【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及多肽合成，尤其涉及九肽-1的合成方法。
技術介紹
1、九肽-1是模擬α促黑激素（α-msh）設計的仿生肽，由九個氨基酸組成，可競爭性抑制α-msh與受體結合，從而阻斷黑色素信號通路的激活，從源頭上減少黑色素的生成。對比其他美白原料，九肽-1從源頭上解決了黑色素問題，達到了“治本”的目的。
2、目前，九肽-1的合成包括固相合成法或液相合成法。液相合成往往需要使用大量反應溶劑?，環境壓力大，單位損耗大，且部分反應存在一定的危險操作，不符合國家提倡的綠色環保要求。相比液相合成，固相合法成在九肽-1合成中更為常用。固相合成包括逐一合成和片段連接法，逐一合成法采用樹脂作為固相載體，將氨基酸溶解于有機溶劑中與樹脂上的活性基團反應，從而“掛”上樹脂，而沒有“掛上”樹脂的剩余氨基酸可以通過過濾去除，按照肽序順序逐步將每個氨基酸連接直至合成完成，然后將肽鏈從樹脂上裂解下來，然后通過純化、凍干獲得產品。片段連接法是先將肽鏈分成幾個片段分別合成，然后將各片段分別連接。然而，現有技術公開的有關九肽-1的固相合成法依然存在一些問題：
3、1、非均相反應效率低下,需要大量的反應原料，造成制備成本很高；
4、2、單批次產量一般只在幾十公斤左右，無法獲得規模化生產效益；
5、3、雖然溶劑使用量降低，但仍然需要大量有機溶劑的使用。
6、因此，提供一種成本低、綠色環保的九肽-1的合成方法具有重要意義。
技術實現思路
1、有鑒于此，本專利技術提供
2、為了實現上述專利技術目的，本專利技術提供以下技術方案：
3、九肽-1的合成方法，其特征在于，包括：
4、步驟1、在rink-chemmatrix樹脂上按照九肽-1?c端到n端的肽序逐一偶聯保護氨基酸，獲得肽樹脂；
5、步驟2、將所述肽樹脂裂解，純化，得到九肽-1；
6、所述保護氨基酸的n端保護基為smoc；
7、所述偶聯反應的溶劑為水。
8、本專利技術中，步驟1所述rink-chemmatrix樹脂的替代度為0.6-1.2mmol/g，具體可為0.6mmol/g、0.7mmol/g、0.8mmol/g、0.9mmol/g、1.0mmol/g、1.1mmol/g、1.2mmol/g。
9、本專利技術中，步驟1所述保護氨基酸包括smoc-val-oh，smoc-pro-oh，smoc-lys(boc)-oh，smoc-phe-oh，smoc-d-trp-oh，smoc-arg-oh，smoc-d-phe-oh，smoc-pro-oh和smoc-met-oh。
10、本專利技術中，步驟1所述偶聯保護氨基酸具體包括步驟1）~3）：
11、步驟1）、將rink-chemmatrix樹脂與待偶聯的保護氨基酸在水中混合，加入偶聯劑反應，反應結束后加入乙酰化試劑封閉；
12、步驟2）、將封閉后的反應物過濾，取濾餅洗滌、干燥，獲得偶聯氨基酸的肽樹脂；
13、步驟3）脫除所述肽樹脂的保護基smoc，重復步驟1）~2）的偶聯步驟，逐一偶聯剩余氨基酸的保護氨基酸，直至所有的氨基酸偶聯完畢。
14、進一步的，步驟1）中，合成val-rink?amide?chemmatrix時，采用的偶聯劑為edc和oxyma的組合。在本專利技術的一些具體實施例中，所述樹脂、保護氨基酸、edc和oxyma的摩爾比為6:4:4.8:4.8、6:5:6:6或6:6:7.2:7.2。
15、步驟1）中，在所述val-rink?amide?chemmatrix上逐一偶聯val以外的其他氨基酸時，采用的偶聯劑為edc和oxyma的組合。在本專利技術的一些具體實施例中，所述樹脂、保護氨基酸、edc和oxyma的摩爾比為1:2:2.4:2.4。
16、步驟1）中，所述封閉用的乙酰化試劑包括乙酸酐和吡啶。
17、步驟2）中，所述洗滌用的洗滌液為水或0.2%的triton?x溶液。進一步的，triton?x溶液的溶劑為水。
18、步驟3）中，所述smoc的脫除劑為1m的naoh水溶液或5vol%-10vol%的哌嗪水溶液。一些具體實施例中，使用1m的naoh水溶液、5vol%哌嗪水溶液或10vol%哌嗪水溶液脫除smoc。
19、按照九肽-1的肽序（h-met-pro-d-phe-arg-d-trp-phe-lys-pro-val-nh2），利用上述偶聯保護氨基酸的方法在樹脂上逐一偶聯各氨基酸，獲得h-met-pro-d-phe-arg-d-trp-phe-lys(boc)-pro-val-rink?amide?chemmatrix肽樹脂。然后使用裂解液裂解所述肽樹脂，獲得九肽-1粗品。
