【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及一種雙特異性抗體構建體，其包含結合到靶細胞表面上的人dll3的第一結合結構域和結合到t細胞表面上的人cd3的第二結合結構域。此外，本專利技術提供一種編碼所述抗體構建體的多核苷酸、包含所述多核苷酸的載體和用所述多核苷酸或載體轉化或轉染的宿主細胞。此外，本專利技術提供一種用于產生本專利技術的所述抗體構建體的方法、所述抗體構建體的醫療用途和包含所述抗體構建體的試劑盒。
技術介紹
1、小細胞肺癌(sclc)是具有不良預后和有限的治療選項的肺癌的侵襲性形式，其占所有新近診斷的肺癌的約15％且每年在美國出現約25,000例新病例，并且在全世界范圍內出現180,000例新病例。在過去幾十年，存活率保持較低，其中僅5％?sclc患者存活五年，大部分歸因于缺乏可對抗此肺癌形式的新療法。大部分患者具有廣泛期疾病，而約三分的一患者具有局限期疾病，此由僅一側胸腔中存在腫瘤且適合單輻射場來定義。這些階段影響可用的治療方案，其中局限期疾病用化學療法和輻射來治療，而廣泛期疾病用單獨的化學療法治療。具有淋巴瘤樣特征的散播性、轉移性腫瘤為sclc的標志。sclc患者的第一例已知診斷將其描述為淋巴系統疾病，在1926年以前并未識別為肺癌，而其強調sclc腫瘤與其他實體瘤相比的一些獨特性質。
2、患者通常對當前一線療法響應良好，該一線療法包括依托泊苷和順鉑，但始終快速復發，而產生化療抗性疾病，對此，目前沒有可用的治療選項。復發性難治性情形中的預后極差，其中存在快速疾病進展和不到六個月的短中值存活期。此外，sclc患者具有高共病率，包括高血壓
3、包含識別在t細胞上表達的cd3的scfv和識別腫瘤相關抗原的另一scfv的雙特異性抗體形式已展示出有前景的臨床功效，在諸如難治性b-all的惡性血液病中具有高響應率(topp,m.s.等人blood,2012.120(26):第5185-5187頁)，從而使blincyto獲得批準。盡管在實體瘤適應癥中尚未證明t細胞接合性(t?cell-engaging?therapy)的功效，但鑒于疾病的散播性，sclc可代表cd3?x腫瘤靶標雙特異性抗體形式的有前景的實體瘤適應癥。因此，引導t細胞針對特異性腫瘤抗原的雙特異性t細胞接合體(engager)帶來了作為sclc治療中的新治療選項的新機會。
4、通過下一代測序，對一組原發性患者腫瘤和一大批正常組織中dll3?mrna的普遍性進行比較，當前將dll3鑒定為sclc特異性腫瘤抗原。sclc腫瘤中的dll3表達水平為適中的，但極普遍，其中通過rna-seq測得所分析的腫瘤中的約90％展示出dll3表達的證據。與sclc腫瘤相反，正常組織展示出極低的dll3轉錄物表達，其中在睪丸、視神經和小腦中檢測到少量表達。通過rna-seq進行的sclc細胞系與腫瘤的比較顯示出類似的表達水平，而sclc細胞系上dll3表達的細胞表面定量指示表達水平低于5000dll3/細胞，其中典型表達水平低于2000dll3/細胞。通過ihc確認了dll3蛋白質的表達，其中86％的sclc腫瘤顯示出dll3陽性染色，具有均質和膜性染色圖案。除小腦中的極暗淡的染色以外，所有其他正常組織均對dll3染色呈陰性。
5、dll3為非典型notch配體，以細胞自發方式發揮抑制notch信號傳導的功能，順式結合到notch，由此阻斷細胞與細胞的相互作用和靶細胞中notch的內化(典型notch信號傳導的標志)。dll3的主要作用是在胚胎發育期間的體節發生。dll3敲除小鼠在中軸骨和顱腦及神經元發育中展示節段性缺損。也在具有某些種系dll3突變的人中發現體節模式形成缺陷(somitic?patterning?defect)，引起稱為脊椎肋骨發育不全的病狀。
6、先前已在使用抗體-藥物偶聯物(adc)的診斷和治療除sclc以外的膠質瘤的方法中提出dll3(wo?2013/126746)。鑒于細胞表面上蛋白質的低表達水平以及低表達情況下adc降低的針對靶標的性能，將基于adc的方法用于dll3可能具有局限。此外，adc分子通常顯示與自由彈頭(free?warhead)有關的毒性(可能為接頭降解的結果)，從而導致最大耐受劑量限制和對與針對抗體所選擇的靶標無關的功效的潛在影響。鑒于t細胞對其靶標的所需敏感性，這對于t細胞接合性雙特異性分子(經工程改造以同時接合dll3和cd3)不大可能成為問題，且已在每個細胞表達數百種靶標蛋白質的細胞系上顯示出強效的體外細胞毒性。此外，由于dll3和cd3靶標的更有效接合，雙特異性t細胞接合性抗體構建體相對于正?？贵w(全長igg)而言通常較小的尺寸就可改善組織滲透并增強效能，從而引起t細胞與靶標腫瘤細胞之間改善的突觸形成。
