【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)屬于生物醫(yī)藥，具體涉及一種前列腺癌類器官培養(yǎng)基及其制備方法、前列腺癌類器官及其培養(yǎng)方法。
技術(shù)介紹
1、前列腺癌(prostate?cancer，pca)是一種由前列腺上皮細(xì)胞惡性增殖而導(dǎo)致的惡性腫瘤，是常見的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率和死亡率分別位于全球男性惡性腫瘤的第二位和第五位。臨床診斷時，前列腺癌的惡性程度與患者的治療效果密切相關(guān)。由于早期前列腺癌多無明顯癥狀，因而臨床診斷的前列腺癌以晚期居多，導(dǎo)致前列腺癌的治療效果及預(yù)后較差。
2、腫瘤類器官(organoids)是一種來源于患者腫瘤組織，可在體外實(shí)現(xiàn)三維(3d)培養(yǎng)的細(xì)胞培養(yǎng)物。腫瘤類器官保存了腫瘤的異質(zhì)性、組織特性及基因突變信息，可以在體外模擬癌癥發(fā)生、發(fā)展的過程，構(gòu)建疾病模型，進(jìn)行快速準(zhǔn)確的癌癥藥物篩選，有效補(bǔ)充現(xiàn)有動物和二維(2d)細(xì)胞培養(yǎng)模型的不足，為腫瘤藥物快速有效研發(fā)提供了新的技術(shù)平臺。
3、zhang等人(zhang?z?d,karthaus?w?r,lee?y?s,et?al.tumormicroenvironment-derived?nrg1?promotes?antiandrogen?resistance?in?prostatecancer[j].cancer?cell,2020,38(2):279-96.)證明了前列腺腫瘤細(xì)胞附近的成纖維細(xì)胞可以通過分泌nrg1來活化腫瘤細(xì)胞的her3信號通路，進(jìn)而影響細(xì)胞對雄激素的響應(yīng)。
4、中國專利技術(shù)專利公開號cn116286654a公開了一種前列腺癌類器官、培養(yǎng)基
5、中國另一專利技術(shù)專利公開號cn114958756a公開了一種用于前列腺癌類器官培養(yǎng)的培養(yǎng)液及其制備方法，培養(yǎng)液的各組分包括dmem/f12培養(yǎng)基、青霉素-鏈霉素、b27、dht、prostaglandin?e2、fgf2、a8301、r-spondin、noggin和基于功能核酸的hgf模擬物，該專利技術(shù)采用上述的一種用于前列腺癌類器官培養(yǎng)的培養(yǎng)液及其制備方法，可提高類器官形成的速率，但培養(yǎng)的前列腺癌類器官尺寸較小，培養(yǎng)周期長。
6、鑒于此，本領(lǐng)域亟需提供一種提升前列腺癌類器官的生存率和形成效率的前列腺癌類器官培養(yǎng)基。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
1、本專利技術(shù)針對現(xiàn)有技術(shù)存在的問題，提供了一種前列腺癌類器官培養(yǎng)基及其制備方法、前列腺癌類器官及其培養(yǎng)方法。
2、為實(shí)現(xiàn)上述目的，本專利技術(shù)采用的技術(shù)方案如下：
3、一種前列腺癌類器官培養(yǎng)基，包括基礎(chǔ)培養(yǎng)基和培養(yǎng)添加物，所述培養(yǎng)添加物包括fgf-10、zeaxanthin?dipalmitate和polydatin。
4、優(yōu)選地，所述培養(yǎng)添加物還包括igf-1、r-spondin?1、noggin、egf、glutamineplus、a83-01、y-27632、n-acetylcysteine、primocin、nicotinamide和sb202190。
5、優(yōu)選地，所述培養(yǎng)添加物包括以下終濃度的組分：fgf-10?10-40ng/ml、zeaxanthin?dipalmitate?2-3mm、polydatin?200-400μg/ml、1-2％青鏈霉素、igf-1?1-10ng/ml、r-spondin?1?100-300ng/ml、noggin?100-300ng/ml、egf?60-90ng/ml、glutamineplus?5-20ng/ml、a83-01?1-2μm、y-27632?10-20μm、n-acetylcysteine?2-8μm、primocin?1-2μm、nicotinamide?10-20μm和sb?202190?200-1000nm。
