【技術實現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術涉及基因工程和分子生物學領域，具體涉及一種雞nrg4基因近端啟動子和雙向啟動子及其構建方法和應用。
技術介紹
1、神經(jīng)調節(jié)因子(neuregulins,nrgs)是多肽生長因子，是表皮生長因子家族的成員。nrgs家族有4個成員(nrg1、nrg2、nrg3和nrg4)。神經(jīng)調節(jié)蛋白4(neuregulin?4,nrg4)是新發(fā)現(xiàn)的脂肪細胞因子，在小鼠肺、心臟和脂肪組織中表達，在棕色脂肪組織中表達水平最高。nrg4含有一個egf樣結構域，在蛋白水解裂解后釋放，作為自分泌/旁分泌或內分泌信號。哺乳動物研究發(fā)現(xiàn)，nrg4主要通過特異性結合表皮生長因子受體4(erb-b2?receptortyrosine?kinase?4,erbb4)，激活erbb4信號通路，從而促進葡萄糖攝取和血管生成，抑制炎癥產(chǎn)生，維持代謝穩(wěn)態(tài)。
2、肥胖小鼠和人類的脂肪組織nrg4?mrna表達水平均下降，提示其可能具有肥胖保護作用。nrg4轉基因小鼠研究發(fā)現(xiàn)，nrg4可增加幾種脂肪因子的mrna表達，包括脂素、脂聯(lián)素和血管內皮生長因子α(vegfα)，這些脂肪因子被認為具有改善肥胖代謝失調的作用。此外，nrg4還可以促進白色脂肪組織(wat)褐變和前脂肪細胞分化，通過內分泌途徑作用于肝，降低肝脂肪合成。因此，nrg4是有益細胞因子，有望用于肥胖、糖尿病、胰島素抵抗和非酒精性脂肪肝等代謝疾病的治療。
3、雞不僅是一個重要的經(jīng)濟動物，還是發(fā)育生物學和免疫學等研究的一個重要動物模型。在現(xiàn)在肉雞產(chǎn)業(yè)中，由于長期的遺傳選擇，肉雞的生長速
4、綜上所述，nrg4是低脂肉雞育種的候選基因。許多動植物的研究顯示，基因的外顯子和內含子，特別是近端外顯子和內含子，可以通過多種機制參與調控自身基因的表達。目前，還沒有雞nrg4基因近端外顯子和內含子的轉錄調控的研究報道，開展nrg4基因近端外顯子和內含子的啟動子分析，對于揭示雞nrg4的轉錄調控機制、培育低腹脂肉雞、以及揭示一些人類疾病發(fā)生背后的分子機制和開發(fā)靶向，nrg4表達的藥物具有潛在應用價值。
技術實現(xiàn)思路
1、基于以上不足之處，本專利技術提供了一種雞nrg4基因近端啟動子，該啟動子在雞胚成纖維細胞中具有啟動子活性，且受特定轉錄因子cebp/α的調控。
2、本專利技術采用如下的技術方案：一種雞nrg4基因近端啟動子，所述雞nrg4基因近端啟動子為核苷酸序列如seq?id?no：1-seq?id?no：4所示的a1-a4序列中的任意一條。
3、進一步的，所述雞nrg4基因近端啟動子a1序列其具有雙向啟動子活性。
4、本專利技術的另一目的是提供一種引物組，用于擴增如上所述的雞nrg4基因近端啟動子，所述引物組包括：擴增a1序列的如seq?id?no：5所示上游引物和如seq?id?no：9所示下游引物；擴增a2序列的如seq?id?no：6所示上游引物和如seq?id?no：9所示下游引物；擴增a3序列的如seq?id?no：7所示上游引物和如seq?id?no：9所示下游引物；擴增a4序列的如seq?id?no：8所示上游引物和如seq?id?no：9所示下游引物。
5、本專利技術的另一目的是提供一種試劑盒，其特征在于，包括如上所述的引物組。
