處理。目前常用的預處理方法是液液萃取和固相萃取。但是具有消耗大量有機溶劑、多步驟分離操作和萃取性能差的缺點。
3、國內外關于吡咯里西啶生物堿檢測方法前處理手段主要通過固相萃取法和改良quechers方法。固相萃取法利用吸附劑，如pcx-spe、scx-spe等，選擇性吸附目標化合物，將吡咯里西啶生物堿與干擾物質分離，然后采用反相洗脫作用，收集目標化合物。然而常規的吸附劑對吡咯里西啶生物堿的吸附性能有限，回收率低，導致檢測結果靈敏度低、準確性差。quechers方法存在操作復雜、耗時、成本高，靈敏度不足等缺陷。改良quechers方法利用吸附劑選擇性吸附干擾物質，利用離心手段，將干擾物質與吡咯里西啶
技術實現思路
1、為了解決現有技術問題，本專利技術提供了一種對吡咯里西啶生物堿具有吸附-解吸的磁性氧化石墨烯材料。利用磁性氧化石墨烯對吡咯里西啶生物堿的選擇性吸附作用，通過ph調節，實現吡咯里西啶生物堿的高效富集與茶葉基質有效去除的目的；利用磁性氧化石墨烯的磁鐵效應，建立操作簡單、快速的前處理技術。本專利技術大大提高了干擾物質去除效果，提升了核心材料對吡咯里西啶生物堿的富集作用，提高了吡咯里西啶生物堿檢測方法的準確度、靈敏度。
2、本專利技術采用的技術方案是：
3、一種檢測吡咯里西啶生物堿的方法，所述方法包括以下步驟：
4、(1)采用磁性氧化石墨烯對液態樣品或固態、半固態樣品的提取液進行吸附處理；
5、(2)用磁力進行固液分離，取固體沉淀加洗脫劑，對磁性氧化石墨烯上吸附的吡咯里西啶生物堿進行解吸；磁力分離，收集解吸液；
6、(3)將解吸液進行吡咯里西啶生物堿的定量檢測。
7、所述步驟(1)中，吸附處理是將固態、半固態樣品或液態樣品中的吡咯里西啶生物堿吸附到磁性氧化石墨烯上。
8、所述液態樣品是指原料為液態的樣品，如飲料等。
9、所述固態樣品，是指茶葉、含有茶葉提取物的各類固態食物樣品，半固態樣品是指蜂蜜、含有茶葉提取物的冰淇淋、粥、酸奶等半固態食物樣品。固態、半固態樣品需要經過提取得到提取液。
10、具體提取方式一般為：
11、取固態樣品或半固態樣品，粉碎或混勻后用稀硫酸提取吡咯里西啶生物堿，獲得提取液，進行步驟(1)的處理。
12、稀硫酸一般為濃度0.1～0.2m的硫酸。
13、提取次數可以為2次，合并兩次的上清液，得到提取液。
14、稀硫酸的體積一般以固態樣品或半固態樣品的質量計為10～15ml/g。
15、所述吡咯里西啶生物堿為以下中的一種或多種：天芥菜堿(heliotrine)、天芥菜堿-n-氧化物(heliotrine-n-oxide)、倒千里光堿(retrorsine)、倒千里光堿-n-氧化物(retrorsine-n-oxide)、千里光寧堿(senecionine)、千里光寧堿-n-氧化物(senecionine-n-oxide)、千里光堿(jacobine)、千里光堿-n-氧化物(jacobine-n-oxide)、促黑激素(intermedine)、促黑激素-n-氧化物(intermedine-n-oxide)、千里光菲靈堿(seneciphylline)、千里光菲靈堿-n-氧化物(seneciphylline?n-oxide)、歐天芥菜堿(europine)、歐天芥菜堿-n-氧化物(europine?n-oxide)、克氏千里光堿(senkirkine)
16、所述步驟(1)中，所述磁性氧化石墨烯采用化學共沉淀法制備得到。具體的，采用化學共沉淀法將磁性的氧化鐵納米顆粒負載在氧化石墨烯上，制得磁性氧化石墨烯。
17、優選的，所述磁性氧化石墨烯按以下方法制得：
18、三氯化鐵和氯化亞鐵加入氧化石墨烯懸浮液中，70～80℃下攪拌混勻，調節ph值為10～11，70～80℃攪拌反應，制得磁性氧化石墨烯。
19、優選的，三氯化鐵和氯化亞鐵的物質的量之比為2～3：1。
20、所述氧化石墨烯、氧化鐵的質量比為1：0.3～3，優選為1:3。
21、氧化石墨烯懸浮液的濃度優選1～10mg/ml；
22、調節ph值可用質量分數20～30％的氨水來調節ph值。
23、攪拌反應的時間優選1～2小時。
24、反應結束后，優選用磁力固液分離，取沉淀離心、洗滌干燥，制得磁性氧化石墨烯。
25、所述步驟(1)中，磁性氧化石墨烯的用量以液態樣品或固態、半固態樣品的提取液的體積計為10～50mg/10ml，優選30mg/10ml；
26、所述步驟(1)中，吸附的時間為10～60min，優選30min。吸附的溫度為室溫。
27、優選在吸附時進行振蕩。
28、所述步驟(1)中，吸附時調節ph值為3～9，優選ph值為4。調節ph值可采用磷酸、硼酸、醋酸、氫氧化鈉，或使用br緩沖液。
29、所述步驟(2)中，洗脫劑為含有體積分數0.1～5％氨水的的甲醇溶液，優選含1％氨水的甲醇溶液。
30、洗脫劑的體積以固體沉淀的質量計為0.5～4ml/30mg，優選為2ml/30mg。
31、所述步驟(2)中，優選在超聲下進行解吸，超聲時間為3～15min，優選6min。
32、所述步驟(3)中，定量檢測可采用超高效液相色譜-串聯質譜(uhplc-ms/ms)進行定量。
33、所述步驟(3)中，uhplc-ms/ms色譜條件如下：采用ac本文檔來自技高網...