6、更優(yōu)選地，所述培養(yǎng)添加物包括以下終濃度的組分：fgf-10?20-35ng/ml、zeaxanthin?dipalmitate?2.5-3mm、polydatin?250-350μg/ml、1％青鏈霉素、igf-1?5-8ng/ml、r-spondin1?150-250ng/ml、noggin?150-200ng/ml、egf?65-80ng/ml、glutamineplus?10-15ng/ml、a83-01?1.5-2μm、y-27632?10-15μm、n-acetylcysteine?3-6μm、primocin?1.5-2μm、nicotinamide?15-20μm和sb?202190?300-600nm。
7、優(yōu)選地，所述基礎(chǔ)培養(yǎng)基包括advanced?dmem/f12、n21-max?media?supplement50×和1％hepes緩沖液。
8、本專利技術(shù)還提供了上述前列腺癌類器官培養(yǎng)基的制備方法，包括如下步驟：將培養(yǎng)添加物用無菌水配制成母液，再加入到基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，即得。
9、本專利技術(shù)還提供了一種前列腺癌類器官的培養(yǎng)方法，包括如下步驟：
10、(1)先將新鮮的手術(shù)切除標(biāo)本進(jìn)行預(yù)處理獲取細(xì)胞團(tuán)，離心，獲取細(xì)胞團(tuán)沉淀；
11、(2)再將細(xì)胞團(tuán)沉淀與基底膜提取物混合，獲取混有細(xì)胞的凝膠；
12、(3)最后向凝膠中加入上述前列腺癌類器官培養(yǎng)基，共同培養(yǎng)，即得。
13、優(yōu)選地，步驟(1)中所述預(yù)處理包括如下步驟：先將手術(shù)切除標(biāo)本使用無菌pbs緩沖液漂洗3-5次，切割成1-3mm3小塊；再加入trypletmexpress酶，于32-37℃下，以40-80rpm消化30-60min；最后在100-120目濾網(wǎng)下過濾，即得細(xì)胞團(tuán)。
14、優(yōu)選地，步驟(1)中所述離心的溫度為4-10℃，離心的轉(zhuǎn)速為1000-2000rpm，離心的時間為5-10min，離心的次數(shù)為3-5次。
15、優(yōu)選地，步驟(2)中所述基底膜提取物的溫度為4-10℃，所述混合的溫度為23-27℃，所述細(xì)胞團(tuán)沉淀與基底膜提取物的體積比為1:1-2。
16、優(yōu)選地，步驟(3)中所述共同培養(yǎng)的條件為在37℃，5％co2濃度培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4-7天。
17、本專利技術(shù)還提供了上述本文檔來自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
1.一種前列腺癌類器官培養(yǎng)基，其特征在于，包括基礎(chǔ)培養(yǎng)基和培養(yǎng)添加物，所述培養(yǎng)添加物包括FGF-10、Zeaxanthin?dipalmitate和Polydatin。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的前列腺癌類器官培養(yǎng)基，其特征在于，所述培養(yǎng)添加物還包括IGF-1、R-spondin?1、Noggin、EGF、GlutaminePlus、A83-01、Y-27632、N-Acetylcysteine、Primocin、Nicotinamide和SB?202190。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的前列腺癌類器官培養(yǎng)基，其特征在于，所述培養(yǎng)添加物包括以下終濃度的組分：FGF-10?10-40ng/mL、Zeaxanthin?dipalmitate?2-3mM、Polydatin?200-400μg/mL、1-2％青鏈霉素、IGF-1?1-10ng/mL、R-spondin?1?100-300ng/mL、Noggin?100-300ng/mL、EGF?60-90ng/mL、GlutaminePlus?5-20ng/mL、A83-01?1-2μM、Y-27632?10-20μ
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的前列腺癌類器官培養(yǎng)基，其特征在于，所述培養(yǎng)添加物包括以下終濃度的組分：FGF-10?20-35ng/mL、Zeaxanthin?dipalmitate?2.5-3mM、Polydatin250-350μg/mL、1％青鏈霉素、IGF-1?5-8ng/mL、R-spondin?1?150-250ng/mL、Noggin?150-200ng/mL、EGF?65-80ng/mL、GlutaminePlus?10-15ng/mL、A83-01?1.5-2μM、Y-27632?10-15μM、N-Acetylcysteine?3-6μM、Primocin?1.5-2μM、Nicotinamide?15-20μM和SB?202190300-600nM。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的前列腺癌類器官培養(yǎng)基，其特征在于，所述基礎(chǔ)培養(yǎng)基包括Advanced?DMEM/F12、N21-MAX?Media?Supplement?50×和1％HEPES緩沖液。
