【技術實現步驟摘要】
【國外來華專利技術】
技術介紹
技術實現思路
【技術保護點】
1.一種工程化細胞，其相對于未經修飾的細胞具有降低或消除的HLA-A的表面表達，其包含HLA-A基因中的遺傳修飾，其中所述遺傳修飾包含基因組坐標chr6：29942540-29945459內的至少一個核苷酸。
2.如權利要求1所述的工程化細胞，其相對于未經修飾的細胞具有降低或消除的HLA-A的表面表達，其包含HLA-A基因中的遺傳修飾，其中所述遺傳修飾包含選自表1中所列的任一基因組坐標的基因組坐標內的至少一個核苷酸，或其中所述遺傳修飾包含所述基因組坐標內由指導RNA靶向的至少一個核苷酸，所述指導RNA包含SEQ?ID?NO：66、61、2-60、62-65、67-80中任一者的指導序列。
3.一種工程化細胞，其相對于未經修飾的細胞具有降低或消除的HLA-A的表面表達，其包含HLA-A基因中的遺傳修飾，其中所述遺傳修飾包含選自以下的基因組坐標內的至少一個核苷酸：chr6：29942891-29942915；chr6：29942609-29942633；chr6：29944266-29944290；chr6：29942889-29942913；chr6：299
4.一種工程化人類細胞，其相對于未經修飾的細胞具有降低或消除的HLA-A的表面表達，其包含HLA-A基因中的遺傳修飾，其中所述遺傳修飾包含選自以下的基因組坐標內的至少一個核苷酸：chr6：29942891-29942915；chr6：29942609-29942633；chr6：29942889-29942913；chr6：29944471-29944495；chr6：29944266-29944290；chr6：29942785-29942809。
5.一種工程化人類細胞，其相對于未經修飾的細胞具有降低或消除的HLA-A的表面表達，其包含HLA-A基因中的遺傳修飾，其中所述遺傳修飾包含選自以下的基因組坐標內的插入/缺失、C至T的取代或A至G的取代：chr6：29942891-29942915；chr6：29942609-29942633；chr6：29944266-29944290；chr6：29942889-29942913；chr6：29944471-29944495和chr6：29944470-29944494。
6.一種工程化人類細胞，其相對于未經修飾的細胞具有降低或消除的HLA-A的表面表達，其包含HLA-A基因中的遺傳修飾，其中所述遺傳修飾包含選自以下的基因組坐標內的插入/缺失、C至T的取代或A至G的取代：chr6：29942891-29942915；chr6：29942609-29942633；chr6：29942889-29942913；chr6：29944471-29944495；chr6：29944266-29944290；chr6：29942785-29942809。
7.如權利要求1-6中任一項所述的工程化細胞，其中所述HLA-A表達通過結合至HLA-A基因組靶序列的基因組編輯系統來降低或消除，所述HLA-A基因組靶序列包含基因組坐標內的至少5個鄰接核苷酸，所述基因組坐標選自chr6：29942891-29942915；chr6：29942609-29942633；chr6：29944266-29944290；chr6：29942889-29942913；chr6：29944471-29944495和chr6：29944470-29944494，或選自chr6：29942891-29942915；chr6：29942609-29942633；chr6：29942889-29942913；chr6：29944471-29944495；chr6∶29944266-29944290；chr6：29942785-29942809。
8.如權利要求1-7中任一項所述的工程化細胞，其中所述遺傳修飾包含選自表1中所列的任一基因組坐標的基因組坐標內的至少一個核苷酸。
9.如權利要求1-8中任一項所述的工程化細胞，其中所述細胞是HLA-C純合的。
10.如權利要求1-9中任一項所述的工程化細胞，其中所述細胞是HLA-B純合的并且是HLA-C純合的。
11.一種組合物，其包含HLA-A指導RNA和任選存在的RNA指導的DNA結合劑或編碼RNA指導的DNA結合劑的核酸，其中所述HLA-A指導RNA包含
12.一種制備工程化人類細胞的方法，所述工程化人類細胞相對于未經修飾的細胞具有降低或消除的HLA-A蛋白的表面表達，所述方法包括使細胞與組合物接觸，所述組合物包...