20、所述裂解采用的裂解液包括tfa和tis。在本專利技術的具體實施例中，所述裂解液為體積比為95:5的tfa和tis。
21、在本專利技術的一些實施方案中，在所述裂解之后，還包括將裂解后的產物中加入乙醚沉淀、離心、干燥的步驟，經過所述干燥，獲得九肽-1粗肽。一些具體實施例中，所述將裂解后的產物中加入乙醚沉淀、離心、干燥的步驟具體包括：將裂解后的產物緩慢倒入乙醚中，離心，收集沉淀；用乙醚洗滌沉淀后真空干燥，獲得九肽-1粗品。
22、將所述九肽-1粗品純化，獲得九肽-1精品。所述純化為hplc純化。在本專利技術的具體實施例一種，所述hplc純化的條件為：以反相十八烷基硅烷為固定相，以0.1%醋酸水溶液/乙腈為流動相；所述洗脫為梯度洗脫，具體洗脫程序本領域技術人員可根據實際洗脫結果確定。
23、本專利技術采用rink?amide?chemmatrix樹脂，并使用smoc對保護氨基酸的n端進行保護，提高了保護氨基酸在水中的溶解度，實現了九肽-1的水基固相合成。該反應體系避免了有機溶劑使用，采用了全水相反應，符合綠色化學要求此外，其他氨基酸的側鏈無需進行保護，如arg和trp，進一步簡化了合成步驟，大大降低了生產升本。
本文檔來自技高網...【技術保護點】
1.九肽-1的合成方法，其特征在于，包括：
2.根據權利要求1所述的合成方法，其特征在于，步驟1中，所述Rink-chemMatrix樹脂的替代度為0.6-1.0mmol/g。
3.根據權利要求1所述的合成方法，其特征在于，步驟1中，所述保護氨基酸包括Smoc-Val-OH，Smoc-Pro-OH，Smoc-Lys(Boc)-OH，Smoc-Phe-OH，Smoc-D-Trp-OH，Smoc-Arg-OH，Smoc-D-Phe-OH，Smoc-Pro-OH和Smoc-Met-OH。
4.根據權利要求1所述的合成方法，其特征在于，步驟1中，所述偶聯保護氨基酸具體包括：
5.根據權利要求4所述的合成方法，其特征在于，步驟1）中，所述偶聯劑包括EDC和oxyma，所述樹脂、保護氨基酸、EDC和oxyma的摩爾比為1：2：2.4：2.4。
6.根據權利要求4所述的合成方法，其特征在于，步驟2）中，所述洗滌用的洗滌液為水或0.2%的Triton?X溶液。
7.根據權利要求4所述的合成方法，其特征在于，步驟3）中，所述S
8.根據權利要求1~7任一項所述的合成方法，其特征在于，步驟2中，所述裂解采用的裂解液包括TFA和TIS。
9.根據權利要求1~8任一項所述的合成方法，其特征在于，步驟2中，所述純化為HPLC純化；所述HPLC純化的條件為：以反相十八烷基硅烷為固定相，以0.1%醋酸水溶液/乙腈為流動相，梯度洗脫。
10.根據權利要求1~9任一項所述的合成方法，其特征在于，步驟2中，在所述裂解之后、純化之前還包括加入乙醚沉淀、離心、干燥的步驟。
11.根據權利要求1~10任一項所述的合成方法，其特征在于，步驟2中，所述純化獲得九肽-1之后還包括對九肽-1進行轉鹽獲得的九肽-1鹽的步驟；
...【技術特征摘要】
1.九肽-1的合成方法，其特征在于，包括：
2.根據權利要求1所述的合成方法，其特征在于，步驟1中，所述rink-chemmatrix樹脂的替代度為0.6-1.0mmol/g。
3.根據權利要求1所述的合成方法，其特征在于，步驟1中，所述保護氨基酸包括smoc-val-oh，smoc-pro-oh，smoc-lys(boc)-oh，smoc-phe-oh，smoc-d-trp-oh，smoc-arg-oh，smoc-d-phe-oh，smoc-pro-oh和smoc-met-oh。
4.根據權利要求1所述的合成方法，其特征在于，步驟1中，所述偶聯保護氨基酸具體包括：
5.根據權利要求4所述的合成方法，其特征在于，步驟1）中，所述偶聯劑包括edc和oxyma，所述樹脂、保護氨基酸、edc和oxyma的摩爾比為1：2：2.4：2.4。
6.根據權利要求4所述的合成方法，其特征在于，...
【專利技術屬性】
技術研發人員：宓鵬程，潘俊鋒，劉建，
申請(專利權)人：深圳瑞德林生物技術有限公司，
類型：發明
國別省市：
還沒有人留言評論。發表了對其他瀏覽者有用的留言會獲得科技券。