6.一種如權(quán)利要求權(quán)利要求1-5任意一項(xiàng)所述的前列腺癌類器官培養(yǎng)基的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：將培養(yǎng)添加物用無菌水配制成母液，再加入到基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，即得。
7.一種前列腺癌類器官的培養(yǎng)方法，其特征在于，包括如下步驟：
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的培養(yǎng)方法，其特征在于，步驟(1)中所述預(yù)處理包括如下步驟：先將手術(shù)切除標(biāo)本使用無菌PBS緩沖液漂洗3-5次，切割成1-3mm3小塊；再加入TrypLETMExpress酶，于32-37℃下，以40-80rpm消化30-60min；最后在100-120目濾網(wǎng)下過濾，即得細(xì)胞團(tuán)。
9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的培養(yǎng)方法，其特征在于，步驟(1)中所述離心的溫度為20-25℃，離心的轉(zhuǎn)速為1000-2000rpm，離心的時間為5-10min；步驟(2)中所述基底膜提取物的溫度為4-10℃，所述混合的溫度為23-27℃，所述細(xì)胞團(tuán)沉淀與基底膜提取物的體積比為1:1-2；步驟(3)中所述共同培養(yǎng)的條件為在37℃，5％CO2濃度培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4-7天。
10.一種使用權(quán)利要求7-9任意一項(xiàng)所述的培養(yǎng)方法培養(yǎng)得到的前列腺癌類器官。
...【技術(shù)特征摘要】
1.一種前列腺癌類器官培養(yǎng)基，其特征在于，包括基礎(chǔ)培養(yǎng)基和培養(yǎng)添加物，所述培養(yǎng)添加物包括fgf-10、zeaxanthin?dipalmitate和polydatin。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的前列腺癌類器官培養(yǎng)基，其特征在于，所述培養(yǎng)添加物還包括igf-1、r-spondin?1、noggin、egf、glutamineplus、a83-01、y-27632、n-acetylcysteine、primocin、nicotinamide和sb?202190。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的前列腺癌類器官培養(yǎng)基，其特征在于，所述培養(yǎng)添加物包括以下終濃度的組分：fgf-10?10-40ng/ml、zeaxanthin?dipalmitate?2-3mm、polydatin?200-400μg/ml、1-2％青鏈霉素、igf-1?1-10ng/ml、r-spondin?1?100-300ng/ml、noggin?100-300ng/ml、egf?60-90ng/ml、glutamineplus?5-20ng/ml、a83-01?1-2μm、y-27632?10-20μm、n-acetylcysteine?2-8μm、primocin?1-2μm、nicotinamide?10-20μm和sb?202190?200-1000nm。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的前列腺癌類器官培養(yǎng)基，其特征在于，所述培養(yǎng)添加物包括以下終濃度的組分：fgf-10?20-35ng/ml、zeaxanthin?dipalmitate?2.5-3mm、polydatin250-350μg/ml、1％青鏈霉素、igf-1?5-8ng/ml、r-spondin?1?150-250ng/ml、noggin?150-200ng/ml...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：王曉婷，馮寧翰，
申請(專利權(quán))人：無錫市第二人民醫(yī)院，
類型：發(fā)明
國別省市：
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