7、sclc仍為遠未滿足的醫學需求，且需要新的治療選項以改善此相當大的患者群體的展望。上文論述的雙特異性抗體形式得到了臨床驗證，且因此靶向dll3和cd3的抗體構建體代表治療sclc的有前景的新的可能和改善罹患此適應癥的患者的存活的機會。由于仍需要用于治療與dll3的過表達有關的腫瘤或癌癥疾病的其他可用選項，在此提供以雙特異性抗體構建體的形式解決此問題的手段和方法，所述雙特異性抗體構建體具有針對dll3的一個結合結構域和針對t細胞上的cd3的第二結合結構域。
技術實現思路
1、因此，在第一方面，本專利技術提供雙特異性抗體構建體，其包含結合到靶細胞表面上的人dll3的第一結合結構域和結合到t細胞表面上的人cd3的第二結合結構域，其中第一結合結構域結合到如seq?id?no:260所描繪的區域內所含的dll3的表位。
2、必須注意，如本文所用，除非上下文另外明確指示，否則單數形式“一個/種”和“該/所述”包括復數個提及物。因此，例如，對“一種試劑”的提及包括此類不同試劑中的一者或多者，且對“該方法”的提及包括本領域的普通技術人員已知的可針對本文所述的方法進行修改或代替的等效步驟和方法的提及。
3、除非另外指示，否則在一系列要素之前的術語“至少”應理解為指該系列中的每一要素。本領域的技術人員將認識到或能夠僅使用常規實驗就能確定本文所述的本專利技術的特定實施方案的許多等效形式。本專利技術旨在涵蓋此類等效形式。
4、每當在本文中使用時，術語“和/或”包括“和”、“或”和“由所述術語連接的要素的所有或任何其他組合”的含義。
5、如本文所用，術語“約”或“大致”意指在給定值或范圍的±20％內，優選±15％內，更優選±10％內且最優選±5％內。
6、在本說明書通篇和隨后的權利要求中，除非上下文另有要求，否則詞語“包含(comprise)”和諸如“包括(comprises)”和“含有(comprising)”的變化形式應理解為暗示包括所述整數或步驟或整數或步驟的組，但不排除任何其他整數或步驟或整數或步驟的組。在本文中使用時，術語本文檔來自技高網...
【技術保護點】
1.一種雙特異性抗體構建體，其包含結合靶細胞表面上的人DLL3的第一結合結構域和結合T細胞表面上的人CD3的第二結合結構域，其中所述第一結合結構域結合SEQ?ID?NO:260內所含的DLL3的區域，并且其中所述第一結合結構域包含VH區和VL區，所述VH區含有選自以下項的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3，所述VL區含有選自以下項的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3：
2.根據權利要求1所述的抗體構建體，其中所述第一結合結構域進一步結合獼猴DLL3。
3.根據權利要求1所述的抗體構建體，其中所述第二結合結構域結合人CD3ε并且結合恒河猴CD3ε。
4.根據權利要求1所述的抗體構建體，其中所述第一結合結構域包含選自SEQ?ID?NO:177、SEQ?ID?NO:187、SEQ?ID?NO:197和SEQ?ID?NO:207的VH區。
5.根據權利要求4所述的抗體構建體，其中所述第一結合結構域包含選自SEQ?ID?NO:178、SEQ?ID?NO:188、SEQ?ID?NO:198和SEQ?ID?NO:208的VL區。>
6.根據權利要求5所述的抗體構建體，其中所述第一結合結構域包含VH區和VL區，所述VH區和VL區包含分別選自以下的氨基酸序列對：SEQ?ID?NO:177和178；SEQ?ID?NO:187和188；SEQ?ID?NO:197和198；和SEQ?ID?NO:207和208。
7.根據權利要求6所述的抗體構建體，其中所述第一結合結構域包含選自以下的多肽：SEQ?ID?NO:179、SEQ?ID?NO:189、SEQ?ID?NO:199和SEQ?ID?NO:209。
8.根據權利要求1至7中任一項所述的抗體構建體，其包含選自以下的多肽：SEQ?IDNO:180、SEQ?ID?NO:190、SEQ?ID?NO:200和SEQ?ID?NO:210。
9.根據權利要求1所述的抗體構建體，其中所述抗體構建體呈(scFv)2的形式。
10.根據權利要求1所述的抗體構建體，其中所述抗體構建體呈scFv-單結構域mAb的形式。
11.根據權利要求1所述的抗體構建體，其中所述第一結構域、所述第二結構或兩者均是Fab形式。
12.一種雙特異性抗體構建體，其包含結合靶細胞表面上的人DLL3的第一結合結構域和結合T細胞表面上的人CD3的第二結合結構域，其中所述第一結合結構域包含VH區和VL區，所述VH區含CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3，所述VL區包含CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3，其中所述CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3分別包含SEQ?ID?NO:31、SEQ?ID?NO:32和SEQ?ID?NO:33的氨基酸序列，并且其中所述CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3分別包含SEQ?ID?NO:34、SEQ?ID?NO:35和SEQID?NO:36的氨基酸序列。
