【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及醫學檢驗，特別涉及一種具有比色-熒光雙信號的聚集誘導發光微球及其制備方法與應用。
技術介紹
1、免疫層析試紙條(lateral?flow?immunoassays，lfia)具有檢測速度快，操作簡單，價格低廉的特點，適用于多種生物標志物檢測，目前廣泛應用于肺病、心梗、炎癥、妊娠等多領域。
2、專利cn110940814a公開一種時間分辨熒光定量檢測kl-6的試紙條及其制備方法，用鑭系元素標記抗體，根據鑭系元素螯合物的發光特點，用時間分辨技術測量熒光，可有效地排除非特異熒光的干擾，提高分析靈敏度。但是時間分辨熒光材料的光漂白，導致檢測結果的重現性差。聚集誘導發光材料以在固態或聚集態發光增強為特點，且具有耐光漂白，強發光等優點，有極大潛力替代傳統熒光染料。用聚集誘導發光材料作為熒光標記探針，不僅可以提高熒光微球的負載量，且可以克服傳統染料的聚集誘導猝滅效應，極大地提升了熒光微球的信號輸出能力以及檢測的靈敏度。
3、然而，熒光信號探針需要額外的紫外激發光源，限制了免疫層析試紙條的大規模應用。近年來，大量的研究人員研發出比色-熒光雙重信號輸出的免疫層析試紙條，具有裸眼定性和熒光定量的能力，雙重信號輸出的模式極大提高了檢測的靈活性，適用于多種應用場景。目前使用的比色-熒光信號大多是將貴金屬如金納米顆粒與熒光染料如量子點等共同自組裝成復合材料。而復合材料的信號之間會相互干擾，難以做到兩種信號的完美結合。專利cn114660029a公開一種比色-熒光雙信號聚集誘導熒光微球及其應用，采用單獨一種聚集誘導發光
4、因此，現有技術仍有待于改進和發展。
技術實現思路
1、鑒于上述現有技術的不足，本專利技術的目的在于提供一種具有比色-熒光雙信號的聚集誘導發光微球及其制備方法與應用，旨在解決現有具有比色-熒光雙信號的聚集誘導發光微球應用于生物標志物檢測時會受到自體熒光干擾的問題。
2、本專利技術的技術方案如下：
3、本專利技術的第一方面，提供一種具有比色-熒光雙信號的聚集誘導發光微球，所述聚集誘導發光微球包括：羧基聚苯乙烯微球以及包埋在所述羧基聚苯乙烯微球中的聚集誘導發光染料；
4、所述聚集誘導發光染料的結構式為：
5、
6、優選的技術方案，所述聚集誘導發光微球中，所述聚集誘導發光染料和所述羧基聚苯乙烯微球的質量比為1︰(0.5～10)。
7、優選的技術方案，所述聚集誘導發光微球的粒徑為250nm～350nm。
8、本專利技術的第二方面，提供一種如第一方面所述的聚集誘導發光微球的制備方法，包括步驟：
9、s1、將羧基聚苯乙烯微球溶于含有表面活性劑的水溶液中，分散均勻后，加入有機溶劑進行溶脹，得到第一溶液；
10、s2、將聚集誘導發光染料溶解到良溶劑中，分散均勻后，得到第二溶液；
11、s3、將所述第一溶液加入到所述第二溶液中，分散均勻后，減壓旋蒸除去有機相，得到無機相；
12、s4、將所述無機相離心，棄上清液，加入去離子水，再離心，直至上清液無熒光，得到所述的聚集誘導發光微球。
13、優選的技術方案，所述聚集誘導發光染料的制備方法，包括：
14、將4,4'-二甲氧基-4”-硼酸三苯胺和3,6-雙(5-溴-2-噻吩基)-2,5-雙(2-乙基己基)-2,5-二氫吡咯并[3,4-c]吡咯-1,4-二酮在惰性氣氛下進行偶聯反應，得到所述的聚集誘導發光染料。
15、優選的技術方案，所述表面活性劑選自十二烷基磺酸胺、十二烷基硫酸鈉、十二烷基苯磺酸中的一種或多種；和/或，所述有機溶劑選自丙酮、甲苯、四氫呋喃、三氯甲烷中的一種或多種；和/或，所述良溶劑選自丙酮、甲苯、四氫呋喃、三氯甲烷中的一種或多種。
16、優選的技術方案，所述步驟s1中，溶脹的時間為10～30min；和/或，所述步驟s3中，減壓旋蒸的時間15～30min；和/或，所述步驟s4中，離心的轉速為8000～15000rpm，離心的時間為10～20min。
17、本專利技術的第三方面，提供一種免疫熒光探針，所述免疫熒光探針為第一方面所述的聚集誘導發光微球標記的抗體。
18、優選的技術方案，所述免疫熒光探針中，所述抗體和所述聚集誘導發光微球的質量比為(0.08～0.12)︰1。