【技術特征摘要】
【國外來華專利技術】
1.一種工程化細胞，其相對于未經修飾的細胞具有降低或消除的hla-a的表面表達，其包含hla-a基因中的遺傳修飾，其中所述遺傳修飾包含基因組坐標chr6：29942540-29945459內的至少一個核苷酸。
2.如權利要求1所述的工程化細胞，其相對于未經修飾的細胞具有降低或消除的hla-a的表面表達，其包含hla-a基因中的遺傳修飾，其中所述遺傳修飾包含選自表1中所列的任一基因組坐標的基因組坐標內的至少一個核苷酸，或其中所述遺傳修飾包含所述基因組坐標內由指導rna靶向的至少一個核苷酸，所述指導rna包含seq?id?no：66、61、2-60、62-65、67-80中任一者的指導序列。
3.一種工程化細胞，其相對于未經修飾的細胞具有降低或消除的hla-a的表面表達，其包含hla-a基因中的遺傳修飾，其中所述遺傳修飾包含選自以下的基因組坐標內的至少一個核苷酸：chr6：29942891-29942915；chr6：29942609-29942633；chr6：29944266-29944290；chr6：29942889-29942913；chr6：29944471-29944495和chr6：29944470-29944494。
4.一種工程化人類細胞，其相對于未經修飾的細胞具有降低或消除的hla-a的表面表達，其包含hla-a基因中的遺傳修飾，其中所述遺傳修飾包含選自以下的基因組坐標內的至少一個核苷酸：chr6：29942891-29942915；chr6：29942609-29942633；chr6：29942889-29942913；chr6：29944471-29944495；chr6：29944266-29944290；chr6：29942785-29942809。
5.一種工程化人類細胞，其相對于未經修飾的細胞具有降低或消除的hla-a的表面表達，其包含hla-a基因中的遺傳修飾，其中所述遺傳修飾包含選自以下的基因組坐標內的插入/缺失、c至t的取代或a至g的取代：chr6：29942891-29942915；chr6：29942609-29942633；chr6：29944266-29944290；chr6：29942889-29942913；chr6：29944471-29944495和chr6：29944470-29944494。
6.一種工程化人類細胞，其相對于未經修飾的細胞具有降低或消除的hla-a的表面表達，其包含hla-a基因中的遺傳修飾，其中所述遺傳修飾包含選自以下的基因組坐標內的插入/缺失、c至t的取代或a至g的取代：chr6：29942891-29942915；chr6：29942609-29942633；chr6：29942889-29942913；chr6：29944471-29944495；chr6：29944266-29944290；chr6：29942785-29942809。
7.如權利要求1-6中任一項所述的工程化細胞，其中所述hla-a表達通過結合至hla-a基因組靶序列的基因組編輯系統來降低或消除，所述hla-a基因組靶序列包含基因組坐標內的至少5個鄰接核苷酸，所述基因組坐標選自chr6：29942891-29942915；chr6：29942609-29942633；chr6：29944266-29944290；chr6：29942889-29942913；chr6：29944471-29944495和chr6：29944470-29944494，或選自chr6：29942891-29942915；chr6：29942609-29942633；chr6：29942889-29942913；chr6：29944471-29944495；chr6∶29944266-29944290；chr6：29942785-29942809。
8.如權利要求1-7中任一項所述的工程化細胞，其中所述遺傳修飾包含選自表1中所列的任一基因組坐標的基因組坐標內的至少一個核苷酸。
9.如權利要求1-8中任一項所述的工程化細胞，其中所述細胞是hla-c純合的。
10.如權利要求1-9中任一項所述的工程化細胞，其中所述細胞是hla-b純合的并且是hla-c純合的。
11.一種組合物，其包含hla-a指導rna和任選存在的rna指導的dna結合劑或編碼rna指導的dna結合劑的核酸，其中所述hla-a指導rna包含