6、本專利技術的另一目的是提供一種如上所述的雞nrg4基因近端啟動子的構建方法，包括以下步驟：以雞全血中提取的dna作為模板，采用如上所述的引物組進行pcr擴增，獲取雞nrg4基因近端啟動子。
7、本專利技術的另一目的是提供一種重組載體，包括如上所述的雞nrg4基因近端啟動子。
8、本專利技術的另一目的是提供一種重組菌，包括權利要求上所述的重組載體。
9、本專利技術的另一目的是提供一種如上所述的雞nrg4基因近端啟動子的應用，應用于如下任一項中：(1)、應用于啟動螢火蟲熒光素酶在真核細胞中表達；所述真核細胞為雞胚成纖維細胞；(2)、應用于雞的遺傳育種中，所述遺傳育種為培育低腹脂肉雞；(3)、所述雞nrg4基因近端啟動子受特定轉錄因子cebp/α的調控。
10、本專利技術具有以下技術效果及優(yōu)點：本專利技術提供的這4種雞nrg4基因近端啟動子在雞胚成纖維細胞中都具有啟動子活性，說明這4種啟動子都能直接調控雞nrg4轉錄表達，通過過表達c/ebpα能夠促進這4種啟動子的活性。同時，本專利技術提供的雞nrg4基因近端啟動子a1具有雙向啟動子活性；同時，本專利技術還驗證了雞nrg4基因近端啟動子受到特定轉錄因子c/ebpα的調控，這對于揭示雞nrg4的轉錄調控機制、培育低腹脂肉雞、以及揭示多種人類疾病發(fā)生背后的分子機制和開發(fā)靶向nrg4表達的藥物具有潛在應用價值及實用價值。
本文檔來自技高網(wǎng)...【技術保護點】
1.一種雞NRG4基因近端啟動子，其特征在于，所述雞NRG4基因近端啟動子為核苷酸序列如SEQ?ID?NO：1-SEQ?ID?NO：4所示的A1-A4序列中的任意一條。
2.如權利要求1所述的一種雞NRG4基因近端啟動子，其特征在于，所述雞NRG4基因近端啟動子A1序列其具有雙向啟動子活性。
3.一種引物組，其特征在于，用于擴增如權利要求1所述的雞NRG4基因近端啟動子，所述引物組包括：
4.一種試劑盒，其特征在于，包括如權利要求3所述的引物組。
5.一種如權利要求1所述的雞NRG4基因近端啟動子的構建方法，其特征在于，包括以下步驟：以雞全血中提取的DNA作為模板，采用如權利要求3所述的引物組進行PCR擴增，獲取雞NRG4基因近端啟動子。
6.一種重組載體，其特征在于，包括如權利要求1所述的雞NRG4基因近端啟動子。
7.一種重組菌，其特征在于，包括權利要求6所述的重組載體。
8.一種如權利要求1所述的雞NRG4基因近端啟動子的應用，其特征在于，應用于如下任一項中：(1)、應用于啟動螢火蟲熒光素酶
...【技術特征摘要】
1.一種雞nrg4基因近端啟動子，其特征在于，所述雞nrg4基因近端啟動子為核苷酸序列如seq?id?no：1-seq?id?no：4所示的a1-a4序列中的任意一條。
2.如權利要求1所述的一種雞nrg4基因近端啟動子，其特征在于，所述雞nrg4基因近端啟動子a1序列其具有雙向啟動子活性。
3.一種引物組，其特征在于，用于擴增如權利要求1所述的雞nrg4基因近端啟動子，所述引物組包括：
4.一種試劑盒，其特征在于，包括如權利要求3所述的引物組。
5.一種如權利要求1所述的雞nrg4基因近端啟動子的構建方法，其特征在于，包括以下步驟...
【專利技術屬性】
技術研發(fā)人員：牟芳，羅昊玉，王寧，李輝，
申請(專利權)人：東北農(nóng)業(yè)大學，
類型：發(fā)明
國別省市：
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