【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)涉及生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，特別是涉及一種蜱傳腦炎病毒的熒光定量檢測試劑盒及應(yīng)用。
技術(shù)介紹
1、蜱傳腦炎(tick-borne?encephalitis，tbe)又稱森林腦炎，是由蜱傳腦炎病毒(tick-borne?encephalitis?virus，tbev)引起的一種以中樞神經(jīng)系統(tǒng)為主的自然疫源性傳染病，多由蜱蟲叮咬引起，據(jù)統(tǒng)計(jì)有約1％的患者是因食用了未經(jīng)高溫滅菌的牛奶或來源于被感染動物的乳制品導(dǎo)致發(fā)病。蜱作為其傳播媒介，是一種寄居于多種脊椎動物體表的暫時性寄生蟲，大多分布在森林、草原或獸穴、鳥巢及家畜棚圈處。當(dāng)蜱吸吮受到感染的灰鼠、野鼠和刺猬等嚙齒動物的血液后，病毒就會在蜱的體內(nèi)繁殖，當(dāng)人們被帶有病毒的蜱叮咬后，往往就被感染而患病，重者在數(shù)小時內(nèi)即因昏迷、抽搐、延髓麻痹而死亡。tbev是黃病毒屬中一種毒力極強(qiáng)的嗜神經(jīng)病毒，主要侵犯人的中樞神經(jīng)系統(tǒng)，臨床上以突發(fā)高熱、腦膜刺激癥、頭痛嘔吐、感覺過敏、意識障礙及頸和肢體癱瘓為主要特征，常有后遺癥。在森林地區(qū)工作的勞動者為tbe發(fā)病的高危人群，沒有特效的抗病毒藥物，醫(yī)生只能根據(jù)患者對癥治療，因此，病毒感染的早期快速診斷對病人疾病的治療、康復(fù)、預(yù)后極其重要。
2、目前，用于蜱傳腦炎診斷的方法主要有病原學(xué)診斷、血液/腦脊液檢驗(yàn)以及免疫學(xué)診斷等。病原學(xué)診斷以病毒分離為主，是最基礎(chǔ)和最可靠的檢測方法，但是培養(yǎng)要求高，易受外來病原微生物污染，且培養(yǎng)時間長。由于早期血象變化不明顯且難以與其他腦炎進(jìn)行區(qū)分，因此血液/腦脊液檢驗(yàn)不能用于診斷。免疫學(xué)診斷主要有補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)(cft)
3、相比上述方法，tbe的核酸診斷理論上是最佳的診斷方法，它既可有效地確診蜱傳腦炎患者又可對環(huán)境中的感染因素包括蜱蟲、疫奶中是否含有tbev做出判定，因此，亟需提供一種特異性高、靈敏性好的熒光定量檢測試劑盒。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
1、本專利技術(shù)的目的是提供一種蜱傳腦炎病毒的熒光定量檢測試劑盒及應(yīng)用，以解決上述現(xiàn)有技術(shù)存在的問題，本專利技術(shù)設(shè)計(jì)得到了用于蜱傳腦炎病毒檢測的引物組，并構(gòu)建了高靈敏度、高特異性的檢測試劑盒。
2、為實(shí)現(xiàn)上述目的，本專利技術(shù)提供了如下方案：
3、本專利技術(shù)提供了一種用于蜱傳腦炎病毒檢測的引物組，包括核苷酸序列如seq?idno.1所示的上游引物tbev-f和核苷酸序列如seq?id?no.2所示的下游引物tbev-r。
4、本專利技術(shù)提供了所述的引物組在制備用于蜱傳腦炎病毒檢測的產(chǎn)品中的應(yīng)用。
5、優(yōu)選的是，所述產(chǎn)品包括熒光定量檢測試劑盒。
6、本專利技術(shù)還提供了一種蜱傳腦炎病毒的熒光定量檢測試劑盒，包括所述的引物組。
7、優(yōu)選的是，還包括rna提取試劑、反轉(zhuǎn)錄酶和sybr?greenⅰ熒光定量pcr反應(yīng)預(yù)混液。
8、更優(yōu)選的是，所述rna提取試劑包括蛋白酶k和rna載體；所述反轉(zhuǎn)錄酶為primescript?rt?enzyme?mix。
9、本專利技術(shù)還提供了所述的引物組或所述的試劑盒在非疾病診斷和/或治療的目的的蜱傳腦炎病毒檢測中的應(yīng)用。
10、本專利技術(shù)還提供了一種非疾病診斷和/或治療的目的的檢測蜱傳腦炎病毒的方法，包括使用所述的試劑盒進(jìn)行熒光定量rt-pcr反應(yīng)的步驟。
11、優(yōu)選的是，具體包括以下步驟：
12、提取待測樣品的總rna；
13、以所述總rna為模版，進(jìn)行sybr?greenⅰ熒光定量rt-pcr反應(yīng)；