【技術保護點】
1.一種檢測吡咯里西啶生物堿的方法，其特征在于所述方法包括以下步驟：
2.如權利要求1所述的方法，其特征在于固態、半固態樣品的提取液按以下方法獲得：
3.如權利要求1所述的方法，其特征在于所述吡咯里西啶生物堿為以下化合物中的一種或多種：天芥菜堿、天芥菜堿-N-氧化物、倒千里光堿、倒千里光堿-N-氧化物、千里光寧堿、千里光寧堿-N-氧化物、千里光堿、千里光堿-N-氧化物、促黑激素、促黑激素-N-氧化物、千里光菲靈堿、千里光菲靈堿-N-氧化物、歐天芥菜堿、歐天芥菜堿-N-氧化物、克氏千里光堿。
4.如權利要求1所述的方法，其特征在于所述磁性氧化石墨烯采用化學共沉淀法，將磁性的氧化鐵納米顆粒負載在氧化石墨烯上，制得磁性氧化石墨烯。
5.如權利要求4所述的方法，其特征在于所述氧化石墨烯、氧化鐵的質量比為1：0.3～3，氧化鐵由氯化鐵和氯化亞鐵反應制得。
6.如權利要求5所述的方法，其特征在于所述氧化石墨烯、氧化鐵的質量比為1：3。
7.如權利要求1所述的方法，其特征在于所述步驟(1)中，磁性氧化石墨烯的用量以液態樣品
8.如權利要求7所述的方法，其特征在于所述步驟(1)中，磁性氧化石墨烯的用量以液態樣品或固態、半固態樣品的提取液的體積計為30mg/10mL，吸附的時間為30min，吸附時調節pH值為4。
9.如權利要求1所述的方法，其特征在于所述步驟(2)中，洗脫劑為含有體積分數0.1～5％氨水的的甲醇溶液，洗脫劑的體積以固體沉淀的質量計為0.5～4mL/30mg，在超聲下進行解吸，超聲時間為3～15min。
10.如權利要求9所述的方法，其特征在于所述步驟(2)中，洗脫劑為含有體積分數1％氨水的甲醇溶液，洗脫劑的體積以固體沉淀的質量計為2mL/30mg，在超聲下進行解吸，超聲時間為6min。
...【技術特征摘要】
1.一種檢測吡咯里西啶生物堿的方法，其特征在于所述方法包括以下步驟：
2.如權利要求1所述的方法，其特征在于固態、半固態樣品的提取液按以下方法獲得：
3.如權利要求1所述的方法，其特征在于所述吡咯里西啶生物堿為以下化合物中的一種或多種：天芥菜堿、天芥菜堿-n-氧化物、倒千里光堿、倒千里光堿-n-氧化物、千里光寧堿、千里光寧堿-n-氧化物、千里光堿、千里光堿-n-氧化物、促黑激素、促黑激素-n-氧化物、千里光菲靈堿、千里光菲靈堿-n-氧化物、歐天芥菜堿、歐天芥菜堿-n-氧化物、克氏千里光堿。
4.如權利要求1所述的方法，其特征在于所述磁性氧化石墨烯采用化學共沉淀法，將磁性的氧化鐵納米顆粒負載在氧化石墨烯上，制得磁性氧化石墨烯。
5.如權利要求4所述的方法，其特征在于所述氧化石墨烯、氧化鐵的質量比為1：0.3～3，氧化鐵由氯化鐵和氯化亞鐵反應制得。
6.如權利要求5所述的方法，其特征在于所述氧化石墨烯...
【專利技術屬性】
技術研發人員：陳紅平，李世琪，李祖光，馬桂岑，郝振霞，張相春，柴云峰，王晨，
申請(專利權)人：中國農業科學院茶葉研究所，
類型：發明
國別省市：
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