【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)屬于病毒防治，具體涉及一種豬繁殖與呼吸綜合征病毒減毒株、鑒定試劑盒及其制備方法和應(yīng)用。
技術(shù)介紹
1、豬繁殖與呼吸綜合征(porcine?reproductive?and?respiratory?syndrome,prrs)是一種嚴(yán)重危害世界養(yǎng)豬業(yè)的病毒性傳染病，俗稱“豬藍(lán)耳病”，該病以妊娠母豬繁殖障礙和仔豬呼吸道癥狀為主要特征。豬繁殖與呼吸綜合征病毒歸為尼多病毒目(nidovirales)、動(dòng)脈炎病毒科(arteriviridae)、betaarterivirus屬成員，進(jìn)一步分為betaarterivirus?suid?1(原歐洲型)和betaarterivirus?suid?2(原北美洲型)。prrsv是一種單股正鏈rna病毒，基因組長約15kb，5’非編碼區(qū)上游為帽子結(jié)構(gòu)，3’非編碼區(qū)下游為poly(a)尾，其基因組編碼了至少11個(gè)開放閱讀框(open?reading?frames，orfs)：orf1a、orf1b、orf2a、orf2b、orf3-7、orf5a以及nsp2(tf)。orf1占病毒基因組的比例最大(約80％)，其編碼復(fù)制酶復(fù)合體，通過核糖體移碼機(jī)制翻譯產(chǎn)生多聚蛋白(poly-protein)pp1a和pp1ab，由orf1a編碼的3種蛋白酶切割產(chǎn)生至少16種非結(jié)構(gòu)蛋白(nonstructuralprotein，nsp)，其中nsp2變異程度最大。1987年，該病首先在美國豬中發(fā)現(xiàn)，隨后在全世界范圍內(nèi)傳播。1996年，郭寶清等首次在國內(nèi)分離到prrsv。自此，prrsv在我國流行，并不斷發(fā)生變
2、疫苗免疫是防控prrs的有效手段。國內(nèi)prrsv的商品化疫苗主要包括滅活苗、減毒活疫苗和基因工程苗，主要針對(duì)經(jīng)典株和hp-prrsv。這些疫苗對(duì)預(yù)防prrsv起到了積極的作用，但隨著病毒不斷發(fā)生變異，現(xiàn)有商品化的疫苗株不能對(duì)類nadc30?prrsv提供完全免疫保護(hù)，因此需要研發(fā)更加有效的疫苗株。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
1、本專利技術(shù)的目的是為了提供一種豬繁殖與呼吸綜合征病毒重組減毒疫苗株，且該疫苗株能有效區(qū)分野毒株感染與疫苗株免疫。
2、本專利技術(shù)提供一種動(dòng)脈炎病毒(arterivirus)豬繁殖與呼吸綜合征病毒(porcinereproductive?and?respiratory?syndrome?virus,prrsv)的減毒株h18-r，保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏號(hào)為cgmcc?no.46203，保藏日期為2024年10月17日。
3、本專利技術(shù)提供一種豬繁殖與呼吸綜合征病毒的疫苗，所述疫苗包括權(quán)利要求1所述的豬繁殖與呼吸綜合征病毒的減毒株h18-r。
4、進(jìn)一步地限定，所述疫苗還包括藥用載體或藥學(xué)上可接受的輔料。
5、本專利技術(shù)提供一種上述的豬繁殖與呼吸綜合征病毒的減毒株h18-r在制備預(yù)防豬藍(lán)耳病的疫苗或藥物中的應(yīng)用。
6、本專利技術(shù)提供一種檢測(cè)豬繁殖與呼吸綜合征病毒和鑒別區(qū)分豬繁殖與呼吸綜合征病毒減毒株h18-r的elisa檢測(cè)試劑盒，所述試劑盒含有上述的豬繁殖與呼吸綜合征病毒減毒株h18-r的特征性缺失蛋白，該蛋白的氨基酸序列seq?id?no.2。
7、進(jìn)一步地限定，所示試劑盒包括第一抗體和第二抗體，所述第一抗體包括prrs陽性血清，第二抗體為hrp標(biāo)記的山羊抗豬igg(h+l)。