19、本專利技術的第四方面，提供一種免疫層析試紙條，所述免疫層析試紙條包含如第三方面所述的免疫熒光探針，所述免疫熒光探針與待測物質特異性結合。
20、有益效果：本專利技術提供一種具有比色-熒光雙信號的聚集誘導發光微球，所述聚集誘導發光微球包括：羧基聚苯乙烯微球以及包埋在所述羧基聚苯乙烯微球中的聚集誘導發光染料。與現有技術相比，本專利技術的聚集誘導發光微球具有比色-熒光雙信號，在自然光下為紅色，在600nm處有強吸收，725nm處表現出高發光效率，不僅有效避開了生物自體熒光的干擾，降低了背景干擾，而且具有良好的光穩定性以及耐光漂白特性，高摩爾消光系數使其兼具比色及熒光雙信號輸出能力。此外，該聚集誘導發光微球的制備過程重現性高，具有大規模合成的潛力，滿足產業批量生產的需求。
21、進一步地，采用本專利技術的聚集誘導發光微球制備得到的免疫熒光探針，可以同時實現裸眼定性和熒光定量。此外，采用該免疫熒光探針制備得到的免疫層析試紙條，具備靈敏度高(定性檢出限為4.11ng/ml，定量檢出限為53.4pg/ml)，檢測范圍寬(線性范圍為15～33333pg/ml)，可靠性高(與商業化elisa試劑盒相關性r2為0.9002)等特點，檢測不受儀器和地域限制，為生物標志物的鑒別診斷、預后判定和動態監測提供了便捷的檢測工具。
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1.一種具有比色-熒光雙信號的聚集誘導發光微球，其特征在于，所述聚集誘導發光微球包括：羧基聚苯乙烯微球以及包埋在所述羧基聚苯乙烯微球中的聚集誘導發光染料；
2.根據權利要求1所述的聚集誘導發光微球，其特征在于，所述聚集誘導發光微球中，所述聚集誘導發光染料和所述羧基聚苯乙烯微球的質量比為1︰(0.5～10)。
3.根據權利要求1所述的聚集誘導發光微球，其特征在于，所述聚集誘導發光微球的粒徑為250nm～350nm。
4.一種如權利要求1～3任一項所述的聚集誘導發光微球的制備方法，其特征在于，包括步驟：
5.根據權利要求4所述的制備方法，其特征在于，所述聚集誘導發光染料的制備方法，包括：
6.根據權利要求4所述的制備方法，其特征在于，所述表面活性劑選自十二烷基磺酸胺、十二烷基硫酸鈉、十二烷基苯磺酸中的一種或多種；和/或，所述有機溶劑選自丙酮、甲苯、四氫呋喃、三氯甲烷中的一種或多種；和/或，所述良溶劑選自丙酮、甲苯、四氫呋喃、三氯甲烷中的一種或多種。
7.根據權利要求4所述的制備方法，其特征在于，所述步驟S1中，溶
8.一種免疫熒光探針，其特征在于，所述免疫熒光探針為權利要求1～3任一項所述的聚集誘導發光微球標記的抗體。
9.根據權利要求8所述的免疫熒光探針，其特征在于，所述免疫熒光探針中，所述抗體和所述聚集誘導發光微球的質量比為(0.08～0.12)︰1。
10.一種免疫層析試紙條，其特征在于，所述免疫層析試紙條包含如權利要求8～9任一項所述的免疫熒光探針，所述免疫熒光探針與待測物質特異性結合。
...【技術特征摘要】
1.一種具有比色-熒光雙信號的聚集誘導發光微球，其特征在于，所述聚集誘導發光微球包括：羧基聚苯乙烯微球以及包埋在所述羧基聚苯乙烯微球中的聚集誘導發光染料；
2.根據權利要求1所述的聚集誘導發光微球，其特征在于，所述聚集誘導發光微球中，所述聚集誘導發光染料和所述羧基聚苯乙烯微球的質量比為1︰(0.5～10)。
3.根據權利要求1所述的聚集誘導發光微球，其特征在于，所述聚集誘導發光微球的粒徑為250nm～350nm。
4.一種如權利要求1～3任一項所述的聚集誘導發光微球的制備方法，其特征在于，包括步驟：
5.根據權利要求4所述的制備方法，其特征在于，所述聚集誘導發光染料的制備方法，包括：
6.根據權利要求4所述的制備方法，其特征在于，所述表面活性劑選自十二烷基磺酸胺、十二烷基硫酸鈉、十二烷基苯磺酸中的一種或多種；和/或，所述有機溶劑選...
【專利技術屬性】
技術研發人員：李瑩，劉淇，陳樨蕊，趙征，汪克年，
申請(專利權)人：廣州醫科大學，
類型：發明
國別省市：
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