【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于生物，具體涉及一種特異性檢測具核梭狀桿菌的pcr引物、試劑盒及其應用。
技術介紹
1、人體腸道微生物群中含有由真菌、細菌、病毒和原生動物組成的微生物群落，其中微生物-微生物和微生物-宿主的相互作用對人類健康至關重要。這些相互作用的不平衡，反映在組成和功能的變化上，與疾病的發生發展息息相關。結直腸癌(colorectal?cancer，crc)是常見癌癥，研究發現，從異常的隱窩到腫瘤，各種遺傳和環境因素都有助于crc的發展。在crc中，最密切相關的致病菌是具核梭桿菌，它可以在crc組織中檢測到，其豐度從正常組織到腺瘤組織再到結直腸癌逐漸增加，富集在腫瘤中的具核梭桿菌參與crc進展的各個階段，因此，通過檢測具核梭桿菌，可以作為輔助診斷結直腸癌的手段之一。
2、在過去的幾十年里，隨著微生物組技術和生物信息學的進步，人們開發了各種檢測細菌的方法，其中，通過分子生物學的手段應用最為廣泛，如基質輔助激光解吸電離飛行時間質譜(matrix-assisted?laser?desorption/ionization?time-of-flight?massspectrometry，maldi-to?f?ms)技術、qpcr法，血清學elisa，斑點雜交，原位雜交等鑒定等。而目前臨床上對于具核梭桿菌的檢測(如菌血癥、結直腸癌組織，口腔拭子等)主要基于培養基培養，形態檢測，生化反應鑒定，需要3-7天的時間，并且需要厭氧環境，嚴重限制了其應用。
3、針對上述技術問題，本專利技術提供了一種特異性檢測具核梭狀桿菌的pcr
技術實現思路
1、本專利技術的目的在于提供一種特異性檢測具核梭狀桿菌的pcr引物，所述的引物序列中正向引物的序列如seq?id?no.1所示，反向引物的序列如seq?id?no.2所示。
2、本專利技術的第二目的是提供所述的pcr引物在檢測具核梭狀桿菌中的應用，所述的檢測為非疾病診斷目的的檢測。
3、本專利技術的第三目的是提供所述的pcr引物在制備用于檢測具核梭狀桿菌的試劑盒中的應用。
4、本專利技術的第四目的是提供一種特異性檢測具核梭狀桿菌的pcr試劑盒，所述的試劑盒包括所述的pcr引物。
5、本專利技術的第五目的是提供所述的pcr試劑盒在檢測具核梭狀桿菌中的應用，所述的檢測為非疾病診斷目的的檢測。
6、本專利技術的第六目的是提供一種特異性檢測具核梭狀桿菌的pcr方法，提取待檢微生物dna，取dna溶液作為反應模板，以所述的引物組合物進行pcr反應。
7、優選的，所述的方法中的反應體系為：2×sybr?green?qpcr?master?5μl，模板1μl，上游引物0.3μl，下游引物0.3μl，水3.4μl。
8、優選的，所述的方法中的pcr反應程序為：預變性95℃，30s；變性/退火/延伸40循環，95℃，10s，95℃，30s；熔解曲線，95℃，15s，60℃，60s，95℃，15s。
9、本專利技術的有益效果是：
10、(1)本專利技術提供一種特異性檢測具核梭狀桿菌的pcr引物，所述的引物能夠對具核梭狀桿菌進行特異性擴增，提高了檢測效率，降低了檢測成本；
11、(2)本專利技術提供了一種特異性檢測具核梭狀桿菌的pcr方法，使用的pcr引物及反應體系，能在復雜群落背景下特異性檢測具核梭桿菌。
12、(3)所述的方法具有成本低，速度快，準確度高的優點，能夠避免傳統的基于分離培養微生物，再進行測序或質譜鑒定等實驗的速度慢，花費高，周期長等缺點，可以廣泛用于具核梭桿菌的快速檢測中。
本文檔來自技高網...【技術保護點】
1.一種特異性檢測具核梭狀桿菌的PCR引物，其特征在于，所述的引物序列中正向引物的序列如SEQ?ID?NO.1所示，反向引物的序列如SEQ?ID?NO.2所示。
2.如權利要求1所述的PCR引物在檢測具核梭狀桿菌中的應用，所述的檢測為非疾病診斷目的的檢測。
3.如權利要求1所述的PCR引物在制備用于檢測具核梭狀桿菌的試劑盒中的應用。
4.一種特異性檢測具核梭狀桿菌的PCR試劑盒，其特征在于，所述的試劑盒包括權利要求1所述的PCR引物。
5.如權利要求4所述的PCR試劑盒在檢測具核梭狀桿菌中的應用，所述的檢測為非疾病診斷目的的檢測。
6.一種特異性檢測具核梭狀桿菌的PCR方法，其特征在于，提取待檢微生物DNA，取DN?A溶液作為反應模板，以權利要求1所述的引物組合物進行PCR反應。
7.如權利要求6所述的PCR方法，其特征在于，所述的方法中的反應體系為：2×SYBR?Green?qPCR?Master?5μL，模板1μL，上游引物0.3μL，下游引物0.3μL，水3.4μL。
8.如權利要求6所述的
...【技術特征摘要】
1.一種特異性檢測具核梭狀桿菌的pcr引物，其特征在于，所述的引物序列中正向引物的序列如seq?id?no.1所示，反向引物的序列如seq?id?no.2所示。
2.如權利要求1所述的pcr引物在檢測具核梭狀桿菌中的應用，所述的檢測為非疾病診斷目的的檢測。
3.如權利要求1所述的pcr引物在制備用于檢測具核梭狀桿菌的試劑盒中的應用。
4.一種特異性檢測具核梭狀桿菌的pcr試劑盒，其特征在于，所述的試劑盒包括權利要求1所述的pcr引物。
5.如權利要求4所述的pcr試劑盒在檢測具核梭狀桿菌中的應用，所述的檢測為非疾病診斷目的的檢測。
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