12.一種制備工程化人類細胞的方法，所述工程化人類細胞相對于未經修飾的細胞具有降低或消除的hla-a蛋白的表面表達，所述方法包括使細胞與組合物接觸，所述組合物包含hla-a指導rna和任選存在的rna指導的dna結合劑或編碼rna指導的dna結合劑的核酸，其中所述hla-a指導rna包含
13.一種相對于未經修飾的細胞降低人類細胞中hla-a蛋白的表面表達的方法，其包括使細胞與組合物接觸，所述組合物包含hla-a指導rna和任選存在的rna指導的dna結合劑或編碼rna指導的dna結合劑的核酸，其中所述hla-a指導rna包含
14.如權利要求11-13中任一項所述的組合物或方法，其中所述hla-a指導rna包含seqid?no：66、61、13、55、70和71中任一者的指導序列。
15.如權利要求11-13中任一項所述的組合物或方法，其中所述hla-a指導rna包含seqid?no：61、66、13、17、55和70中任一者的指導序列。
16.如權利要求11-13中任一項所述的組合物或方法，其中所述hla-a指導rna包含指導序列，所述指導序列包含seq?id?no：61的序列。
17.如權利要求11-13中任一項所述的組合物或方法，其中所述hla-a指導rna包含指導序列，所述指導序列包含seq?id?no：66的序列。
18.一種細胞群體，其包含如權利要求1-10中任一項所述的工程化細胞、或通過如權利要求12-17中任一項所述的方法產生的工程化細胞。
19.一種藥物組合物，其包含(a)如權利要求1-10中任一項所述的工程化細胞；通過如權利要求12-17中任一項所述的方法或通過使用如權利要求11所述的組合物產生的工程化細胞；或(b)如權利要求18所述的細胞群體。
20.一種工程化人類細胞，其相對于未經修飾的細胞具有降低或消除的trac的表面表達，其包含trac基因中的遺傳修飾，其中所述遺傳修飾包含基因組坐標chr14：22547505-22551621或chr14：22547462-22551621內的至少一個核苷酸。
21.如權利要求20所述的工程化細胞，其中所述遺傳修飾包含選自表2中所列的任一基因組坐標的基因組坐標內的至少一個核苷酸，或其中所述遺傳修飾包含所述基因組坐標內由指導rna靶向的至少一個核苷酸，所述指導rna包含seq?id?no：111、107、101-106、108-110和112-120中任一者的指導序列。
22.如權利要求20或21所述的工程化細胞，其中所述遺傳修飾包含選自以下的基因組坐標內的至少一個核苷酸：chr14：22550574-22550598；chrl4：22550544-22550568；chrl4：22547505-22547529；或chr14：22547525-22547549；chrl4：22547674-22547698。
23.一種工程化人類細胞，其相對于未經修飾的細胞具有降低或消除的trac表達，其包含trac基因中的遺傳修飾，其中所述遺傳修飾包含選自以下的基因組坐標內的插入/缺失、c至t的取代或a至g的取代：chr14：22550574-22550598；chr14：22550544-22550568；chr14：22547505-22547529；chrl4：22547525-22547549或chr14：22547674-22547698。
24.如權利要求20-23中任一項所述的工程化細胞，其中所述trac表達通過結合至trac靶序列的基因組編輯系統來降低或消除，所述trac靶序列包含選自以下的基因組坐標內的至少5個鄰接核苷酸：chrl4：22550574-22550598；chr14：22550544-22550568；chr14：22547505-22547529；chrl4：22547525-22547549或chr14：22547674-22547698。
25.一種組合物，其包含：a)包含指導序列的trac指導rna，所述指導序列i)靶向trac基因組靶序列；或ii)引導rna指導的dna結合劑誘導trac基因組靶序列中的雙鏈斷裂(dsb)或單鏈斷裂(ssb)，所述trac基因組靶序列包含選自以下的基因組坐標內的至少10個鄰接核苷酸：chr14：22550574-22550598；chr14：22550544-22550568；chr14：22547505-22547529；chr14：22547525-22547549或chr14：22547674-22547698。