14、根據(jù)所述sybr?greenⅰ熒光定量rt-pcr反應(yīng)的結(jié)果判斷樣品是否含有蜱傳腦炎病毒。
15、更優(yōu)選的是，所述sybr?greenⅰ熒光定量rt-pcr反應(yīng)的反應(yīng)程序?yàn)椋?2℃反轉(zhuǎn)錄5min；95℃預(yù)變性5min；95℃變性5s，60℃退火30s，40個循環(huán)；擴(kuò)增后進(jìn)行95℃15s，60℃1min，95℃15s的熔解過程。
16、本專利技術(shù)公開了以下技術(shù)效果：
17、本專利技術(shù)提供了一種用于蜱傳腦炎病毒檢測的引物組和熒光定量檢測試劑盒。本專利技術(shù)提供的熒光定量檢測試劑盒使用sybr染料法結(jié)合特異性引物組，可以快速、高效地判斷待測樣品中是否含有蜱傳腦炎病毒，具備高特異性和高靈敏度，且重復(fù)性穩(wěn)定，可以用于蜱傳腦炎病毒的檢測和防控，具有廣闊的應(yīng)用前景。
本文檔來自技高網(wǎng)...【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
1.一種用于蜱傳腦炎病毒檢測的引物組，其特征在于，包括核苷酸序列如SEQ?ID?NO.1所示的上游引物TBEV-F和核苷酸序列如SEQ?ID?NO.2所示的下游引物TBEV-R。
2.如權(quán)利要求1所述的引物組在制備用于蜱傳腦炎病毒檢測的產(chǎn)品中的應(yīng)用。
3.如權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于，所述產(chǎn)品包括熒光定量檢測試劑盒。
4.一種蜱傳腦炎病毒的熒光定量檢測試劑盒，其特征在于，包括權(quán)利要求1所述的引物組。
5.如權(quán)利要求4所述的試劑盒，其特征在于，還包括RNA提取試劑、反轉(zhuǎn)錄酶和SYBRGreenⅠ熒光定量PCR反應(yīng)預(yù)混液。
6.如權(quán)利要求5所述的試劑盒，其特征在于，所述RNA提取試劑包括蛋白酶K和RNA載體；所述反轉(zhuǎn)錄酶為Prime?script?RT?enzyme?Mix。
7.如權(quán)利要求1所述的引物組或權(quán)利要求4-6任一項(xiàng)所述的試劑盒在非疾病診斷和/或治療的目的的蜱傳腦炎病毒檢測中的應(yīng)用。
8.一種非疾病診斷和/或治療的目的的檢測蜱傳腦炎病毒的方法，其特征在于，包括使用權(quán)利要求4-6任一項(xiàng)所
9.如權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于，具體包括以下步驟：
10.如權(quán)利要求9所述的方法，其特征在于，所述SYBR?GreenⅠ熒光定量RT-PCR反應(yīng)的反應(yīng)程序?yàn)椋?2℃反轉(zhuǎn)錄5min；95℃預(yù)變性5min；95℃變性5s，60℃退火30s，40個循環(huán)；擴(kuò)增后進(jìn)行95℃15s，60℃1min，95℃15s的熔解過程。
...【技術(shù)特征摘要】
1.一種用于蜱傳腦炎病毒檢測的引物組，其特征在于，包括核苷酸序列如seq?id?no.1所示的上游引物tbev-f和核苷酸序列如seq?id?no.2所示的下游引物tbev-r。
2.如權(quán)利要求1所述的引物組在制備用于蜱傳腦炎病毒檢測的產(chǎn)品中的應(yīng)用。
3.如權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于，所述產(chǎn)品包括熒光定量檢測試劑盒。
4.一種蜱傳腦炎病毒的熒光定量檢測試劑盒，其特征在于，包括權(quán)利要求1所述的引物組。
5.如權(quán)利要求4所述的試劑盒，其特征在于，還包括rna提取試劑、反轉(zhuǎn)錄酶和sybrgreenⅰ熒光定量pcr反應(yīng)預(yù)混液。
6.如權(quán)利要求5所述的試劑盒，其特征在于，所述rna提取試劑包括蛋白酶k和rna載體；所述反轉(zhuǎn)錄酶為p...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：于晶峰，
申請(專利權(quán))人：內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)，
類型：發(fā)明
國別省市：
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