【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)屬于植物遺傳轉(zhuǎn)化，具體涉及用于遺傳轉(zhuǎn)化的愈傷組織誘導培養(yǎng)基、培養(yǎng)基組合和遺傳轉(zhuǎn)化方法。
技術(shù)介紹
1、植物遺傳轉(zhuǎn)化技術(shù)是現(xiàn)代生物技術(shù)中的重要技術(shù)，可將外源基因?qū)胫参锘蚪M，改善作物農(nóng)藝性狀或生產(chǎn)藥用蛋白等。然而，現(xiàn)有的轉(zhuǎn)化方法存在轉(zhuǎn)化率低、操作復雜、周期長等問題。之前的轉(zhuǎn)化方法都是日本煙草公司的專利，其在fielder中轉(zhuǎn)化效率為50％左右(hanane?aadel,sripada?m.udupa,rabha?abdelwahd,et?al.agrobacterium-mediated?genetic?transformation?of?bread?wheat(triticum?aestivum?l.)usingimmature?embryos.romanian?agricultural?research.2021；38(0):99-107..)，2023年中國農(nóng)科院作科所葉興國團隊利用tawox5顯著提高小麥遺傳轉(zhuǎn)化效率，易轉(zhuǎn)化品種fielder等的轉(zhuǎn)化效率達75-96％(ke?wang,lei?shi,xiaona?liang,et?al.the?gene?tawox5overcomes?genotype?dependency?in?wheat?genetic?transformation.natureplants.2022；8(2):110-117.)，上述品種雖然在實驗室條件下易于轉(zhuǎn)化，但并不是生產(chǎn)中大面積推廣的品種，其轉(zhuǎn)化結(jié)果在實際農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中的應用價值和說服力不足。
2、而且，以往的小麥胚性愈傷
技術(shù)實現(xiàn)思路
1、本專利技術(shù)提供了用于遺傳轉(zhuǎn)化的愈傷組織誘導培養(yǎng)基、培養(yǎng)基組合和遺傳轉(zhuǎn)化方法，通過優(yōu)化培養(yǎng)基配方和轉(zhuǎn)化條件，顯著提高了誘導效率、再生效率、轉(zhuǎn)化效率和植株再生能力，對植物生物
的研究和應用具有重要意義。
2、本專利技術(shù)首先提供用于遺傳轉(zhuǎn)化的愈傷組織誘導培養(yǎng)基，每1l所述愈傷組織誘導培養(yǎng)基由以下組分制成：
3、胰蛋白酮5-8g、酵母5-8g、氯化鈉100-120mg、谷氨酸0.8-1g、磷酸二氫鉀250-300mg、硫酸鎂100-150mg、生物素0.8-1μg、甘露醇10-20g，水補足至1l。
4、愈傷組織在組織培養(yǎng)過程中常常出現(xiàn)褐化現(xiàn)象，而愈傷組織褐化會嚴重影響其質(zhì)量，極大地降低遺傳轉(zhuǎn)化效率。若能有效抑制愈傷組織的褐化，便可以顯著提高小麥幼胚愈傷的遺傳轉(zhuǎn)化效率。前人已有研究報道稱，甘露醇作為滲透壓調(diào)節(jié)劑，在組織培養(yǎng)中具備抑制愈傷組織褐化的作用。為明確甘露醇在小麥愈傷組織誘導培養(yǎng)中的具體作用，我們在基礎(chǔ)誘導培養(yǎng)基中添加不同濃度的甘露醇，進而觀察幼胚愈傷組織的誘導率，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，小麥胚性愈傷組織誘導率在0-25g/l的甘露醇濃度范圍內(nèi)先上升后下降，10-20g/l時誘導率水平較高，尤其是在15g/l時，誘導率達到73％，可為提高小麥遺傳轉(zhuǎn)化效率奠定基礎(chǔ)。
5、其次，本專利技術(shù)提供一種用于遺傳轉(zhuǎn)化的培養(yǎng)基組合，包括所述的愈傷組織誘導培養(yǎng)基，還包括恢復培養(yǎng)基、篩選培養(yǎng)基、分化培養(yǎng)基和生根培養(yǎng)基。
6、更進一步的，每1l所述恢復培養(yǎng)基由等體積的混合溶液a和瓊脂糖混合而成；
7、每1l所述混合溶液a組成為：
8、ms10-12g、水解酪蛋白2-3g、麥芽糖55-65g、100×bci?vitamins?20-22ml、濃度為5mm的cuso4·5h2o?1.8-2.2ml、濃度為160mg/ml的timentin?1.8-2.2ml、濃度為2.5mg/ml的2,4-d?0.3-0.5ml，水補足至1l。
9、更進一步的，每1l所述篩選培養(yǎng)基由等體積的混合溶液b和瓊脂糖混合而成：
10、每1l所述混合溶液b組成為：
11、ms10-12g、水解酪蛋白2-3g、麥芽糖55-65g、100×bci?vitamins?20-22ml、濃度為5mm的cuso4·5h2o?1.8-2.2ml、濃度為160mg/ml的timentin?1.8-2.2ml、濃度為2.5mg/ml的2,4-d?0.3-0.5ml、濃度為l00mg/ml的潮霉素0.3-0.5ml，水補足至1l。
12、更進一步的，每1l所述分化培養(yǎng)基由等體積的混合溶液c和瓊脂糖混合而成：
13、每1l所述混合溶液c組成為：
14、ms10-12g、mes2-3g、葡萄糖20-22g、濃度為100mm的as1.8-2.2ml、濃度為5mm的agno3硝酸銀1.8-2.2ml、濃度為5mm的cuso4·5h2o
15、1.8-2.2ml、濃度為2mg/ml的6-ba?0.3-0.5ml、濃度為2mg/ml的tdz噻苯隆0.8-1ml、kinetin?0.8-1mg、naa?0.8-1mg、濃度為160mg/ml的timentin?0.8-1ml，水補足至1l。
16、更進一步的，每1l所述生根培養(yǎng)基由等體積的混合溶液d和瓊脂糖混合而成：