8、本專利技術(shù)提供一種上述的豬繁殖與呼吸綜合征病毒的減毒株h18-r、氨基酸序列如seq?id?no.2所示的蛋白、攜帶seq?id?no.2所示的蛋白的微生物細(xì)胞、編碼seq?id?no.2所示的蛋白的編碼基因seq?id?no.2、含有編碼基因seq?id?no.1的重組載體在制備豬繁殖與呼吸綜合征病毒的診斷和檢測(cè)試劑盒中的應(yīng)用。
9、本專利技術(shù)提供一種繁殖與呼吸綜合征病毒的抗原肽，所述抗原肽的氨基酸序列如seq?id?no.2所示。
10、本專利技術(shù)提供一種編碼上述的抗原肽的核苷酸。
11、本專利技術(shù)提供一種含有上述的核苷酸的重組載體或重組微生物細(xì)胞在制備檢測(cè)豬繁殖與呼吸綜合征病毒和鑒別區(qū)分豬繁殖與呼吸綜合征病毒減毒株h18-r的elisa檢測(cè)試劑盒中的有應(yīng)用。
12、有益效果：在本專利技術(shù)的一個(gè)方面，提供了一種豬繁殖與呼吸綜合征重組減毒疫苗株，所述重組減毒疫苗株的親本毒株為一株自然重組的豬繁殖與呼吸綜合征病毒，其具有抗原功能的結(jié)構(gòu)蛋白分別來自譜系1和譜系8毒株，經(jīng)人工連續(xù)傳代馴化成為弱毒疫苗株h18-r。該h18-r疫苗免疫后對(duì)豬安全、無致病力，并且能有效誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生免疫應(yīng)答，抵抗豬繁殖與呼吸綜合征病毒的攻擊，為免疫豬提供良好的保護(hù)。
13、在本專利技術(shù)的另一面，還提供了一種區(qū)分上述豬繁殖與呼吸綜合征重組減毒疫苗株與自然感染野毒株的血清學(xué)鑒別診斷方法。以往的弱毒疫苗株接種豬，很難鑒別診斷疫苗免疫豬和野毒自然感染豬。因此，建立一種血清學(xué)或病原學(xué)上能夠區(qū)分疫苗株免疫豬和野毒株感染豬的鑒別診斷方法至關(guān)重要。本專利技術(shù)根據(jù)減毒疫苗株h18-r?nsp2獨(dú)特的缺失特征，原核表達(dá)nsp2蛋白缺失的169個(gè)氨基酸作為包被抗原，建立了elisa抗體檢測(cè)方法，該方法對(duì)h18-r株免疫豬血清的檢測(cè)結(jié)果為陰性，對(duì)親本株感染豬血清、prrsv野毒株感染豬血清和商品化prrs疫苗免疫豬陽性血清的檢測(cè)結(jié)果為陽性，與其它病原(asfv、csfv、prv、pedv、ppv和pcv-2)陽性血清無交叉反應(yīng)。該elisa方法具有良好的特異性和敏感性，能有效區(qū)分野毒株自然感染與疫苗株免疫豬只，滿足臨床上對(duì)疫苗免疫毒株與自然野毒株的鑒別診斷需要。
14、【生物保藏信息】：一種豬繁殖與呼吸綜合征病毒(porcine?reproductive?andrespiratory?syndrome?virus,prrsv)的減毒株h18-r，所述豬繁殖與呼吸綜合征病毒的減毒株h18-r，分類命名動(dòng)脈炎病毒(arterivirus)，保藏號(hào)為cgmcc?no.46203，保藏日期為2024年10月17日中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏地址：北京市朝陽區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào)中國科學(xué)院微生物研究所。
本文檔來自技高網(wǎng)...【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
1.一種動(dòng)脈炎病毒(Arterivirus)豬繁殖與呼吸綜合征病毒(porcine?reproductiveand?respiratory?syndrome?virus)的減毒株H18-R，其特征在于，保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏號(hào)為CGMCC?NO.46203，保藏日期為2024年10月17日。