13.根據權利要求12所述的抗體構建體，其中所述第一結構域的所述VH包含與SEQ?IDNO:435至少90％相同的序列，并且其中所述第一結構域的所述VL包含與SEQ?ID?NO:436至少90％相同的序列。
14.根據權利要求11或12所述的抗體構建體，其中所述第一結構域的所述VH包含與SEQID?NO:435至少90％相同的序列，并且其中所述第一結構域的所述VL包含與SEQ?ID?NO:436至少94％相同的序列。
15.一種多核苷酸，其編碼權利要求中1-14中任一項所述的抗體構建體。
16.一種載體，其包含權利要求15所述的多核苷酸。
17.一種宿主細胞，其用權利要求15所述的多核苷酸或用權利要求16所述的載體轉化或轉染。
18.一種用于產生根據權利要求1至14中任一項所述的抗體構建體的方法，所述方法包括在允許所述抗體構建體表達的條件下培養權利要求17所述的宿主細胞，和從所述培養物回收所產生的抗體構建體。
19.一種藥物組合物，其包含根據權利要求1至14中任一項所述的抗體構建體或根據權利要求18所述的方法產生的抗體構建體和一種或多種載劑。
20.一種試劑盒，其包含根據權利要求19所述的藥物組合物。
21.根據權利要求20所述的試劑盒，還包含用于預防、治療或改善表達DLL3的腫瘤或癌癥的說明。
22.根據權利要求1至14中任一項所述的抗體構建體在制備用于治療有需要的受試者中的腫瘤、癌癥或轉移性癌癥的藥物中的用途，其中所述腫瘤、癌癥或轉移性癌癥表達DLL3。
23.根據權利要求...
【技術特征摘要】
1.一種雙特異性抗體構建體，其包含結合靶細胞表面上的人dll3的第一結合結構域和結合t細胞表面上的人cd3的第二結合結構域，其中所述第一結合結構域結合seq?id?no:260內所含的dll3的區域，并且其中所述第一結合結構域包含vh區和vl區，所述vh區含有選自以下項的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3，所述vl區含有選自以下項的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3：
2.根據權利要求1所述的抗體構建體，其中所述第一結合結構域進一步結合獼猴dll3。
3.根據權利要求1所述的抗體構建體，其中所述第二結合結構域結合人cd3ε并且結合恒河猴cd3ε。
4.根據權利要求1所述的抗體構建體，其中所述第一結合結構域包含選自seq?id?no:177、seq?id?no:187、seq?id?no:197和seq?id?no:207的vh區。
5.根據權利要求4所述的抗體構建體，其中所述第一結合結構域包含選自seq?id?no:178、seq?id?no:188、seq?id?no:198和seq?id?no:208的vl區。
6.根據權利要求5所述的抗體構建體，其中所述第一結合結構域包含vh區和vl區，所述vh區和vl區包含分別選自以下的氨基酸序列對：seq?id?no:177和178；seq?id?no:187和188；seq?id?no:197和198；和seq?id?no:207和208。
7.根據權利要求6所述的抗體構建體，其中所述第一結合結構域包含選自以下的多肽：seq?id?no:179、seq?id?no:189、seq?id?no:199和seq?id?no:209。
8.根據權利要求1至7中任一項所述的抗體構建體，其包含選自以下的多肽：seq?idno:180、seq?id?no:190、seq?id?no:200和seq?id?no:210。
9.根據權利要求1所述的抗體構建體，其中所述抗體構建體呈(scfv)2的形式。
10.根據權利要求1所述的抗體構建體，其中所述抗體構建體呈scfv-單結構域mab的形式。
11.根據權利要求1所述的抗體構建體，其中所述第一結構域、所述第二結構或兩者均是fab形式。
12.一種雙特異性抗體構建體，其包含結合靶細胞表面上的人dll3的第一結合結構域和結合t細胞表面上的人cd3的第二結合結構域，其中所述第一結合結構域包含vh區和vl區，所述vh區含cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3，所述vl區包含cdr-l1、...
【專利技術屬性】
技術研發人員：T·勞姆，P·庫弗，J·彭澤萊克，C·布魯麥爾，C·達爾霍夫，P·霍夫曼，R·路特布斯，E·納赫沃爾德，
申請(專利權)人：安進研發慕尼黑股份有限公司，
類型：發明
國別省市：
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