【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于分子生物學領域，特別涉及一種用于菊花cvb病毒快速檢測的試劑盒和檢測方法。
技術介紹
1、菊花(chrysanthemum?morifolium)為我國傳統花卉、不僅具有觀賞價值更具備食用、藥用價值。菊花生長過程中引起重要病害的病毒病，會使菊花出現多種諸如花葉、黃葉、褪綠斑、枯斑、壞死斑以及植株矮化、畸形、不孕等嚴重影響菊花正常生長的病癥，造成產量及品質的下降。
2、菊花b病毒cvb于1952年被發現，為單鏈正義rna病毒，直桿狀，大小約685nm×12nm。病毒稀釋的終點為10-2～10-4，鈍化的溫度70℃～80℃，室溫條件下離體可存活6天。夏季植物體內的病毒濃度低。cvb除侵染菊花，還能感染包括矮牽牛、煙草、番杏、野菊、金盞菊、蠟菊等多種植物，被認為是菊花中最嚴重的病原體。該病毒主要是通過蚜蟲以非持續的方式進行傳播，也可通過汁液和插條侵染植物，但并不通過種子和土壤傳播。
3、cvb是感染菊花的優勢病毒之一，在世界各地的菊花種植區廣泛分布。感染cvb的植株會表現出花葉、黃斑、脈間失綠等癥狀，部分品種表現為植株矮化、葉片畸形、花色素異常積累以及壞死等，不同品種表型差異較大。一般情況下，感病時間越長，癥狀越明顯；但在秋季時也會出現隱退現象，花葉癥狀不明顯。。
4、目前已知的菊花cvb病毒檢測方法有：
5、1、病毒的反轉錄重組酶聚合酶等溫擴增(recombinase?polymeraseamplification，rpa)檢測方法，該方法受限于在實驗室操作，不便于在野外
技術實現思路
1、為了解決現有技術中存在的上述問題，本專利技術的專利技術人團隊調查了北京多個地區菊花病毒病的種類及分布，經過大量創新性的試驗建立了cvb病毒的手持式熒光探針基因鏡快速露地檢測的體系和方法。
2、本專利技術提供了一種菊花cvb病毒快速檢測探針和引物組，所述探針的核苷酸序列如序列表的序列7所示；所述引物組選自引物組1、引物2、引物組3中任意一組、兩組或三組；所述引物組1的上游引物如序列表的序列1所示，下游引物如序列表的序列2所示；所述引物組2的上游引物如序列表的序列3所示，下游引物如序列表的序列4所示；所述引物組1的上游引物如序列表的序列5所示，下游引物如序列表的序列6所示。
3、本專利技術提供了一種菊花cvb病毒快速檢測試劑盒，所述試劑盒中含有以上所述探針和引物組。
4、本專利技術提供了一種菊花cvb病毒快速檢測方法，所述檢測方法采用以上所述探針、引物，和試劑盒。
5、本專利技術提供了一種菊花cvb病毒快速檢測的探針、引物組、試劑盒、檢測方法在菊花cvb病毒快速檢測中的應用。
6、本專利技術通過采用酶促重組恒溫擴增技術，能在常溫條件下進行檢測，不依賴實驗室條件；采用的熒光探針和引物的特異性強、靈敏度高；采用本專利技術的試劑盒和檢測方法能夠得到與傳統的rt-pcr法和elisa法相同的檢測結果，準確性極高。
7、本專利技術在露天對田間菊花進行實驗分析，可在0.5min-19min內得到菊花植株是否攜帶cvb病毒的檢測結果。全部的檢測操作僅需要手提式病毒檢測工具包，不需要專業的實驗室內操作，就可在野外田間隨時隨地的快速檢測是否含有cvb病毒。本專利技術提供的方法檢測成本低廉、操作簡單，能在常溫下的極短時間內進行不受環境條件限制的檢測，檢測結果準確。
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1.用于菊花CVB病毒快速檢測的探針和引物組，其特征在于：
2.根據權利要求1所述的用于菊花CVB病毒快速檢測的探針和引物組，其特征在于：
3.一種菊花CVB病毒快速檢測試劑盒，其特征在于：所述試劑盒包括權利要求1或2所述的探針和引物組。
4.根據權利要求3所述的菊花CVB病毒快速檢測試劑盒，其特征在于：
5.根據權利要求4所述菊花CVB病毒快速檢測試劑盒，其特征在于：
6.根據權利要求5所述的菊花CVB病毒快速檢測試劑盒，其特征在于：
7.根據權利要求5所述的菊花CVB病毒快速檢測試劑盒，其特征在于：
8.一種菊花CVB病毒快速檢測方法，其特征在于：
9.根據權利要求8所述的菊花CVB病毒快速檢測方法，其特征在于：
10.權利要求1或2所述的探針和引物組、權利要求3-7任一項所述的試劑盒、權利要求8或9所述的檢測方法，在菊花CVB病毒快速檢測中的應用。
【技術特征摘要】
1.用于菊花cvb病毒快速檢測的探針和引物組，其特征在于：
2.根據權利要求1所述的用于菊花cvb病毒快速檢測的探針和引物組，其特征在于：
3.一種菊花cvb病毒快速檢測試劑盒，其特征在于：所述試劑盒包括權利要求1或2所述的探針和引物組。
4.根據權利要求3所述的菊花cvb病毒快速檢測試劑盒，其特征在于：
5.根據權利要求4所述菊花cvb病毒快速檢測試劑盒，其特征在于：
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【專利技術屬性】
技術研發人員：陳東亮，王麗麗，黃叢林，羅昌，高康，蘇國輝，陳菲，
申請(專利權)人：北京市農林科學院，
類型：發明
國別省市：
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