【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及特色水果次生代謝物分析檢測領域，特別涉及一種基于代謝組學鑒別滑皮金柑與脆蜜金柑品種的方法及應用。
技術介紹
1、金柑，俗名金桔，是蕓香科(rutaceae)金柑屬(fortunella)果樹，在廣東、廣西等地擁有悠久的種植和食用歷史，在華南其他省份及長江中下游地區也廣為種植。廣西融安縣是金柑的主產區之一，融安金桔(柑)在2007年獲評廣西地理標志保護產品。滑皮金柑是廣西融安主要的傳統種植品種，脆蜜金柑是由滑皮金柑芽變單株選育出的優良金柑新品種，2014年3月通過廣西農作物品種審定委員會審定(桂審果2014003號)。脆蜜金柑具有口感佳、品質優等特點，脆蜜金柑售價約為滑皮金柑的3倍，脆蜜金柑作為極具地方特色的高檔水果，市場潛力巨大。
2、目前，對脆蜜金柑與滑皮金柑的對比研究主要針對果實品質的差異性，如單果重、縱橫徑、果皮厚度及可溶性固形物、蔗糖、總糖、可滴定酸含量和果汁率、油胞數，以及類黃酮、酚酸等功能成分含量差異等。但脆蜜金柑與滑皮金柑生物學特性和物候期基本相似，外觀形態高度相似，難以對兩者進行精準的辨別鑒定。當前，對兩者的辨別主要依據其個頭大小這一外觀形態(脆蜜金柑平均單果重約35.7g，滑皮金柑平均單果重約31.4g)，具有較大的主觀性和經驗依賴性，且當不同等級的兩種金柑相互混雜時，這一判定標準將無法適用。因此，兩種金柑品種的判別對普通消費者而言具有較大難度，對相關從業者而言，經驗式判斷也會影響鑒定結果的準確性和可靠性。
3、代謝組學可以定性和定量地分析生物體內大量內源性代謝物，近年來基
技術實現思路
1、為克服上述現有技術中存在的不足，本專利技術提供了一種基于代謝組學鑒別滑皮金柑與脆蜜金柑品種的方法及應用。
2、本專利技術的第一方面，提供了一種基于代謝組學鑒別滑皮金柑與脆蜜金柑品種的方法，所述的方法包括如下步驟：
3、s1)對金柑樣本進行提取；
4、s2)采用色譜-質譜(lc-ms)聯用儀對步驟s1制得的提取液進行檢測，得到檢測數據；
5、s3)對步驟s2得到的檢測數據進行數據處理與分析，然后計算代謝標志物的相對含量；
6、當金柑樣本中代謝標志物的相對含量閾值滿足如下條件時，判定品種為脆蜜金柑：
7、(-)-香芹酚＝8.63％～11.78％，
8、衣康酸＝0.55％～1.14％，
9、d-葡萄糖醛酸＝0.90％～2.65％，
10、視黃醇＝0.30％～0.58％，
11、4-萜烯醇＝0.49％～1.01％，
12、1,2-環己二醇＝1.01％～1.61％；
13、當金柑樣本中的代謝物相對含量閾值滿足如下條件時，判定品種為滑皮金柑：
14、(-)-香芹酚＝4.63％～5.17％，
15、衣康酸＝0.10％～0.33％，
16、d-葡萄糖醛酸＝0.18％～0.30％，
17、視黃醇＝0.08％～0.20％，
18、4-萜烯醇＝1.31％～2.96％，
19、1,2-環己二醇＝2.32％～5.54％。
20、在本專利技術的一個實施方式中，當金柑樣本中代謝標志物的相對含量閾值(％)滿足如下條件時，判定品種為脆蜜金柑：
21、(-)-香芹酚＝10.205±1.575，
22、衣康酸＝0.845±0.259，
23、d-葡萄糖醛酸＝1.775±0.875，
24、視黃醇＝0.440±0.140，
25、4-萜烯醇＝0.750±0.260，
26、1,2-環己二醇＝1.310±0.300；
27、當金柑樣本中代謝標志物的相對含量閾值(％)滿足如下條件時，判定品種為滑皮金柑：
28、(-)-香芹酚＝4.900±0.270，
29、衣康酸＝0.215±0.115，
30、d-葡萄糖醛酸＝0.240±0.060，
31、視黃醇＝0.140±0.060，
32、4-萜烯醇＝2.060±0.750，
33、1,2-環己二醇＝3.930±1.610。
34、進一步地，所述的步驟s1前還包括采集金柑樣本的步驟，具體為采集脆蜜金柑樣本和滑皮金柑樣本，將脆蜜金柑樣本和滑皮金柑樣本切碎、速凍，于-60℃至-100℃保存。
35、在本專利技術的一個實施方式中，所述的步驟s1前還包括采集金柑樣本的步驟，具體為采集脆蜜金柑樣本和滑皮金柑樣本，將脆蜜金柑樣本和滑皮金柑樣本切碎后經液氮速凍，于-80℃條件下保存。
36、進一步地，所述的步驟s1包括將金柑樣本與內標液混合、振蕩、研磨、超聲和離心的步驟，然后將離心所得的上清液進行膜過濾，得到過濾液。