2.一種豬繁殖與呼吸綜合征病毒的疫苗，其特征在于，所述疫苗包括權(quán)利要求1所述的豬繁殖與呼吸綜合征病毒的減毒株H18-R。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的疫苗，其特征在于，所述疫苗還包括藥用載體或藥學(xué)上可接受的輔料。
4.權(quán)利要求1所述的豬繁殖與呼吸綜合征病毒的減毒株H18-R在制備預(yù)防豬藍(lán)耳病的疫苗或藥物中的應(yīng)用。
5.一種檢測(cè)豬繁殖與呼吸綜合征病毒和鑒別區(qū)分豬繁殖與呼吸綜合征病毒減毒株H18-R的ELISA檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述試劑盒含有氨基酸序列如SEQ?ID?NO.2所示的蛋白。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的ELISA檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所示試劑盒包括第一抗體和第二抗體，所述第一抗體包括PRRS
7.權(quán)利要求1所述的豬繁殖與呼吸綜合征病毒的減毒株H18-R、氨基酸序列如SEQ?IDNO.2所示的蛋白、攜帶SEQ?ID?NO.2所示的蛋白的微生物細(xì)胞、編碼SEQ?ID?NO.2所示的蛋白的編碼基因SEQ?ID?NO.1、含有編碼基因SEQ?ID?NO.1的重組載體在制備豬繁殖與呼吸綜合征病毒的診斷和檢測(cè)試劑盒中的應(yīng)用。
8.一種繁殖與呼吸綜合征病毒的抗原肽，其特征在于，所述抗原肽的氨基酸序列如SEQID?NO.2所示。
9.編碼權(quán)利要求8所述的抗原肽的核苷酸。
10.含有權(quán)利要求9所述的核苷酸的重組載體或重組微生物細(xì)胞在制備檢測(cè)豬繁殖與呼吸綜合征病毒和鑒別區(qū)分豬繁殖與呼吸綜合征病毒減毒株H18-R的ELISA檢測(cè)試劑盒中的應(yīng)用。
...【技術(shù)特征摘要】
1.一種動(dòng)脈炎病毒(arterivirus)豬繁殖與呼吸綜合征病毒(porcine?reproductiveand?respiratory?syndrome?virus)的減毒株h18-r，其特征在于，保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏號(hào)為cgmcc?no.46203，保藏日期為2024年10月17日。
2.一種豬繁殖與呼吸綜合征病毒的疫苗，其特征在于，所述疫苗包括權(quán)利要求1所述的豬繁殖與呼吸綜合征病毒的減毒株h18-r。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的疫苗，其特征在于，所述疫苗還包括藥用載體或藥學(xué)上可接受的輔料。
4.權(quán)利要求1所述的豬繁殖與呼吸綜合征病毒的減毒株h18-r在制備預(yù)防豬藍(lán)耳病的疫苗或藥物中的應(yīng)用。
5.一種檢測(cè)豬繁殖與呼吸綜合征病毒和鑒別區(qū)分豬繁殖與呼吸綜合征病毒減毒株h18-r的elisa檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述試劑盒含有氨基酸序列如seq?id?no.2所示的蛋白。
...【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：安同慶，黃昕怡，楊勇博，孟凡丹，王海偉，
申請(qǐng)(專利權(quán))人：中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所中國動(dòng)物衛(wèi)生與流行病學(xué)中心哈爾濱分中心，
類型：發(fā)明
國別省市：
還沒有人留言評(píng)論。發(fā)表了對(duì)其他瀏覽者有用的留言會(huì)獲得科技券。