26.一種組合物，其包含：(a)trac指導rna和任選存在的(b)rna指導的dna結合劑或編碼rna指導的dna結合劑的核酸，其中所述trac指導rna包含：
27.如權利要求26所述的組合物，其用于改變細胞中trac基因座內的dna序列。
28.如權利要求26所述的組合物，其用于降低或消除細胞中trac蛋白的表達。
29.一種制備工程化人類細胞的方法，所述工程化人類細胞相對于未經修飾的細胞具有降低或消除的trac蛋白的表面表達，所述方法包括使細胞與組合物接觸，所述組合物包含：(a)trac指導rna和任選存在的(b)rna指導的dna結合劑或編碼rna指導的dna結合劑的核酸，其中所述trac指導rna包含：
30.一種相對于未經修飾的細胞降低人類細胞中trac蛋白的表面表達的方法，所述方法包括使細胞與組合物接觸，所述組合物包含：(a)trac指導rna和任選存在的(b)rna指導的dna結合劑或編碼rna指導的dna結合劑的核酸，其中所述trac指導rna包含：
31.如權利要求25-30中任一項所述的組合物或方法，其中所述trac指導rna包含seqid?no：111、107、101、102和103中任一者的指導序列。
32.如權利要求25-30中任一項所述的組合物或方法，其中所述trac指導rna包含指導序列，所述指導序列包含seq?id?no：107的序列。
33.如權利要求25-30中任一項所述的組合物或方法，其中所述trac指導rna包含指導序列，所述指導序列包含seq?id?no：111的序列。
34.一種藥物組合物，其包含如權利要求20-24中任一項所述的工程化細胞、或通過使用如權利要求25或26所述的組合物或通過如權利要求25-33中任一項所述的方法產生的工程化細胞。
35.一種工程化細胞，其相對于未經修飾的細胞具有降低或消除的trbc的表面表達，其包含trbc基因座中的遺傳修飾，其中所述遺傳修飾包含基因組坐標chr7：142791756-142802543內的至少一個核苷酸。
36.一種工程化細胞，其相對于未經修飾的細胞具有降低或消除的trbc的表面表達，其包含trbc基因座中的遺傳修飾，其中所述遺傳修飾包含以下基因組坐標內的至少一個核苷酸：(a)chr7：142791862-142793149；(b)chr7：142791756-142792721或(c)chr7：142801104-142802543，或其中所述遺傳修飾包含所述基因組坐標內由指導rna靶向的至少一個核苷酸，所述指導rna包含seq?id?no：215、201-214和216-265中任一者的指導序列。
37.如權利要求35或36所述的工程化細胞，其中所述遺傳修飾包含選自表3中所列的任一基因組坐標的基因組坐標內的至少一個核苷酸。
38.如權利要求35或36所述的工程化細胞，其中所述遺傳修飾包含選自以下的基因組坐標內的至少一個核苷酸：(a)chr7：142792690-142792714或chr7：142792693-142792717；或(b)chr7：142791756-142791780；chr7：142791761-142791785；chr7：142791820-142791844；chr7：142791939-142791963：chr7：142791940-142791964或chr7：142792004-142792028；或(c)chr7：142801104-142801124；chr7：142802103-142802127或chr7：142802106-142802130。
39.如權利要求35或36所述的工程化細胞，其中所述遺傳修飾包含選自以下的基因組坐標內的至少一個核苷酸：chr7：142792690-142792714；chr7：142802103-142802127和chr7：142802106-14280213。
40.一種工程化細胞，其相對于未經修飾的細胞具有降低或消除的trbc表達，其包含人類trbc基因中的遺傳修飾，其中所述遺傳修飾包含以下基因組坐標內的插入/缺失、c至t的取代或a至g的取代：(a)chr7：142791862-142793149；(b)chr7：142791756-142792721；或(c)chr7：142801104-142802543。