37、在本專利技術的一個實施方式中，所述的步驟s1包括：精確稱量適量金柑樣本于2ml的離心管中，加入含2-氯-l-苯丙氨酸(4ppm)的甲醇600μl，渦旋振蕩30s；加入鋼珠，放入組織研磨器中，55hz研磨60s；室溫超聲15min；12000rpm?4℃離心10min，取上清液過0.22μm膜過濾，過濾液加入到檢測瓶中，用于lc-ms檢測。
38、進一步地，步驟s2中的色譜檢測為對步驟s1制得的提取液同時采用正離子模式(a)和負離子模式(b)進行色譜檢測：
39、(a)正離子模式，流速：0.3ml/min，柱溫：40℃，a相：0.1％甲酸水溶液，b相：0.1％甲酸乙腈，梯度洗脫流程：0～1min，8％b；1～8min，8％～98％b；8～10min，98％b；10～10.1min，98％～8％b；10.1～12min，8％b；
40、(b)負離子模式，流速：0.3ml/min，柱溫：40℃，a相：5mm甲酸銨水溶液，b相：乙腈，梯度洗脫流程：0～1min，8％b；1～8min，8％～98％b；8～10min，98％b；10～10.1min，98％～8％b；10.1～12min，8％b。
41、進一步地，步驟s2中的質譜檢測為對步驟s1制得的提取液同時采用正離子模式(c)和負離子模式(d)進行質譜檢測：
42、(c)正離子模式，正離子噴霧電壓為3.50kv，鞘氣40arb，輔助氣10arb，毛細管溫度325℃，以分辨率70000進行一級全掃描，一級離子掃描范圍m/z?100～1000，并采用hcd進行二級裂解，碰撞能量為30ev，二級分辨率為17500，采集信號前3離子進行碎裂，同時采用動態排除去除無必要的ms/ms信息。
43、(d)負離子模式，負離子噴霧電壓本文檔來自技高網...
【技術保護點】
1.一種基于代謝組學鑒別滑皮金柑與脆蜜金柑品種的方法，所述的方法包括如下步驟：
2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟S2中的色譜檢測為對步驟S1制得的提取液同時采用正離子模式(a)和負離子模式(b)進行色譜檢測：
3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟S2中的質譜檢測為對步驟S1制得的提取液同時采用正離子模式(c)和負離子模式(d)進行質譜檢測：
4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟S3中所述的代謝標志物的相對含量為該物質含量占樣本中檢測到所有物質總含量的比值，以峰面積的比值表示，代謝標志物相對含量的計算方法如下：
5.一種用于鑒別滑皮金柑與脆蜜金柑品種的代謝標志物組合物，其特征在于，所述的代謝標志物組合物包括：(-)-香芹酚、衣康酸、D-葡萄糖醛酸、視黃醇、4-萜烯醇、1,2-環己二醇。
6.一種如權利要求5所述的用于鑒別滑皮金柑與脆蜜金柑品種的代謝標志物組合物的篩選方法，所述的篩選方法包括以下步驟：
7.根據權利要求6所述的方法，其特征在于，步驟S3所述的數據處理與分析，包括對
8.根據權利要求7所述的方法，其特征在于，所述的多元統計分析包括如下步驟：
9.一種如權利要求5所述的代謝標志物組合物在鑒別滑皮金柑與脆蜜金柑品種中的應用。
10.一種如權利要求5所述的代謝標志物組合物在制備用于鑒別滑皮金柑與脆蜜金柑品種的產品中的應用。
...【技術特征摘要】
1.一種基于代謝組學鑒別滑皮金柑與脆蜜金柑品種的方法，所述的方法包括如下步驟：
2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟s2中的色譜檢測為對步驟s1制得的提取液同時采用正離子模式(a)和負離子模式(b)進行色譜檢測：
3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟s2中的質譜檢測為對步驟s1制得的提取液同時采用正離子模式(c)和負離子模式(d)進行質譜檢測：
4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟s3中所述的代謝標志物的相對含量為該物質含量占樣本中檢測到所有物質總含量的比值，以峰面積的比值表示，代謝標志物相對含量的計算方法如下：
5.一種用于鑒別滑皮金柑與脆蜜金柑品種的代謝標志物組合物，其特征在于，所述...
【專利技術屬性】
技術研發人員：羅朝丹，黎新榮，馮春梅，李建強，劉功德，王淋靚，郝小玲，檀業維，姜宗伯，龐春秀，劉帥民，賴園園，岑繼維，石保緯，
申請(專利權)人：廣西壯族自治區亞熱帶作物研究所廣西亞熱帶農產品加工研究所，
類型：發明
國別省市：
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