17、每1l所述混合溶液d組成為：
18、ms10-12g、水解酪蛋白2-3g、麥芽糖55-65g、100×bci?vitamins?20-22ml、濃度為5mm的cuso4·5h2o?1.8-2.2ml、濃度為160mg/ml的timentin?1.8-2.2ml、濃度為2.5mg/ml的2,4-d?0.3-0.5ml、濃度為2mg/ml的6-ba?0.4ml，水補足至1l。
19、再次，本專利技術(shù)提供上述的培養(yǎng)基組合在植物遺傳轉(zhuǎn)化中的應用。
20、進一步的，所述植物包括小麥。
21、更進一步的，所述小麥為鄭麥7698。
22、最后，本專利技術(shù)提供一種小麥遺傳轉(zhuǎn)化方法，采用上述的培養(yǎng)基組合進行，所述方法包括如下步驟：
23、s1、對農(nóng)桿菌進行預培養(yǎng)和活化處理；
24、s2、對小麥籽粒剝胚、消毒，與活化后的農(nóng)桿菌于愈傷組織誘導培養(yǎng)基中共培養(yǎng)2-3天，得到侵染的胚；
25、s3、切除胚軸并轉(zhuǎn)移到恢復培養(yǎng)基上，傷口面接觸培養(yǎng)基，在24-26℃下暗培養(yǎng)6-7天；
26、s4、將材料轉(zhuǎn)移到篩選培養(yǎng)基上，傷口面接觸培養(yǎng)基，24-26℃暗培養(yǎng)14-15天，然后轉(zhuǎn)入到新的篩選培養(yǎng)基上，同樣條件下培養(yǎng)14-15天；
27、s5、將篩選培養(yǎng)基更換為分化培養(yǎng)基，并轉(zhuǎn)移到光照條件下培養(yǎng)；
28、s6、s5的材料開始產(chǎn)生綠簇時，轉(zhuǎn)移到生根培養(yǎng)基上，在24-26℃光照條件下培養(yǎng)直到根系發(fā)育和再生芽出現(xiàn)；
29、s7、生根馴化。
30、與現(xiàn)有技術(shù)相比，本專利技術(shù)具有以下有益效果：
31、1.培養(yǎng)基配方的優(yōu)化：在已有報道的培養(yǎng)基基礎(chǔ)上，本專利技術(shù)通過加入特定的配方，如甘露醇和zeatin(一種細胞分裂素)等多種營養(yǎng)素，顯著提高了鄭麥本文檔來自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護點】
1.用于遺傳轉(zhuǎn)化的愈傷組織誘導培養(yǎng)基，其特征在于，每1L所述愈傷組織誘導培養(yǎng)基由以下組分制成：
2.一種用于遺傳轉(zhuǎn)化的培養(yǎng)基組合，其特征在于，包括權(quán)利要求1所述的愈傷組織誘導培養(yǎng)基，還包括恢復培養(yǎng)基、篩選培養(yǎng)基、愈傷組織分化培養(yǎng)基和生根培養(yǎng)基。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的培養(yǎng)基組合，其特征在于，每1L所述恢復培養(yǎng)基由等體積的混合溶液A和瓊脂糖混合而成；
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的培養(yǎng)基組合，其特征在于，每1L所述篩選培養(yǎng)基由等體積的混合溶液B和瓊脂糖混合而成：
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的培養(yǎng)基組合，其特征在于，每1L所述分化培養(yǎng)基由等體積的混合溶液C和瓊脂糖混合而成：
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的培養(yǎng)基組合，其特征在于，每1L所述生根培養(yǎng)基由等體積的混合溶液D和瓊脂糖混合而成：
7.權(quán)利要求2-6任一項所述的培養(yǎng)基組合在植物遺傳轉(zhuǎn)化中的應用。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的應用，其特征在于，所述植物包括小麥。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的應用，其特征在于，所述小麥為鄭麥7698。
10.一種小
...【技術(shù)特征摘要】
1.用于遺傳轉(zhuǎn)化的愈傷組織誘導培養(yǎng)基，其特征在于，每1l所述愈傷組織誘導培養(yǎng)基由以下組分制成：
2.一種用于遺傳轉(zhuǎn)化的培養(yǎng)基組合，其特征在于，包括權(quán)利要求1所述的愈傷組織誘導培養(yǎng)基，還包括恢復培養(yǎng)基、篩選培養(yǎng)基、愈傷組織分化培養(yǎng)基和生根培養(yǎng)基。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的培養(yǎng)基組合，其特征在于，每1l所述恢復培養(yǎng)基由等體積的混合溶液a和瓊脂糖混合而成；
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的培養(yǎng)基組合，其特征在于，每1l所述篩選培養(yǎng)基由等體積的混合溶液b和瓊脂糖混合而成：
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的培養(yǎng)基組合，...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：高新，時佳，王立紅，張躍強，李劍峰，王重，張宏芝，王春生，夏建強，趙準，王振龍，韓俊杰，王宇凡，
申請(專利權(quán))人：新疆農(nóng)業(yè)科學院核技術(shù)生物技術(shù)研究所新疆維吾爾自治區(qū)生物技術(shù)研究中心，
類型：發(fā)明
國別省市：
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