41.一種工程化人類細胞，其相對于未經修飾的細胞具有降低或消除的trbc表達，其包含trbc基因中的遺傳修飾，其中所述遺傳修飾包含選自以下的基因組坐標內的插入/缺失、c至t的取代或a至g的取代：(a)chr7：142792690-142792714或chr7：142792693-142792717；或(b)chr7：142791756-142791780；chr7：142791761-142791785；chr7：142791820-142791844；chr7：142791939-142791963；chr7：142791940-142791964或chr7：142792004-142792028；或(c)chr7：142801104-142801124；chr7：142802103-142802127或chr7：142802106-142802130。
42.一種工程化人類細胞，其相對于未經修飾的細胞具有降低或消除的trbc表達，其包含trbc基因中的遺傳修飾，其中所述遺傳修飾包含選自以下的基因組坐標內的插入/缺失、c至t的取代或a至g的取代：chr7：142792690-142792714；chr7：142802103-142802127和chr7：142802106-14280213。
43.如權利要求35-42中任一項所述的工程化細胞，其中所述trbc表達通過結合至trbc靶序列的基因組編輯系統來降低或消除，所述trbc靶序列包含選自以下的基因組坐標內的至少5個鄰接核苷酸：(a)chr7：142792690-142792714或chr7：142792693-142792717；或(b)chr7：142791756-142791780；chr7：142791761-142791785；chr7：142791820-142791844；chr7：142791939-142791963；chr7：142791940-142791964或chr7：142792004-142792028；或(c)chr7：142801104-142801124；chr7：142802103-142802127或chr7：142802106-142802130。
44.如權利要求35-43中任一項所述的工程化細胞，其中所述trbc表達通過結合至trbc靶序列的基因組編輯系統來降低或消除，所述trbc靶序列包含選自以下的基因組坐標內的至少5個鄰接核苷酸：chr7：142792690-142792714；chr7：142802103-142802127和chr7：142802106-14280213。
45.一種組合物，其包含(a)trbc指導rna和任選存在的(b)rna指導的dna結合劑或編碼rna指導的dna結合劑的核酸，其中所述trbc指導rna包含：
46.如權利要求45所述的組合物，其用于改變細胞中trbc基因座內的dna序列。
47.如權利要求45所述的組合物，其用于降低或消除細胞中trbc蛋白的表達。
48.一種制備工程化人類細胞的方法，所述工程化人類細胞相對于未經修飾的細胞具有降低或消除的trbc蛋白的表面表達，所述方法包括使細胞與以下接觸：(a)trbc指導rna和任選存在的(b)rna指導的dna結合劑或編碼rna指導的dna結合劑的核酸，其中所述trbc指導rna包含：
49.一種相對于未經修飾的細胞降低人類細胞中trbc蛋白的表面表達的方法，所述方法包括使細胞與以下接觸：(a)trbc指導rna和任選存在的(b)rna指導的dna結合劑或編碼rna指導的dna結合劑的核酸，其中所述trbc指導rna包含：
50.如權利要求45-49中任一項所述的方法或組合物，其中所述trbc指導rna包含seqid?no：215、216、223、224、229、230、246、259和260中任一者的指導序列。
51.如權利要求45-50中任一項所述的方法或組合物，其中所述trbc指導rna包含seqid?no：215、216、224、229、246、259和260中任一者的指導序列。
52.如權利要求45-51中任一項所述的方法或組合物，其中所述trbc指導rna包含seqid?no：215、259和260中任一者的指導序列。
53.一種藥物組合物，其包含如權利要求35-44中任一項所...
【專利技術屬性】
技術研發人員：R·奧利維拉，崔誠熙，劉標，R·巴弗，
申請(專利權)人：因特利亞治療公司，
類型：發明
國別省市：
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